乳制品中阴离子检测方案

维普资讯 http：//www.cqvip.com37中国卫生检验杂志2006年1月第16卷第1期 Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Jan 2006；Vol 16 No l 在线渗析-离子色谱法测定牛乳中阴离子 黄 丽，刘京平 (1.广东省东莞市疾病预防控制中心，广东东莞 523016；2.瑞士万通中国有限公司，广州 510070) [摘要] 目的：建立在线渗析-离子色谱直接进样测定牛乳中阴离子的方法。方法：纯牛乳样品经20倍稀释后直接进样，经在线渗析后进入分离柱测试，采用 Metrohm Metrosep A Supp 5~100阴离子交换柱，以 3.2 mmol/L Na，CO， +1.0 mmol/L NaHCO，为淋洗液，流速为 0.70 ml/min，化学抑制电导检测。结果：该方法线性范围广，相关系数均大于0.9990，相对标准偏差均小于0.6%(n=8)，各离子组的的加标回收率在91%~107.4%之间。结论：该方法操作方便、准确度高、重现性好、高效自动化，对分析测试牛乳中阴离子有实用价值。 [关键词] 在线渗析；离子色谱法；牛乳；阴离子 牛乳中硝酸盐主要来源于原料乳中的人为掺假和牛饲料，我国现有的食品标准对牛乳中硝酸盐含量作了严格规定，允许酸牛乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中硝酸盐限量为11.0mg/kg，乳粉、婴幼儿配方乳粉限量为100 mg/kg。硝酸盐在细菌的硝基还原酶作用下，可转变为亚硝酸盐，食品中亚硝酸盐的大量聚集则可引起中毒。牛乳中硝酸盐测定国际上广泛采用镉还原和光度分析法，但前处理过于繁杂，干扰因素较多，结果重现性差，回收率偏低。牛乳中磷含量的测定采用钼蓝比色法和钒黄比色法，但操作步骤繁杂，特别是样品处理过程中磷损失较多，致使测定结果不能准确反映样品中磷的真实含量.o 渗析是通过渗析膜把低分子物质从高分子物质中分离出来的方法。瑞士万通的在线渗析技术中的接收液是静止的，通常以越纯水做阴离子测定的接收液，在样品液和接收液之间经过一定时间后，最终浓度可以达到平衡。本文尝试用在线渗析技术进行预处理，除去牛乳中杂质及干扰物，离子色谱测定牛乳中阴离子进行了分析测试方法的研究，得到了较满意的结果。 材料与方法 1.1 在线渗析原理示意图 每个样品渗析包括以下4个步骤： ①冲洗 阀 A：FILL，阀 B：INJECT。冲洗样品流路、接收流路和样品环(冲洗时间：约2min)。 ②“停流”渗析 阀A：FILL，阀 B：FILL。保留的接收液渗析样品(渗析时 ( [作者简介] 黄丽，女，大学本科，副主任技师，主要从事理化检 验工作。 ) 间：约10 min)。 ③转移到样品环 阀 A：FILL，阀 B：INJECT。从样品收集了离子的接收液转移到样品环(转移时间：约0.3~0.5 min)。 ④注射 阀A：INJECT，阀B：INJECT。从样品收集了离子的接收液注射到IC 系统。 1.2. 仪器 Advanced MIC 7(瑞士 Metrohm 公司)，化学抑制电导检测.Metrosep A Supp 5~ 100阴离子交换柱，IC NET 2.3 色谱工作站，788自动进样器，MSM抑制系统， Milli-Q纯水系统。 1.3 色谱条件 淋洗液：3.2 mmol/L Na，CO， +1.0 mmol/L NaHCO，，MSM抑制系统，流速 0.70 ml/min，进样量20pl，牛乳原样经稀释后直接进样测定，以保留时间定性，峰面积或峰高定量。 1.4 试剂 Cl、NO、PO、SO标准储备液均为1000 mg/L，由德 国 Merck 公司提供，用纯水逐级稀释至所需质量浓度的混合标准溶液。碳酸钠和碳酸氢钠为优级纯。硫酸(p=1.84 g/ml)：优级纯。实验用水均来自Milli-Q纯水系统，电阻值为18.2MQ。 1.5 样品预处理 准确量量牛乳原样5.00 ml，加纯水容至100 ml，摇匀，直接进样分析测试。 2结果与讨论 2.1 停流渗析时间的选择 样品溶液连续通过渗析池，同时接收液在密闭的循环通道中保持静止。经过一段时间扩散后，样品中的离子浓度和接收液的离子浓度最终达到平衡，且接收液和样品液的浓度必须相同，才能得出正确的结果，达至该平衡点通常需时10~11 min。可以通过实验确定最佳停流渗析时间，图1为峰面积与停流渗析时间的关系。本实验选定停流渗析时间为10 min。 图1峰面积与停流渗析时间的关系 2.2渗析后样品转移时间的优化 渗析后需要用蠕动泵将在线制备的样品从渗析池转移至定量环。最佳样品转移时间会受到蠕动泵流速以及渗析池至定量环间距离的影响。从图2可知，本实验系统的最佳转移时间为 0.3 min，此时渗析池中样品可精确地转移至定量环。 图2峰面积与转移时间关系 2.3渗析效率的评估 在线渗析系统必须进行校正以检测系统的功能。通过比较直接进样和渗析进样，可以测量渗析效率，渗析效率的范围要求为97%~100%。建议每次使用时进行渗析效率的评估，以确定是否更换渗析膜，一般分析样品100多次需更换渗析膜。在最优化的渗析条件下，渗析-进样和直接进样分离自配样品所得峰面积。渗渗效率均高于97%。见表1。 表1渗析效率评估 C1 NO， PO】 SO 渗析-进样峰面积 1499.9 732.0 374.3 970.9 直接进样峰面积 1521.1 746.1 383.0 989.3 渗析效率(%) 98.6 98.1 97.7 98.1 2.4 校正曲线 以浓度分别为2、1020、30、40、50，80 mg/L混合标液作校正曲线，Cl、NO，、PO、SO的校正曲线相关系数(r)分别为：0.9998、0.9995，0.9995、0.9996，均大于0.9990。方法线性范围广，相关性好。 2.5 加标回收率 自配样品，测得浓度为 9.716 mg/L。 在 100 ml 该样品中加入一定量的标准储备液，测得回收率均高于91%，见表2。 表2 加标回收率 Cl- NO， PO SO 加标前前度(mg/L) 10.1 10.2 10.2 10.2 加标量(mg/L) 9.3 9.2 9.1 9.1 加标后平均浓度(mg/L) 18.9 18.6 18.6 18.5 平均回收率(%) 94.5 91.4 92.0 91.0 2.6 样品测定 牛奶样品稀释20倍后，取8份稀释液渗析-进样进行平行测定，另取8份稀释液进行加标试验。色谱分离图见图3。测定结果见表3。 图3牛乳样品色谱图 表3牛乳样品测定结果(n=8) Cl NO， PO SO 稀释液测定值(mg/L) 54.1 3.89 78.1 7.07 RSD(%) 0.1 0.3 0.6 0.4 加标量(mg/L) 50 50.3 50 10 加标后平均浓度(mg/L) 107.8 8.44 130.3 17.1 平均加标回收率(%) 107.4 91.0 104.4 100.3 保留时间 RSD(%) 0.1 0.1 0.1 0.1 3小结 本文应用牛乳原样稀释，在线渗析-离子色谱直接进样测定牛乳中阴离子，测定中样品处理简单，准确度高，回收率高，渗析效率高，同时避免了磷的损失。经大量实验证明，是种操作简单快速、测定结果准确的方法。 ( [参考文献] ) ( [1]中国准准出版社第1编辑室.中国食品工业标准编[M].北京：中国标准出版社，2003. ) ( [2]GB/T5413.1-5413.32-1997.婴幼儿配方食品和乳粉通用检验 方法[S]. ) ( (收稿日期：2005-09-12) )