饲料中苏丹红检测方案(液相色谱柱)

安捷伦1200液相色谱/6410三重串联四极质谱联用测定饲料中苏苏红 (SudanRed)含量 1范围 本方法介绍了饲料中4种苏丹红的液相色谱-三重串联四极质谱的测定。 2试剂 2.1所有试剂均为色谱纯 2.2标准溶液 2.2.1标准储备溶液 分别称取适量(精确至0.1mg)每种苏丹红(Ⅰ、I、III和IV)标准品至10 mL容量瓶中，根据标准品的溶解度选甲醇、乙腈等溶剂溶解并定溶至刻度。 3仪器 Agilent 1200 RRLC (Rapid resolution liquidchromatography，快速高分离度液相色谱)； Agilent 6410 QQQ(三重串联四极杆质谱)。 4测定步骤 4.1测定 4.1.1色谱条件 a)色谱柱： Agilent SB-C18， 2.1× 50 mm，1.8 om： c)进样量：2cL； d)流动相及流速见表1： e)后运行时间：6min； 4.2.2质谱条件 a)电离源模式：电喷雾离子化( ESI)； b)电离源极性：正模式； c)雾化气：氮气； d)雾化气压力：50psi； e)离子喷雾电压：4000V； f)干燥气温度：350℃； g)干燥气流速： 10L/min； h)分辨率： Q1(unit) Q3 (unit)； 4.2.3定性测定 在相同实验条件下进行样品测定，如果样品中检出色谱峰的保留时间与基质标准中某种药品及相关化学品色谱峰的保留时间一致，并且在扣除背景后所选择的两对离子及丰度比也一致，则可判定样品中存在这种苏丹红残留。 4.2.4定量测定 本方法中 LC/MS/MS采用外标校准曲线法进行定量测定，并且所测样品中苏丹红残留的响应值均在线性范围内。 表1.流动相及流速选择 步骤 总时间/min A： 水 (0.1%甲酸)/(%) B：乙腈(0.1%甲酸)/(%) 流速/(mL/min) 1 0 40 60 0.4 2 5 0 100 0.4 3 9 0 100 0.4 4 9.1 40 60 0.4 5结果计算 LC-QQQ测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果由Mass Hunter 定量软件 QuantitativeAnalysis 计算生成。苏丹红线性浓度范围分别为I： 0.1-100ng/mL， R2=0.996；II： 0.1-100ng/mL， R2=0.973； III： 0.5-100ng/mL， R2=0.983 和 IV： 0.5-100 ng/mL， R2=0.994。所有线性权重皆为 1/y2。 4种苏丹红保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量见表2。 表2.4种苏丹红保留时间、监测离子对、源内碎裂电压以及碰撞气能量 序号 英文名称 保留时间/min 定量离子 定性离子 源内碎裂电压/V 碰撞气能量/V 检出限(cg/kg) 苏丹红1 5.08 249/93 249/93；249/156 120 25；15 0.02 2 苏丹红Ⅱ 6.61 277/121 277/121；277/156 100 20；15 0.02 3 苏丹红Ⅲ 7.43 353/77 353/77；353/156 140 25；20 0.1 4 苏丹红IV 8.57 381/91 381/91；381/224 100 30；20 0.3 4种苏丹红标准品的线性结果见图1 4种苏丹红标准品 0.5 ng/mL 的总离子流图与 MRM 定量离子流图，见图2： 图2.4种苏丹红标准品 0.5 ng/mL的总离子流图与 MRM定量离子流图 谷物基质中4种苏丹红的总离子流图与 MRM 定量离子流图，见图3 图3.谷物基质中4种苏丹红的总离子流图与 MRM定量离子流图