奶制品中黄曲霉毒素M1和M2检测方案(液相色谱仪)

HITACHI1nspire the NextTechnical ReportASC/LC-XXXk 高效液相色谱仪 HITACHITechnical ReportInspire the Next 食品中黄曲霉毒素M族的测定 黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的毒性致癌物，自然界至少存在14种以上不同的黄曲霉毒素。黄曲霉毒素B1是公认最具毒性的。黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2是黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2的代谢产物。当牛等牲畜食用了被污染的饲料时，经代谢转化成的M族黄曲霉就会出现在牛奶里。高浓度的黄曲霉毒素可以产生急性肝坏死，导致肝硬化或肝癌。慢性接触黄曲霉毒素会增加患肝胆疾病的风险。本文参考GB5009.24-2016中的检测方法，应用Primaide系统，对食品中黄曲霉毒素进行了分析。 Primaide 系统 标准样品测定例 ■标准样品测定例 ■分析条件 0.12 色谱柱 ： HITACHI LaChrom C18 (5 um) 4.6 mm I.D.×150mm 流动相 ：水/乙腈/甲醇=70/15/15流速 ：1.0mL/m in 柱温 ：40°C 检测波长：FLD：Ex=360 nm；Em=430nm 进样量 ：50pL 保留时间(min) 标准样品的色谱图(浓度：6.4 ug/L) ■重现性(6.4ug/L标准溶液， n=6) ■线性 黄曲霉毒素M族在0.2~6.4 ug/L的浓度范围内线性关系良好， R?为0.9997。重现性良好。 样品的测定例 牛奶空白样品与添加样品的色谱重叠图 奶粉空白样品与添加样品的色谱重叠图 保留时间(min) 奶酪空白样品与添加样品的色谱重叠图 酸奶空白样品与添加样品的色谱重叠图 奶油空白样品与添加样品的色谱重叠图 对牛奶、酸奶、奶粉、奶油和奶酪等样品 进行测定，均未检出M族黄曲霉毒素。对 牛奶和酸奶样品进行加标回收率实验，在 0.2 ug/kg的添加浓度下，样品中黄曲霉毒 素M族的加标回收率在99.37%-101.36%。 对奶粉，奶油和奶酪样品进行加标回收率 实验， 在0.8 ug/kg的添加浓度下，样品中 黄曲霉毒素M族的加标回收率在94.02%- 103.29%。 样品前处理方法 样品提取： 牛奶、酸奶样品 牛奶、酸酸样品 4.0g =>加入10mL甲醇 >漩涡混合 3 min 10000r/min 离心10 min 取全部上清液(12mL) 加入40mLPBS缓冲液 获得稀释液 奶粉样品 奶粉样品1.0g 加入4mL 50℃热水 >漩涡混合口 静置样液10min 口 加入甲醇 10 mL 漩涡混合 3 min >10000 r/min 离心10 min 1>取全部上清液(12mL) 二加入40mL PBS缓冲液 获得稀释液 奶油样品 奶油样品1.0g 加入8mL石油醚 震荡溶解、 加入9mL水 加入甲醇 11mL 震荡 30 min 口>全部液体转移静置分层 下层溶液在45℃旋蒸浓缩 获得10mL浓缩液 加入30mL PBS缓冲液 获得稀释液 奶酪样品 奶酪样品1.0g 二 加入1mL水 加入18mL甲醇 涡旋混合2 min 震荡30 min> 10000 r/min 离心10 min 取全部上清液(17mL) 一445℃旋蒸浓缩至2mL 用PBS缓冲液稀释至30mL 免疫亲和净化： 全部的稀释液一派滤液以1滴/s流速通过免疫亲和柱用10mL水以1滴/s流速淋洗免疫亲和柱 抽干免疫亲和柱 一 用甲醇洗脱并定容至1.0mL二、 HPLC分析 注： PBS清洗缓冲液：称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990 mL水将上 述试剂溶解，然后用盐酸调节PH至7.4，再用水定容至1L。 仪器配置： Primaide 1110泵，1210自动进样器，1310柱温箱，1440荧光检测器. @Hitachi High-Tech Science Corporation Page. Page.     黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉产生的毒性致癌物，自然界至少存在14种以上不同的黄曲霉毒素。其中黄曲霉毒素B1是公认最具毒性的。黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2是黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2的代谢产物。当牛等牲畜食用了被黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2污染的饲料后，经代谢转化成的M族黄曲霉就会出现在牛奶里。高浓度的黄曲霉毒素M1可导致肝癌。慢性接触黄曲霉毒素会增加患肝胆疾病的风险。本文参考《GB 5009.24-2016》检测方法，应用日立高效液相色谱仪Primaide，对奶制品中的黄曲霉毒素M1和M2进行了分析。