干酪中黄曲霉毒素检测方案

泰乐祺科技推出奶及奶制品中黄曲霉素M1专业解决方案- 针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业(眉山)和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素 M1 超标的问题。蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品(折算为鲜乳汁)不得超过0.5ug/kg；婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素 b1。 (GB 2761-2005 国家标准一食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003 国家标准一乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量! 黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1， B2，G1， G2)， 还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4一羟基化的产物 Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1 的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。其危害巨大，人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。 目前来讲， Aflatoxin M1 的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素 M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。 作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商，2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室"，重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，!以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提供了两种检测方案，口可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的限量检测。 高效液相色谱法： 根据国标《GB 5413.37一2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定实验用前处理： 实验仪器和好耗材包括： 恒温水浴锅 溶剂过滤器(带真空泵)1000ml 高速匀质器黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸玻璃注射器无荧光特性玻璃试管空气压力泵超声波清洗机定量滤纸量筒样品瓶容量瓶移液器或移液管 实验用试剂：色谱乙腈色谱甲醇氢氧化钠石油醚超纯水或去离子水等等HPLC 条件： 高效液相色谱仪 色谱柱 C18柱， 150*4.6mm， 5um 流动相 乙腈一水(25：75) 荧光检测器： 激发波长365nm， 发射波长435nm； 柱温温 室温 流速 1.0ml/min 进样量 20ul 出峰时间 10分钟左右 样品取样：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。 样品前处理：分不同样品 牛奶 水浴加热至40度，离心用上清液过柱净化； 乳粉和粉状婴幼儿配方食品：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化； 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，调节 PH值至微碱性，高速均质器匀浆，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化； 干酪：称取适量切细或粉碎，过筛用加纯水溶解，高速均质器匀浆，超声提取后收集上清液，然后用石油醚进行两次萃取，然后用适宜的有机溶液萃取，取若干上清液过柱净化奶粉样品，用于蒸馏水溶解中，调节PH值至微碱性，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化； 奶油：称取适量加甲醇水溶解，震荡后分页漏斗取下层溶液，蒸干后溶于水用于过柱净化。 免疫柱净化步骤：完全符合GB/T 18980-2003 -----取出免疫亲和层析柱，恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。 -----将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器； ------将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min 流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体； -----更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。 -----准确加入 4mL 色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min ~2mL/min， 收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。 注：收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA，荧光和高效液相等方法检测。HPLC 检测需要仪器与耗材 产品名称 说明 规格 黄曲霉毒素M1 固体标准品 参比对照使用 100ug 1mg 黄曲霉毒素M1 液体标准品 浓度 0.5ug/ml， 溶于乙腈 1ml PriboFast 黄曲霉素M1 免疫亲和柱 用于样品前处理柱分析黄曲霉素 25/50T PriboFast 泵流操作架(8位) 用于免疫亲和柱净化样品处理，方便控制流速 黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸 用于去除 HPLC 检测时部分杂峰，有效提 100P 高灵敏度。110，1.5um 不锈钢均质器 高速匀浆样品，有效提高萃取效率 旋转蒸发仪-超声波发生器 酶联免疫检测法：符合国家标准 酶联免疫检测法采用竞争 ELISA， 在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本(或黄曲霉毒素M1标准品溶液)及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1 抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素 M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液， 读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1 抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。 样品处理 牛奶直接离心取上清液用于检测 奶粉及其他固状奶制品：需要溶解于去离子水中，离心取上清液用于检测 试剂盒检测时间：30分钟+30分钟 交叉反应率： Aflatoxin M1 100% Aflatoxin B1 8% Aflatoxin B2 10% Aflatoxin G1 7% Aflatoxin G2 5% ELISA 方法检测需要： 说明 PriboFast 黄曲霉毒素 M1 酶联免疫检测试剂盒 检测范围(0.1 ppb-8.1ppb) 96孔 雷勃半支灭菌移液器(彩色) 多个量程：0.5-10；20-200； 支 5-50；1000-5000ul 雷勃八道半支灭菌移液器 量程： 5-50ul；50-300ul 支 酶标仪 进口、国产仪器， 台 分析人员要求： 化学分析仪器及其相关专业或有高效液相色谱仪操作经验的人员。 注：作为面向全球提供霉菌毒素检测技术解决方案的主要服务商之一， PriboLab 凭借强大的研发团队和霉菌毒素检测技术的研究，为全球农业生产、食品加工与粮食、饲料工业等行业提供专业的真菌毒素检测技术产品与技术服务。北京泰乐祺作为 PriboLab 在中国的唯一合作伙伴，积极为国内客户提供优质的霉菌毒素检测技术与产品服务，为国内客户提供适宜的霉菌毒素检测方案，帮助国内客户建立高效优质的霉菌毒素项目检测平台。