肉制品中克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺检测方案(固相萃取)

深圳逗点生物技术有限公司一-biocomma biotechco.，ltd. 动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法 (CopureMMCX) 一、实验目的 本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法， LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 二、实验目标物 五种β-受体激动剂物质：克仑特罗(CAS：37148-27-9)，沙丁胺醇(CAS：18559-94-9)，莱克多巴胺(CAS：97825-25-7)， 寺布他林(CAS：23031-25-6)， 妥布特罗(CAS：41570-61-0)。 三、应用范围 本方法适用于动物源性食品中β-受体激动剂LC-MS/MS检测及确证。 四、参考标准 《GB/T 21313-2007动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。 五、实验材料 Biocomma° CopureMMCX固相萃取柱200mg/6mL(Cat.No.COMCX6200)。 六、实验方法 1、样品提取 称取均质猪肉试样10.0 g试样(精确至0.01 g)， 加入15 mL pH 5.2的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆1min， 再加入β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液100 pL，于37℃±1℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10℃9500 r/min离心10 min。取全部上清液。待净化。 2、SPE柱净化 (1)活化：加入6mL甲醇、6mL水、6 mL 0.1 mmol/L高氯酸(pH4.0)溶液活化。 (2)上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用2 mL甲醇、2 mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7 mL5%氨化甲醇洗脱。 (3)重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至1.0 mL，涡旋混匀1 min， 用于LC-MS/MS测定。 2、LC-MS/MS条件 色谱柱： Venusil ASB C18(2.1×150mm， 5um)； 质谱仪： API4000 流动相：A：0.1%甲酸水溶液 B：甲醇溶液； 洗脱方式：梯度洗脱 ( 版本号： M CX-001-1 ) 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min A(%) B(%) 0.00 5 95 4.00 50 50 6.00 10 90 8.00 95 5 8.01 5 95 12.00 5 95 流速：0.2 mL/min 柱温：40℃ 进样体积：2uL 质谱仪：API4000 离子源：电喷雾(ESI) 扫描模式：正离子 检测方式：多反应监测(MRM) 表2质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(GAD) 10 Curtain Gas(CUR) 30 lon Source Gas 1(GS1) 50 lon Source Gas 2(GS 2) 50 lon Spray Voltage(IS) 5500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) On 表3B-受体激动剂的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间(min) 检测离子对 DP EP CE CXP 特布他林 3.77 226.0/151.7 60 10 16 12 226.0/169.8 60 10 12 12 克伦特罗 5.82 227.1/202.9 60 10 23 12 277.1/259.0| 60 10 15 12 莱克多巴胺 5.45 302.1/163.7| 60 10 23 12 302.1/284.2 60 10 19 12 沙丁胺醇 3.86 240.1/147.8 60 10 18 12 240.1/221.9 60 10 12 12 妥布特罗 6.17 227.9/153.8 60 10 16 12 227.9/171.8 60 10 12 12 七、实验结果 1、0.5pg/kg猪肉基质加标回收结果： 表4 0.5pg/kg猪肉基质加标回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 沙丁胺醇 88.62 82.79 81.45 84.29 4.52 克伦特罗 85.32 88.29 86.73 86.73 1.72 莱克多巴胺 86.56 88.33 81.36 85.42 4.24 特布他林 81.95 80.95 87.26 83.39 4.06 妥布特罗 82.64 82.56 88.14 84.45 3.79 2、添加水平为0.5ug/kg猪肉基质中β一受体激动剂检测色谱图 冬1B-受体激动剂待测物总离子流图 图2沙丁胺醇(sabutamal)(240.1/147.8)色谱图 Max. 1.2e4 cps. 5 1特布他林 2沙丁胺醇3莱克多巴胺4克伦特罗 5妥布特罗 图3克伦特罗(clenbutecol)(277.1/202.9)色谱图 图4莱克多巴胺(ractopamine)(302.1/163.7)色谱图 XIC of+MRM(10 pairs)：277.100/202.900 Da ID：clenbutcrol 1 from Sample 7 (q-0.5ppb) of 20… 冬5特布他林(terbutaline)(226.0/151.7)色谱图 图6妥布特罗(tulcbutclol)(227.9/153.8)色谱图 adaaahdw Max. 2.3e4 cps. 6.17 ww.biocomma.cn 版本号：MCX-ww.biocomma.cn 动物源性食品中β-受体激动剂检测的固相萃取方法（Copure MCX）一、实验目的本研究利用固相萃取法作为猪肉样品的前处理方法，LC-MS/MS法作为检测手段。该方法可简化猪肉样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。二、实验目标物五种β-受体激动剂物质：克仑特罗(CAS:37148-27-9)，沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)，莱克多巴胺(CAS:97825-25-7)，特布他林(CAS:23031-25-6)，妥布特罗(CAS:41570-61-0)。三、应用范围本方法适用于动物源性食品中β-受体激动剂LC-MS/MS检测及确证。四、参考标准《GB/T 21313-2007 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》。五、实验材料Biocomma Copure MCX固相萃取柱200mg/6mL(Cat.No.COMCX6200)。六、实验方法1、样品提取称取均质猪肉试样10.0ｇ试样(精确至0.01 g)，加入15 mL pH 5.2的乙酸-乙酸铵缓冲溶液，1000 r/min 匀浆1min，再加入β-葡萄糖醛酸苷肽酶/芳香磺酸酯酶溶液100 μL，于37 ℃±1 ℃振荡酶解过夜。取出冷却后，10 ℃9500 r/min离心10 min。取全部上清液。待净化。2、SPE柱净化(1) 活化：加入6 mL甲醇、6 mL水、6 mL 0.1 mmol/L高氯酸(pH 4.0)溶液活化。(2) 上样和洗脱：当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，过柱，弃去滤液，用2 mL甲醇、2 mL 2%甲醇水溶液淋洗，最后用7 mL5%氨化甲醇洗脱。(3) 重新溶解：洗脱液缓慢氮气流条件下吹至近干，用甲醇-0.1%甲酸水溶液溶解定容至1.0 mL，涡旋混匀1 min，用于LC-MS/MS测定。3、LC-MS/MS条件色谱柱：Venusil ASB C18（2.1×150mm，5 μm）；质谱仪：API 4000流动相：A:0.1%甲酸水溶液 B:甲醇溶液；洗脱方式：梯度洗脱表1 流动相梯度洗脱程序流速：0.2 mL/min柱温：40 ℃进样体积：2 μL质谱仪：API 4000离子源：电喷雾(ESI)扫描模式：正离子检测方式：多反应监测(MRM)表2 质谱仪离子源参数表3 ?-受体激动剂的母离子和子离子参数表七、实验结果1、0.5μg/kg猪肉基质加标回收结果：表4 0.5μg/kg猪肉基质加标回收结果2、添加水平为0.5μg/kg猪肉基质中β-受体激动剂检测色谱图图1 ?-受体激动剂待测物总离子流图图2 沙丁胺醇(sabutamal)(240.1/147.8)色谱图