用日立特制的高速组织培养管分离细胞膜

天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD. 天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 用日立特制的高速组织培养管分离细胞膜 一般的 50ml 培养管离心时允许使用的最高转速都在 12，000rpm 以下， Hitachi 在CR-21/22N 及 CR-G 系列高速冷冻离心机中配置了新型的专用于组织培养管的转头 R18A(18，000rpm， 42，000xg， 8×50ml TC管)并为此专门定制了高强度的50ml 锥底 TC 管。用这种转头分离细胞器，离心时间短，分离效果好。 设备 ： Hitachi CR21/22N 或CR21/22G高速离心机，R18A转头(可高温消毒，121℃，20分)，himac 50 ml TC管 CR22N 用于50ml TC及15ml TC(尖底组织培养管)离心的定角转头 高压 高压 灭菌 灭菌 "himac日立50TC管”可在高离心力(xg)下离心使用! (订购号： S307904A，300个/套) 最大RCF： 42，200 xg* 最大转速：18，000 rpm*已经过电子光束照射消毒，可直接用于细胞培养和样品处理 标示刻度及可写字的空白处都是防乙醇/甲醇的，不会被抹掉 R18A R15A 18，000rpm/ 42，200 xg 15.000 rpm /32，240 xg “使用R18A角转头 50mlx8 tubes 15/50mi x 10 tubes each 分离步骤： 1.成年鼠肝匀浆 4，000rpm(约2，000xg) 离心15分，4℃(R18A转头， 8×50ml) 2.沉淀用1mM NaHCO3 稀释再在 4，000rpm 离心15分，4℃ 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 3.沉淀按湿重1g/ml NaHCO3 稀释后配成68%蔗糖液，置于离心管下部，上部用42%蔗糖液4.R18A转头 ， 18，000rpm (42，200xg)， 4℃离心90分钟，加速“5"减速“5" 5.离心后在42%与68%蔗糖液之间形成粗制细胞膜 42% sucrose 6.粗制细胞膜吸出后用1mM NaHCO3 稀释后再离心 4，000rpm(近 2，000xg)4℃离心30分，并重复此实验二次 7.去除上清液沉淀再用1mM NaHCO3 稀释，在50ml TC管中，从底部依次向上铺设：68%蔗糖液(用稀释的样品配成)48%蔗糖液、、42%蔗糖液。 8.铺好后再次离心，R18A转头， 18，000rpm，4℃，90分钟，加速"5"减速"5" 9.离心结束后可以看出细胞膜分布在42%与48%蔗糖液之间 讨论：阶梯弟蔗糖梯度在 50ml TC 管中用高速离心机分离亚细胞造造(膜、线粒体、溶酶体、高尔基复合体、微体等)由于日立开发了高强度的组培养管而变得更为可行。以上只是一个例子，我们可以选择不同的蔗糖阶梯度来分离细胞器，可以得到相当高的纯度。除了蔗糖梯度以外，用 Percoll 及 Nycodenz 的自形成、予形成或阶梯梯度分离亚细胞构造，近年来已被广泛应用。 天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 如欲了解更多详细信息，请联系天美(中国)科学仪器有限公司市场部，或访问天美官方网站： www.techcomp.cn