环境水中营养盐检测方案

环境水体中亚硝态氮、硝态氮和总氮的液相色谱测定 摘要：建立了环境水体中NO-2；、NO-3；及总氮含量的液相色谱测定方法。采用Hypersil ODS(5um，250 mm×4．6 mm id．)色谱柱；流动相：17．5 mmoL／L KH2P04—2 mmol／L H3P04缓冲液(pH 3．5)一乙腈(体积比92．5：7．5)；流速：0．8 mL／min；柱温：30 oC；紫外检测器：波长204 nm。结果表明：水体中NO-2；、NO-3的线性范围(以N计)：1～80 ng，r=0．999 9；方法检出限：NO-2 0．4 ng、NO-3 0．09 ng ,回收率为NO-2 99．2％～102．4％、NO-3 98．7％一99．3％，RSD为0．79％和0．25％。 关键词：高效液相色谱法；环境水样；亚硝酸盐；硝酸盐；总氮 NO-2；、NO-3、及总氮已列入环境水体的必检项目，建立环境水体中NO-2；、NO-3及总氮的新型、快速、准确检测方法显得极其重要。目前，同时测定亚硝酸盐和硝酸盐的方法主要采用化学发光法、硝酸银电极法、流动注射光度法、二元线性解析一紫外分光光度法及离子色谱法等。这些方法各有优缺点，其中离子色谱法已经被我国列入生活饮用水中NO-2和NO-3检验规范方法之一。离子色谱法的采用，改善了NO-2和NO-3，检测方法的灵敏度，但不普及。迄今为止，使用高效液相色谱法测定NO-2和NO-3的文献报道很少。文献姜华、何荣桓等利用高效液相反相离子对色谱法成功分离并测定了水体中的NO-2和NO-3含量。本文采用磷酸盐缓冲体系为流动相，建立了操作简便、准确可靠、灵敏度高且适用于环境水中NO-2、NO-3和总氮检测的高效液相色谱法。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 海能LC7000高效液相色谱仪，配LC7020紫外/可见检测器(海能仪器公司)；Hanon-Clarity色谱工作站色谱数据处理系统(海能仪器公司)；手提式压力蒸汽消毒器(上海仪器厂)。 亚硝酸钠、硝酸钾、磷酸、氢氧化钠和过二硫酸钾均为分析纯；磷酸二氢钾为pH缓冲标准物质； 乙腈为色谱纯；100 mg／L NO-2标准样品、500 mg／L NO-3一N总氮标准样品、(12．275 4±1．55)mg／L TN标准控制样品，均为国家环保总局标样所标样。． 1．75 mol／L KH2P04—0．2 mol／L H3PO4。缓冲液：将缓冲液稀释100倍(内加体积分数为7．5％的乙腈)作为流动相；用亚硝酸钠、硝酸钾配制各含100 mg／LNO-2-N、NO-2-N混合标准储备溶液，再逐级稀释为混合标准工作液；50 g／L碱性K2S2O8溶液；环境标样根据实验需要做稀释处理。 1．2 色谱条件 Hypersil ODS色谱柱，5um，250 mm x4．6 mm id．(大连依利特科学仪器公司)。柱温为30℃，泵压2．94 MPa，灵敏度为0．04 AUFS，检测波长为204 nm，流速0．8 mL／min，进样体积l0ul；流动相：17．5 mmol／L KH2PO4一2 mmol／L H3P04缓冲液(pH 3．5)与乙腈体积比为92．5：7．5，使用前过滤并超声脱气。 1．3实验方法 每100 mL环境水样加1 mL缓冲液至酸性，过0．45um滤膜，直接进样10uL测定NO-2；、NO-3按照水质总氮测定分析方法处理水样，用HPLC法测定。 采集相同环境水样，按上述GB 11894—89消煮法消解水样后，比色法测定总氮；比色分析水样中NO-2；、NO-3时，按GB／T 5750—2001《生活饮用水卫生规范》处理，若水样浑浊或色度较深，在100 mL水样中加2 mL氢氧化铝悬浮液，搅拌后静置数分钟，过滤(水样澄清不必经过此处理)。分取水样或处理后的水样用酸或碱调节至中性，用重氮偶合分光光度法测定NO-2-N；另外分取水样或处理后的水样加适量硫酸银一硫酸溶液(10 g／I．)，混匀，静置5 min，滴加高锰酸钾溶液至淡红色保持15min不褪色后，用麝香草酚分光光度法测定NO-3-N(注：应扣除水样中的NO-2-N)。 2结果与讨论 2．1 HPLC法分离、检测NO-2和NO-3 采用上述实验条件可完全分离、检测NO-2和NO-3，分离度大于1．5，分离效果见图1A。混合标准溶液4℃低温储存2—3周后，再次测定标液NO-2和NO-3含量、保留时间。结果表明：NO-2和NO-3含量基本无变化；日问保留时间波动小，NO-2(2．326±0．016 min)、NO-3(3．105±0．026 min)。