用于药物杂质分析的高分辨率采样 二维液相色谱--隐藏在 API 峰下的相对浓度杂质的检测

原料药的纯度分析对于药物质量和患者安全来说都非常重要1。根据 ICH 指南 Q3A(R2)，应对新原料药中含量大于 0.05% 2 阈值（相对于 API）的杂质进行报告。对这些浓度下的杂质进行分离和检测具有极大的挑战性，尤其当杂质结构与活性药物成分 (API) 具有相似性时。本应用简报以相对浓度为 100% 及0.05% 的氯二氟苯甲酸的不同异构体为例，展示了高分辨率 (HiRes) 采样二维液相色谱在杂质分离与检测中的应用。使用 Agilent 1290 Infinity II 高动态范围二极管阵列检测器 (HDR-DAD) 杂质分析仪解决方案作为二维检测器可以进一步提高本应用的精度和 准 确 度 。 以 脱 酰 胺 胰 岛 素 作 为 实际 样 品 分 析 ， 以 展 示 高 分 辨 率 采 样2D-LC/MS 对具有相似结构的杂质的检测。此处，二维液相色谱还具备其他优势，即第二维分离可作为脱盐步骤，避免第一维缓冲液中的高盐含量进入 MS 离子源造成离子抑制3。使用Agilent MassHunter 的第二维色谱图生成器查看并分析 MassHunter 中的2D-LC/MS 数据。在高分辨率采样二维液相色谱中，在选定时间范围内收集几个涵盖第一维色谱图中整个峰面积范围的小体积馏分，以此测定目标化合物，如图 1 所示。每次切割都驻留在采样环中，并在 第 二 维 中 对 所 有 切 割 进 行 连 续 分析。这一模式可确保所有选定化合物均 转 移 至 第 二 维 ， 并 在 其 中 得 到 分析。这样，选定的共洗脱化合物都经过高分辨率采样处理，以在第二维中进行分析。如技术概述4 所示，这一操作可实现可靠的定量分析。