上海通微UM3000ELSD检测未衍生20种氨基酸的检测方法

2 高效液相色谱-UM3000蒸发光散射检测器联用检测未衍生氨基酸 1..试剂与材料 1.1 甲醇：色谱纯 1.2七氟丁酸：纯度≥98% 1.3三氟乙酸：纯度≥99% 1.40.2%七氟丁酸(含0.1%TFA)溶液：精密吸取七氟丁酸1.00 mL， 三氟乙酸 0.50 mL 溶于500mL水，：，即得。 1.5标准品：甘氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、谷氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、脯氨酸、赖氨酸、组氨酸、缬氨酸、精氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸，纯度均大于等于98%。标准储备液 2.。样品制备 精确吸取一定量氨基酸样品溶液，精确至0.001 mL，用水定容，使其中各氨基酸浓度范围在30ug/mL~300 ug/mL 之间。取 5 mL 经0.22 um 水系滤膜过滤后待测。 3..高效液相色谱测定 10.1推荐色谱条件 a) 色谱柱： PrevailM-C18， 5 um， 4.6 mm×250mm(或相当型号色谱柱) b) 流动相：溶溶剂剂AA，，七氟丁酸酸：三氟乙酸：水=1.0：0.5：500；溶剂B，甲醇 c) 梯度洗脱：梯度条件见表1 d) 流速：0.8mL/min e) 室温：常温(25℃) f) 柱温：35℃ g) 漂移温度：40℃ h) 载气流量：2.5L/min(推荐使用氮气) i) 进样体积：10pL 表1. 梯度条件 时间(min) 0 8 11 21 30 40 A% 100 100 78 73 45 45 B% 0 0 22 27 55 55 4.。结果计算 试样中氨基酸浓度按公式(1)计算。 C=A×10~ (1) N——由标准曲线得出的样品中氨基酸浓度的对数； A——样品稀释倍数； C——样品中氨基酸浓度，单位为微克每毫升(ug/mL). 氨基酸标准品色谱图 1、甘氨酸 (Gly)， 2、丝氨酸、(Ser)，3、天冬氨酸(Asp)， 4、、谷氨酰胺(Gln)， 5、苏氨酸(Thr)， 6丙氨酸、(Ala)， 7、谷氨酸(Glu)，8、半胱氨酸(Cys)，9、胱氨酸(Cys)，10、脯氨酸(Pro)， 11、赖氨酸(Lys)， 12、组氨酸 (His)， 13、缬氨酸(Val)，14、精氨酸(Arg)， 15、甲硫氨酸(Met)， 16、酪氨酸(Tyr)， 17、异亮氨酸(Ile)， 18、亮氨酸(Leu)， 19、苯丙氨酸(Phe)， 20、色氨酸(Trp)。