日立CT15E/15RE是一款高性能,极低噪声(≤50dBA)的高速台式离心机。本文将介绍使用该款离心机及配套试剂盒进行DNA、RNA及各种蛋白的快速分离和纯化方法。
天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD. 天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD.E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL:010-64010651 FAX:010-64060202 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 用日立 CT15E/15RE 高速台式离心机及Qiagen 试剂盒分离植物的染色体 DNA 及 RNA 日立 CT15E/15RE 是一款高性能,极低噪声(≤50dBA)的高速台式离心机。配有三种可高温灭菌转头,适用于 0.2ml ( PCR 排管)0.5ml、1.5ml 及 2ml eppendorf管的常规生物学实验,特别适用于与各种生物大分子试剂盒配合应用于 DNA、RNA及各种蛋白的快速分离和纯化。 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL:010-64010651 FAX:010-64060202 一)植物染色体 DNA的离心分离: 1)用CT15E或15RE 高速台式离心机, T15A61或T15A62转头, 1.5ml或 2ml 微管 ; QiagenDNeasy Plant Mini Kit;样品为植物组织粉末。 2植物组织用液氮冷冻后研磨成细粉;34 将粉末放入2ml微管; 微管中加入缓冲液 API 400pl 及 100mg/ml 的 RNase A 4pl,置于涡旋仪上混匀; 5) 65℃培养10分钟,培养后翻倒混匀2至3次; 加入130ml缓冲液AP2并混匀;刀8 冰浴中放置5分钟; 室温中离心:14, 500rpm (约20,000xg)5分钟; 9) 将 Qiagen 的 "QIA sherdder Mini spin column”放入另一个新的2ml微管并剪去管盖,将(8)离心后上清液倒入 column ; 10) 室温下离心14, 500rpm (约2分钟); 11) 将已过滤的液体透过 "column"倒入另一个新的2ml微管; 12) 加入1.5倍或稍多缓冲液AP3/E,混匀; 13) 将Qiagen的"DNeasy Mini spin column 放入另一个新的2ml 微管,剪去管盖,并将(12)混合液650ul 倒入 "column"; 14) 室温下离心:8,000rpm(约6,000xg)1分钟; 15)倒出滤液; 16) 在"column"内加入缓冲液 AW 500ul 17)室温下离心:8,000rpm(约 6,000xg)1分钟; 18)倒出滤液; 19) 在"column" 内加入500ul缓冲液 AW; 20)室温下离心:14,500rpm(约 20,000xg)2分钟; 21)将"column" 移入另一个1.5ml微观并加入100ul 缓冲液 AE; 22)室温下放置5分钟; 23)室温下离心:8,000rpm,1分钟; 24)从离心管折去“DNeasy Mini spin column” 将经过离心淘洗的染色体 DAN 置于-70℃保存。 二)植物组织的RNA分离; .)同(一)(1); )同同(一)(2); 加入450pl缓冲液 RLT 并在涡旋仪上充分混匀; 56℃培养2分钟(±1分钟); 将 Qiagen"QIA sherdder Mini spin column 放入一个新的2ml微管剪去管盖,将以上混匀物倒入"column"; 6)室温下离心:15,000rpm ( 21 ,500xg)2分钟; 天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL:010-64010651 FAX:010-64060202 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 将滤液倒入另一个新的2ml微管; 加入0.5倍容量(或稍多)的96%以上纯度的乙醇,混匀; 刀89)将RNeasy Mini spin column 放入一个新的2ml微管剪去管盖并倒入650pl混匀液; 10) 室温下离心:9,200rpm(约8,000xg ) 15秒; 11)倒出滤液; 12) 在"column"内加入 700pl缓冲液 RW1; 13)室温下离心:9, 200rpm (约8, 000xg) 15秒; 14)倒出滤液; 15))"column"内加入500pl 的 RPE 缓冲液 ; 16)室温下离心:9,200rpm(约8, 000xg)15秒; 17) 倒出滤液; 18) 再在"column"内加入500pl的RPE缓冲液; 19)室温下离心:9,200rpm(约8,000xg)2分钟; 20)将以上"column"放入一个新的1.5ml微管; 21)在"column"上加 30-50pl无菌纯水; 22)室温下离心:9,200rpm (约8, 000xg)1分钟; 23)从微管中取出"column",将已淘洗分离的 RNA 溶液在-70℃储存。 www.techcomp.cn
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