肉制品中农兽药残留检测方案

实NW°ieSPE应用57www.anpel.com.cn·Fax： 021-54248311· Tel： 021-54890099 动物源性食品(猪肉、猪肝、鸡蛋、虾、牛奶)中76种兽药(β-受体激动剂类、磺胺类、苯二氮卓类、硝基咪唑类、苯并咪唑类、三苯甲烷类)残留量的制样和液相色谱-质谱测定。 样品前处理步骤： 样品提取： 准确称取5g均匀试样，加入30mL 乙腈、2mL异丙醇 10 mL0.1M柠檬酸缓冲溶液(pH2.5， 含0.1M氯化镁)提取目标物，离心后上清液加入6mL异丙醇，40℃的温度下旋转浓缩至5mL左右。在4℃下8500 r/min 冷冻离心 10 min， 过 0.45 um滤膜SPE 活化：CNW Poly-Sery HLB 小柱(订货号 SBEQ-CA3179)和 CNW Poly-Sery MCX 小柱(订货号： SBEQ-CA3279)串联， 分别用3mL甲醇，3mL水和3mL上述柠檬酸缓冲液上样：2 mL/min 流速v淋洗：3mL上述柠檬酸缓冲液、3mL水、3mL5%甲醇水液， 抽干5minv 洗脱： 4mL甲醇和6mL5%氨水甲醇；在40±2℃的温度下氮吹至干，用1.0 mL 含0.1%甲酸的5%甲醇水溶液振荡溶解残渣后，过0.22 um滤膜 76种兽药标准物质的总离子流色谱图 HPLC-MS/MS条件： a)色谱柱： C18柱，150 mm×4.6 mm(i.d.)，粒径3.0um或相当者； b)流动相： A：含0.1%甲酸的乙腈； B：含0.1%甲酸2mmol/L乙酸铵水溶液+甲醇 (95+5，V1+V2)； 流速： 600 uL/min，梯度洗脱程序见表1； c)主温： 35℃； d)进样量： 20mL。 表1.梯度洗脱程序表 梯度时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0 100 3.0 25 75 4.0 40 60 7.0 50 50 9.0 50 50 13.0 100 0 18.0 100 0 18.5 100 23.0 0 100 扫描方式：多反应监测MRM； 1)电喷雾电压(IS)：4500V； 2)化气压力(GS1)： 448.175kPa(65Psi)； 3)气帘气压力(CUR)：206.85kPa (30Psi)； 4)辅助气压力(GS2)： 482.65kPa(70 Psi)； 5)碰撞气压力(CAD)： 34.475kPa(5Psi)； 6)离子源温度(TEM)：550℃； 7)碰撞室入口电压(EP)为10V、碰撞室出口电压 (CXP)为13V。 表2.对虾、猪肉、猪肝、奶、蛋等5种食品基质进行76种兽药添加回收实验结果 检测限(ug/Kg) 添加回收浓度i(ug/Kg) 回收率(%) 1 59.4-115.3 苯二氮卓类药物 氯硝西泮、利眠宁、三唑仑等 1.0 2 61.0-105.2 4 62.4-108.7 1 59.6-115.6 硝基咪唑类药物 甲硝唑、二甲硝咪唑、氯甲硝咪唑、羟基异丙硝唑等 1.0 2 59.8-107.6 4 62.6-106.3 (瘦肉精)莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗、特布他 0.5 61.0-115.1 B-受体激动剂类药物 林、喷布特罗等 0.5 1 2 63.2-103.3 65.3-103.9 0.5 70.9-102.5 三苯甲烷类药物 隐色孔雀石绿、隐色结晶紫 0.5 1 63.1-103.0 2 65.7-98.9 苯并咪唑类 阿苯达唑、氟苯达唑、氧苯达唑、 5.0 5 1020 62.4-106.5 60.6-101.262.1-102.3 氨基甲苯咪唑、噻苯哒唑 磺胺类药物 磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、 20 20 61.1-109.0 40 62.0-106.9 磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异恶唑等 80 60.0-103.5