V-1500差示分光光度法测定药物制剂中的四环素

MacyTechnology-because you change 差示分光光度法测定药物制剂中的四环素 四环素是生物合成的广谱抗菌素。临床研究表明，病人服用四环素后，定时测定体液中四环素含量可诊断胃癌，四环素还可作为荧光探针用以诊断癌症。近年来，四环素还广泛被用作饲料添加剂，以增强动物的抗病能力。关于四环素的测定方法，已有许多报道，如微生物法、分光光度法差示导数光谱法、FIA、RHPL、ISE、吸附SV、三氯化铁比色法等。本文利用四环素与钻离子在PH为11.5的Na2HPO4-NaOH 缓冲溶液中生成黄绿色络合物，并根据其光谱变化的牲性，采用差示光度法不经分离直接测定了药物制剂中的四环素。四环素浓度在0.80-25ug/ml范围内符合比耳定律。 1实验部分 1.1仪器与试剂 美析仪器 v-1500分光光度计； PH-HJ908OB 数字酸度计时北京海淀航天计算机公司)； XYJ80-2离心沉淀机(江苏医疗器械厂)。 盐酸四环素标准液：用标准品(中国药品生物制品检定所提供)配成 2mg / ml的储备液，使用时用水稀释成 0.2mg/ml； 钻离子溶液：用CoCl26H2O配成 1mg/ml的储备液，使用时稀释成 0.1mg / ml； Na2HPO4-NaOH 缓冲溶液。以上试剂均为分析纯，水为市售二次去离子水。 1.2实验方法 于两支25ml 的比色管中，分别加入0.2mg / ml的盐酸四环素标准使用液2.0ml，一支用水稀释至刻度作参比液，另一支加入0.1mg / ml 的钴离子溶液 2ml， Na2HPO4-NaOH 缓冲2ml，用水稀释至刻度。前者置参比池中，后者置样品池中，于405nm处测其吸光度。 2结果与讨论 2.1实验条件的选择 络合物的形成受诸多因素的影响，本文对酸度，缓冲溶液的种类及用量、钴离子的用量、反应温度、反应时间等条件的影响作了讨论。 2.1.1吸收光谱将盐酸四环素标准使用液按实验方法处理后，在380-500nm 波长范围内进行波长扫描。盐酸四环素在 405nm处最大吸收，可作为测定波长。 2.1.2酸度对络合物形成的影响 溶液的酸度对四环素与钴离子生成络合物影响较大。对不同酸度条件下络合物的形成进行了研究，在酸性、中性介质中，络合物不易形成。随着溶液 PH 值的升高，溶液颜色逐渐加深，吸光度逐渐增大。PH在10.5-13.0范围内吸光度最大且稳定；当PH>13.0，络合物的吸光度开始减小，这说明络合物在强碱性介质中开始离解， PH值越大，离解越历害。这是由于大量的OH一和钴离子形成了 Co(OH)的络离子，促使四环素一钴离子络合物离解。故本实验选择 pH11.5。》 2.1.3缓冲溶液种类及用量 缓冲溶液的种类及用量对络合物的形成有一定的影响。在 Na2HPO4-NaOH， H3PO4一柠檬酸一NaOH， NaOH 等不同的缓冲体系中，以在 Na2HPO4-NaOH缓冲液中络合物的吸光度最大且稳定，用量以控制在2ml最为合适，用量太小不利于络合物的形成，太大形成的络合物又开始离解。在 H3PO4柠柠檬酸-NaOH缓冲液中，由于柠檬酸对Co²+有较强的络合能力，消弱了 Co²+与四环素的络合。故本实验选择 Na2HPO4-NaOH 作为缓冲溶液。 2.1.4钴离子用量的影响在 Na2HPO4-NaOH缓冲液中，足够量的Co²+对对络合物的形成是必要的，随钴离子用量的增加，络合物的吸光度了相就增加。钴离子用量在1.5一3.0ml 范围内，吸光度值最大且稳定。故本验选择钴离子的用量为2ml。 2.1.5温度及时间对形成络合物的影响温度升高，吸光度略有减小，同时，随温度升高，络合物的最大吸收波长会发生红移，故本研究选择在室温(20℃)下进行。另外，实验还表明，络合物的形成速度比较快，按实验方法加入试剂后(约需10min)，立刻进行时间扫描，发现1h内络合物的吸光度值的变化仅为0.005， 24h内吸光度值无显著变化，说明生成的络合物很稳定。 2.1.6线性范围在12支25ml的比色管中，依次加入0.1、0.5、1.0、1.5、2.0，2.5ml 盐酸四环素标准工作液各两份，其余按实验方法处理后测定，所得结果线性处理后，线性回归方程为：A=-0.0095+0.0305c(c为四环素的浓度： ug/ml)，相关系数 r=0.9997，e=1.33×104Lmol1.cm1.根据 IUPAC 规定，计算得检出限为0.40ug/ml， 结果表明四环素浓度在 0.80-25ug/ml范围内符合比耳定律。2.2干扰性实验 四环素制剂中加有淀粉、滑石粉、糊精、葡萄糖、硬脂酸镁等赋形剂。按实验方法作同样处理，所有赋形剂的差示光谱在测定波长处无吸收。因此，可以不用任何分离直接测定片剂中四环素的含量。 2.3 回收率测定 精密称取适量已知含量的样品，加入一定量的盐酸四环素标准品，按实验方法处理，用测得的吸光度值减去样品的吸光度，用线性回归方程计算，结果见表1。 表1回收率实验结果 加入量 检测 量 RSD 回收率 (mg) (%) (mg) (n=4)(%) 4.25 4.23 99.5 0.46 4.25 4.31 101.5 0.85 3.75 3.65 1.34 97.8 3.75 3.70 0.72 98.7 3样品的测定 精密称取四环素片10片，分别研成粉末，再适量称取，按前述实验方法处理测定，用回归方程计算其含量，结果见表2。本法较紫外法结果略偏低，经t检验，本法与紫外法间并无系统误差。 表2样品中四环素的测定 样品 (mg/片) (%) (mg/片) 值(mg/片) 1 0.2297 0.47 0.25 0.2308 2 0.2255 1.01 0.25 0.2278 3 0.2455 0.61 0.25 0.2480 4 0.2248 0.75 0.25 0.2265 http：//www.macylab.comTel： Tel： ttp：//www.macylab.com