植物中粗脂肪检测方案(冷水机)

海：能能仪 器民族仪器 品质典范 植物中粗脂肪的测定 脂肪是各种脂肪酸的甘油三酸脂，植物中脂肪是各种甘油三酸脂的混合物。虽然各种脂肪酸的不饱和性，碳链长短以及结构等不相同，但其共同点是不溶于水而易溶于许多有机溶剂中。因此可用有机溶剂(乙醚沸点34.5℃或石油醚沸程为30—60℃等)。用试样的失重(残余法)来测定脂肪含量。浸提时除脂肪外还包括一些类脂如脂肪酸、磷脂，糖脂以及脂溶性色素和维生素等，故称为“粗脂肪”。本实验除了介绍谷物、油料作物种子(1983)和饲料(1987)中粗脂肪测定的国家标准油重法(使用索氏浸提器)外，还介绍了适用于大批样同时测定的的余法。 1油重法(索氏提取法) 原理： 油重法的原理是将样品置于索氏脂肪抽提器中，反复经乙醚(或石油醚)抽提，使脂肪完全溶解于溶剂中，然后加热除去溶剂，称重，即可算出样品中粗脂肪百分含量。由于样品中类脂物质亦溶解于此溶剂中，故称粗脂肪含量，也是国际标准推荐法，仲裁时以此油重法为准。本法所得结果准确、稳定，其缺点是费时，一般须10小时以上，而且一套仪器只能测定一个样品，不适于大批样品的分析。 主要仪器： (1)分析天平：感量0.0001g (2)粉机机、研钵、切片机 (3)电热式恒温水浴：(6或8孔式)。 (4)烘箱。 (5)滤纸筒：直径22mm，长100mm。 (6)装有变色硅胶的干燥器。 0 试剂： 无水乙醚：化学纯。 操作步骤： (1)样品的选取和制备：选取有代表性的油料种子，拣出杂质，按四分法缩减取样。小粒种子，如芝麻、油菜等，取样量不得少于25g；大粒种子如大豆、花生仁等，取样量不得少于30g。大豆经105±2℃烘干1小时后取出，放入干燥器内冷却至室温。粉碎，并通过40目筛；花生仁切碎。带壳油料种子，如花生果，蓖麻籽，向日葵籽等，需将壳与籽粒分开，分别称量，计算出仁率。然后测定籽粒的油分。制备完毕，立即混合均匀，装入磨口瓶中备用。 (2)研磨与称样：称取备用样品2—4g两份，(含油0.7-1.0g)， 准确至0.001g。置105+2℃烘箱中干燥1小时，取出，放入干燥器内冷却至室温。同时测试样的水分。将试样在研钵内研细，必要时加适量纯石英砂研磨，用牛角勺将研细的试样移入已干燥的滤纸筒，取少量脱脂棉蘸乙醚擦净研钵、研杆和牛角勺上的样品和油迹，一并投入滤纸筒内(大豆已预先烘干粉碎可直接称样装筒)，在试样面层塞以脱脂棉，以防样品损失，将滤纸筒投入抽提管内。每个抽提器只放一个单样。 3)在装有2—3粒沸石并已烘至恒重的洁净的抽提瓶内，加入约瓶体积1/2的无水乙醚，把抽提器各部分连接起来，连接好冷凝水流，调节水浴温度，使冷凝下滴的乙醚速度180滴/分(水浴温度约在55℃以下，(注)一般条件下只用45—50℃，120滴/分比较安全。)，谷物、大豆样品抽提8小时，一般油料抽提 10小时，有些含油量很高的油料种子，应延长抽提时间，直到抽提管内的乙醚用滤纸试验无油迹时为止。 (4)抽提完毕后，从抽提管中取出滤纸筒，再连接好抽提器，在水浴上蒸馏回收抽取瓶中的乙醚。然后取出抽提瓶，在沸水浴上蒸去残余的乙醚。 (5)将盛有粗脂肪的抽提瓶放入105±2℃烘箱中烘干1小时，放入干燥器中冷却至室温(约45—60分钟)后称重， 准确至0.0001g， 再烘30分钟，冷却、称重，直至恒重。抽提瓶增加的重量即为粗脂肪的重量。抽出的油应是清亮的，否则应重做。 结果计算： 粗脂肪%(干基)=粗脂肪重(g)/试样重(g)x100 带壳的油料种子粗脂肪%=子仁粗脂肪x出仁率% 平行测定的结果用算术平均值表示，保留小数点后两位。平行测定结果的相对误差。大豆不得大于2%，油料作物种子不得大于1% 2残余法 原理 残余法是基于样品经溶剂反复抽提后，使全部脂肪除去，再从样品剩余的残渣量计算出粗脂肪含量。 主要仪器 (1)索氏型脂肪抽提器。 (2)样品筛：20目、40目各一个。 (3)称样瓶：直径3.5cm，高7cm。 (4)培养皿：直径11—13cm。 (5)滤纸：中速或慢速。 (6)乳胶手套或白纱手套。 其他仪器与试剂同上节4—5.1 操作步骤 (1)样品的选取和制备：选取具有代表性的谷物或油料种子，拣出杂质，按四分法缩减取样。小粒种子如油菜、芝麻等取样量不得少于 10g；大粒种子，如大豆、花生仁等取样量不得少于15g；谷物种子取样量不少于5g。将样品预先在80℃烘箱中干燥约2小时，以便制备样品。谷类、大豆、油沙豆经粉碎后，95%通过40目筛；油菜籽、胡麻籽、红花种子经粉碎后，95%通过20目筛；花生仁、蓖麻仁等用切片或小刀切成 0.5mm 以下薄片。芝麻用碾磨机或研钵细心磨碎，注意不要留有整粒，向日葵种子经剥壳后，子仁粉碎至均匀粉状。样品处理完毕，立即混合均匀，装入磨口瓶中备用。 (2)将滤纸裁成 7x7cm 大小(谷类可增大些)，并叠成一端不封口的纸包，用铅笔编号码，顺序排列在培养皿中，每每10—20包，然后将放好滤纸包的培养皿放入105℃±2℃烘箱中干燥2小时，取出放入干燥器中冷却至室温，分别将各包放入同一个称量瓶中称重(a)(注1) (3)用牛角勺将已制备好的样品小心地装入滤纸包中(注2)，谷物3—5g，油料1g左右，封上包口，并按原顺序号排列在培养皿中，放入105±2℃烘箱中，干燥 3小时，然后放入干燥器中冷却至室温，分别将各包在原称量瓶中称量(b)， 注3) (4)抽提：将样品包有顺序地装入抽提筒中，抽筒内最多放40包。倒入无水之醚(注4)，使超过样品高度，连接好抽提器各部分，先浸泡一夜。次日，将浸泡后的乙醚放入抽提瓶中，并在提提瓶中放入几粒玻璃或浮石，然后重新倒入无水乙醚入抽提筒，使其完全浸泡样品，连接好抽提器的各部分，接通冷凝水，水浴锅加温进行抽提，调节水浴温度使其冷凝下滴至乙醚呈连珠状(乙醚回流量可为每分钟20ml)，水浴温度可在55℃以下。一般如此须抽提6—8小时，抽提时的室温以15—25℃为宜，不同油料种子抽提时间见附表。抽提完毕，放出抽提筒中的乙醚，取出样包，放在毒气厨内通风凉干，使乙醚挥发。 (5)将样品按原顺序排列在培养皿中，放入105℃±2°烘箱中干燥3小时，取出放入干燥器冷却至室温，再将各包在原称量瓶中称重(C)，这次称重与第二次称重之差即为粗脂肪重。 结果计算：粗脂肪(干基)-(b-c)/(b-a)x100 a一为称量瓶+滤纸重(g)； b一为为量瓶+滤纸重+烘干样重(g)； c— 为称量瓶+滤纸重+抽提后残渣重(g)； 注释： (注1)全部操作过程须戴乳胶手套或白纱手套，称量瓶要用纱或绸布擦净内外的灰尘及纤维等，并须经常校正重量，使其重量误差限制在0.001g 之内。(注2)油重法也可用滤纸包代替滤纸筒。 注3)称量时，室内相对湿度应在70%以下，每个干燥器内只装一盘样品。 (注4)乙醚在空气中易吸氧并形成过氧化物，它很不稳定，：，可因受热(如乙醚蒸馏或蒸发时)震动而发生爆炸，，故使用乙醚须十分小心注意： ①切不可明火加热，不得接近任何火源，实验室保持良好通风。②使用之前，应检查乙醚中过氧化物是否存在，若有应除去。③乙醚应装在棕色瓶中，尽量装满。 附：关于使用乙醚的注意事项 1.乙醚中过氧化物的检查：用碘化钾法试验乙醚中过氧化物，可将10ml乙醚装入具塞的无色玻璃量筒中，加1ml新配制的10%KI溶液，在没有直射阳光下，对着白色背景从横断方向观察，两层均应无色。 另取9ml乙醚加入1ml饱和KI溶液，振摇，如醚层出现黄色，则其中含有0.0005%的过氧化物，则应经处理才能使用。 2.乙醚中过氧化物阻化、抑制与除去。贮存乙醚时，可加入阻化剂以阻止其氧化，如使乙醚与活性碳或活性氧化铝保持接触，可以防止贮存中的乙醚发生爆炸；或在100ml乙醚中加 0.0001g苯三酚，可阻止过氧化物的形成达两年之久。除去过氧化物可将500ml乙醚放入1L分液漏斗中，加入15ml20%硫酸亚铁铵溶液， 5ml1：1硫酸，8ml蒸馏水，振动数分钟，分层后弃去水，相同法再洗1-2次，直至过氧化物除尽为止，最后用蒸馏水每次 100ml洗涤两次，将洗好的乙醚放至带磨口塞的棕色瓶中，加无水氯化钙过夜，次日蒸馏收集馏出液。除去乙醚中过氧化物试剂，常用的还有硫酸亚铁、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、氯化 亚锡、锌与酸、钠与醇、铜与锌，高锰酸钾，氢氧化银和二氧化铅等。 --