奶制品中黄曲霉毒素检测方案(柱后衍生装置)

普瑞邦奶及奶制品中黄曲霉素M检测的解决方案 一、背景介绍 黄曲霉毒素Mi(Aflatoxin Mi)属于黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。物理化学性质相当稳定，不被巴氏消毒法破坏。哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素Bi污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素Mi。黄曲霉毒素Mi危害主要表现在致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。 目前来讲， Aflatoxin Mi的检去方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M ELISA 试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素Mi残留。 Pribolab(普瑞邦)作为专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商之一，整合了原北京泰乐祺检测应用实验室，更加专注于霉菌毒素检测产品和技术解决方案的服务，以期快速提出解决方案。针对几年来牛奶及其制品中不断出现的黄曲霉毒素M1超标问题，建立了一套完整的解决方案。 二、参考标准：根据国标《GB 5413.37-2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定。 (一)免疫亲和柱-高效液相色谱法：：符合 GB 5413.37-2010国标方法 1.所需设备和耗材 高效液相色谱仪 色谱普：真菌毒素专用色谱柱(PRC-18， Pribolab)。 免疫亲和柱： PriboFast@黄曲霉毒素M免疫亲和柱(IAC-012-3， Pribolab， 25支/盒，，快速过柱型，适用于粘稠样本：如生鲜乳、酸奶等，有效解决过柱易堵问题)。 高速均质器：不锈钢耐腐蚀，转而达到22000rpm 以上(EQ-WR-1L， Pribolab)。 玻璃纤维滤纸： PriboFast@玻璃纤维滤纸 (GMF/A-110， Pribolab) PriboFast@八位泵流操作架(Pribolab，用于控制免疫亲和柱过柱流速) 标准品： Aflatoxin M (固体标准品MSS1007 100ug或0.5mg/ml AflatoxinM 液体标准品， Pribolab) 2.样品前处理：普瑞邦针对生鲜乳、干酪、奶油等提供不同的处理方案(详细方案请联系 Pribolab 中国：400-688-5349，普瑞邦开发了针对多种奶品基质提供优化的前处理方案) 3.免疫亲和柱净化： PriboFast@黄曲霉毒素M免疫亲和柱(IAC-012-3， Pribolab)富集：提取液以2-3mL/min 流速通过免疫亲和柱，直至2-3mL空气通过柱体； 洗涤：10mL 0.1%的吐温/PBS清洗，以10mL水洗柱子2次，并使2-3mL 空气通过柱体。 洗钥：加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，孵育30秒以上，以流速为 1-2mL/min过柱，收集全部洗脱液供检测用。 5.高效液相色谱分析 (二)酶联免疫法 1.方法原理 采用直接竞争酶联免疫法，在微孔板上预包被黄曲霉毒素M抗原，加入样本(或黄曲霉毒素M标准品溶液)及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M抗体。样本或标准品溶液中的抗原与预包被在板孔上的抗原竞争结合酶标抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入 TMB 显色液，读取吸光值。样品吸光值与其所含黄曲霉毒素M量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素M的含量。 2.试剂和材料：料联免疫试剂盒 (PriboFast 黄曲霉毒素M，试剂盒 EKT-012，Pribolab) 样本前处理：牛奶}：：离心取下层待测。奶粉：复溶离心取下层待测。： 检测步骤 4.1免疫反应30min；洗板5次；显色反应 30min；终止反应，酶标仪读OD 值。 5.分析结果的表述 用酶标仪判读结果。 (三)免疫金标快速检测法 1.方法原理 黄曲霉毒素M(AFM)快速检测条应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的黄曲霉毒素M在酶标孔中与胶体金标记的特异性抗黄曲霉毒素M单克隆抗体结合，抑制了抗体和 NC 膜检测线上 AFM -BSA 偶联物的结合。如果样本中黄曲霉素M1含量大于0.5 ug/L， 检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。 2.试剂和材料 胶体金检测试纸： PriboStrip""黄曲霉毒素M 免疫金标快速检测条(PR-012，Pribolab) 3.分析步骤：：8奶粉复溶后检测；；液态奶直接检测。吸取奶液滴加到加样孔中， 8-15分钟读取结果。在C线显色的情况下：T线显色比C线深或一样深是阴性。T线显色比C线浅，或无显色是阳性结果。 技术与售后请联系： Pribolab 中国：北京泰乐祺科技有限公司 中国区客服电话：400-688-5349 了解产品：010-6339534963380700 复杂样品受理：010-52453171 13311089404 网址： http：//www.rapid-bio.com E-mail： marketing@rapid-bio. com Pribolab@(普瑞邦)是面向全球提供霉菌毒素检测解决方案的主要服务商之一，凭借强大的研发团队和专业的霉菌毒素检测技术的研究，为全球农业生产、食品加工与粮食、饲料工业等行业提供专业的霉菌毒素检测技术与产品服务，同时为社会提供食品、饲料及饮料等的霉菌毒素、食品成分等检测分析. PriboFast@霉菌毒素免疫亲和柱 PriboMIPTM霉菌毒素分子印迹固相亲和柱 PriboFast@霉菌毒素多功能净化柱 PriboFast@霉菌毒素酶联免疫检测试剂盒 PriboFast@霉菌毒素免疫金标快速检测卡 Pribolab@霉菌毒素标准品和质控样品 PriboFast@KRC 光化学柱后衍生器(黄曲霉毒素) Pribolab@真菌毒素浓缩器 PriboVitaTM 维生素免疫亲和柱和试剂盒 PriboFastTM 过敏原检测试纸和试剂盒 更多产品请登录公司网站咨询当地授权销售商. 液相色谱参考条件液相色谱参考条件列出如下:a) 液相色谱柱:C18柱(柱长150mm,柱内径4.6mm;填料粒径5μm),或相当者。b) 柱温:40 ℃。c）流动相:A 相,水;B相,乙腈-甲醇(50+50)。等梯度洗脱条件:A,70%;B,30%。d) 流速;1.0mL/min。e) 荧光检测波长:发射波长360nf) 进样量:50μL。