儿童全血中铅的石墨炉原子吸收法分析

北京东西分析仪器有限公司版权所有 儿童全血中铅的石墨炉原子吸收法分析牛映斗 摘要儿童血铅含量的测定是监测铅对儿童危害的重要手段。铅能引起几乎所有器官系统的功能紊乱，尤其是血液和神经系统。血液中95%的铅在红细胞中，血铅的生物半衰期为2周。研究表明，血铅是当前最可行、最能灵敏反映铅对人体健康危害的指标。而儿童是铅危害的敏感人群，在同样环境条件下，儿童血铅含量往往是成人的1-1.5倍，但儿童的耐受性却远远低于成人。因此为了保护婴幼儿的健康发育和生长，对儿童进行定期的血铅监测是极为重要的，也往往用于临床治疗铅中毒(排铅)的观测指标。 本文对使用原子吸收石墨炉法测定血铅的各项参数及样品处理给予全面介绍。 关键词儿童，全血，铅， GFAAS 法，分析 1.测定方法的选择 石墨炉法测定血铅通常有去蛋白和不去蛋白两种方法，这两种方法均能在AA7000 系列原子吸收仪上实现。经中国预防医学科学院环境卫生监测所提供的牛血铅标样(质控样)及盲样的监测质控评价肯定了测试方法的正确性。现分别叙述如下： 1.1水标、消解、校准曲线法 此法采用 30%H202消解蛋白处理品品，校准溶液为标准铅水溶液，校准曲线法测定，磷酸氢二铵为化学改进剂。 1.1.1仪器 北京东西电子技术研究所生产的 AA7003 型或 AA7001 型原子吸收分光光度 计。 江苏太仓市科教器材厂生产的 WH-861 型高速液体混合器。1.5ml带盖聚乙烯离心管。 10u1、20u1和100pl可调或固定容积塑料尖加样器。 1.1.2试剂 高纯浓 HNOs； 30%H202(优级纯)； 0.5%HNO3、0.5ml高纯HNO3用纯水稀释至100ml； 2%磷酸氢二铵溶液：：2克(NH4)2HPO4(纯度99.99%以上)溶于 100ml 纯水中。 铅标准储备溶液， 1.0mg/ml。 铅标准工作溶液：夜0.2% HNO3溶液配制成5、10、20和40ng/L的标准工作液(制作校准曲线用)。 1.1.3样品处理 准确吸取20uL血样，加到装有100 L0.5% HNO3溶液的 1.5mL带盖锥形聚乙烯离心管中，盖紧盖子，在高速液体混合器上震荡10秒钟。开盖，再准确加入100uL30%H02。同样制作空白。盖好盖子后再在混合器上混匀10秒钟，放置过夜。在临分析前用高速混合器震荡约30秒钟。 1.1.4测定 铅283.3 nm 波长、0.2nm光学带宽，调整对齐素灯光能量棒(红线)和氛灯光能量棒(绿色)至100%处。标准溶液和样品溶液进样量均为20PL， 2%磷酸氢二铵(基体改进剂)为10pL 采用峰高读数。石墨炉升温程序如下： 名称 起始温度(℃) 终止温度(℃) 时间(s) 气体 测温 干燥 50 120 50 打开 功率 干燥 120 120 20 打开 功率 灰化 120 700 20 打开 功率 灰化 700 700 15 打开 功率 灰化 700 700 3 关闭 功率 原子化 2000 2000 3 关闭 功率 清除 2300 2300 3 打开 功率 不过零线性方程，类型校准为： 5ug/L 0.042A10 ug/L 0.075A20ug/L 0.142A40 u g/L 0.256A r=0.9992 1.1.5注意事项 谨防污染：因样品稀释倍数很大，实测时含量很低，谨防污染。 测试时，“稀释倍数”一栏可设定为11，报告浓度即为血铅含量。 在加热过程中，如有溢出喷溅现象，请再延长第二步干燥时间(从20s增至40s)。 1.1.6盲样实测记录 测定值 真值(医科院提供) u g/L 1号样 114 118 2号样 151 147 3号样 305 314 4号样 181 191 1.2血标、去蛋白、校准曲线 此法用 10%HNO3 除去血液中的蛋白质后，离心取上清液分析。标准溶液采 用牛血+铅标的校准溶液，同样离心去蛋白后用上清液制作校准曲线，不用机体改进剂。 1.2.1仪器 AA7001 型或 AA7003型带石墨炉的原子吸收分光度计，带灯灯背景校正器(东西电子研究所)； TGL-16B型小型台式高速离离心机，带1.5ml及0.5ml离心转头(上海安亭科学仪器厂)； WH-861 型高速液体混合器(江苏太仓科教器材材)； 1.5ml 带盖聚乙烯锥形离心管； 20ul微量加液器，，1000pl可调试微量加液器； 1.5ml孔径的试管架。 1.2.2试剂 高纯浓 HNOs； 10%HNO3， 取10ml浓HNO3用纯水稀至100 m1. 铅标准系列：可按表1配备。铅标准液为 50Hg/ml. 用纯水按表1进行稀释，配制标准系列。 表1标准系列的配制 铅标液系列的浓度(Hg/ml) 取铅标准液的毫升数 最终体积(ml) 2.5 1.25 25.0 5.0 2.50 25.0 7.5 3.75 25.0 10.0 5.00 25.0 15.0 7.50 25.0 20.0 10.0 25.0 溶血的牛血：新鲜牛血按每毫升加入1.5毫克 EDTA·Naz盐抗凝，将已抗凝的牛血在超声粉碎器中冰浴超声粉碎或把牛血置于-20℃冰箱中冻结后，取出融化，再冻结、融化。如此反复数次以破坏红血球。在显微镜下观察溶血程度，完整的红血球应小于5%。此血用于配制含基体的标准系列。 含基体的标准系列：按照表2于10毫升玻璃离心管中，分别加入0.2毫升铅标准系列(见表2)。 表2血标准系列的配制 血标系列中铅铅标准系列溶铅标准系列溶 牛血(mL) 总体积(mL) 浓度(ng/L) 液(Hg/mL) 液取量(mL) 0.0 0.0 0.2 9.8 10.0 50.0 2.5 0.2 9.8 10.0 100.0 5.0 0.2 9.8 10.0 150.0 7.5 0.2 9.8 10.0 200.0 10.0 0.2 9.8 10.0 300.0 15.0 0.2 9.8 10.0 400.0 20.0 0.2 9.8 10.0 和9.8ml牛血，用封口膜把离心管口封好，然后反复颠倒混合或在滚筒机上混匀2小时(切勿剧烈振摇，以免产生过多气泡)。在冰箱中(4℃)放置过夜，已达到平衡。用前混匀并分装至数个聚乙烯小管中，于-20℃冰箱内保存，可使用数月。 1.2.3样品处理 在1.5ml带盖锥形塑料离心管中加入 300 u L10%HNOs后，再沿管内壁呈环状的加入50p1血液(注意：：不可将血液加在10%HNOs中，而只停留在管内壁上)，立即盖好盖子，在高速液体混合器上旋转震荡30秒钟，静置30分钟。然后以 10，000转/分的速度离心10min， 取20ul溶液分析，同时制作空白。 铅283.3nm波长，0.2nm光谱带宽，调整对齐元素灯能量棒(红线)和气灯光能量棒(绿色)至100%处。峰高读数。 石墨炉升温程度如下： 名称 起始温度(℃C) 终止温度(℃) 时间(s) 气体 测温 干燥 50 120 30 打开 功率 干燥 120 120 15 打开 功率 灰化 120 450 20 打开 功率 灰化 450 450 10 打开 功率 灰化 450 450 3 关闭 功率 原子化 2000 2000 3 关闭 功率 清除 2300 2300 3 打开 功率 序号 测试值 真值(环卫所提供)ug/L 91号 117 118 92号 148 147 93号 319 314 94号 180 191 95号 77 87 注意事项： 1)谨防污染。所有容器均需用 10%HNOs浸泡24小时以上。 2)测试时“稀释倍数”一栏可设为7，打印出的报告浓度即为血血含量。 2方法评价 本人作者认为“去蛋白法”比“稀释法”要好。因为稀释法稀释倍数过大使Pb浓度过低，勿造成污染，降低测试准确度。 3致谢 在建立测试方法的过程中，得到中国预防医学科学院环境卫生研究所郑星泉教授的大力支持和指导，并对分析结果予以评价，本文编者对此十分感谢。本文制备血铅标样方法依据郑星泉所著《环境铅污染监测中血铅监测/监测的质量保证》一书。