GC-MS/MS法同时筛查生物检材中88种毒（药）物

使用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪GCMS-TQ8050 NX建立了生物检材基质中88种毒（药）物同时筛查的方法。结果表明，该方法操作简单、分析速度快、重复性好、准确度高，可供相关人员参考。SSL-CA23-241 Excellence in ScienceGCMSMS-276 GC-MS/MS 法同时筛查生物检材中88种毒 (药)物 GCMSMS-276 摘要：使用气相色谱-三重四极杆质谱联用仪建立了生物检材中88种毒(药)物同时筛查测定的方法。使用混 合标准品进行了方法的线性考察和50 ng/mL 浓度水平的加标考察。结果显示，校准曲线相关系数均大于 0.995，加标浓度水平下88种毒(药)物均有效检出，6针重复进样峰面积精密度良好，可满足公安司法领域日常检验需求。 关键词：气相色谱-三重四极杆质谱仪88种毒((药)物 生物检材 技术特点： 心采用 GC-MS/MS的 MRM模式可有效消除生物检材中严重的基质干扰问题。 心该方法一针进样， 33 min 实现88种毒(药)物筛查，高效、可靠性高。 随着社会的发展，许多新型毒物也日益问世与使 用，毒物的数量日益增多，所涉及的化学成分也日趋 复杂，对涉毒案件的侦查检验要求也越来越高，因此 如何对毒物进行快速筛查并针对性检验，是当前法医 工作者在实际检验中迫切需要解决的问题。 对于生物检材(血液、尿液)而言，组成复 杂 干扰物多，筛查目标物不明确，筛查难度大。 GC-MS/MS 具有灵敏度高、选择性强、抗干扰能力强 等优点，采用的多反应监测模式 (Multiple reaction monitoring， MRM) 可有效消除由于基质干扰引起的假 阳性问题。 本文使用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪 建立了包含：催眠镇静类药物、抗精神失常药、麻醉 药品、精神药品、农药、鼠药以及其他药物在内的88种毒((药)物的筛查方法。本方法分析速度快，筛查 结果可靠，可供相关人员参考。 ■实验部分 1.1仪器 GCMS-TQ8050 NX三重四极杆气质联用仪 1.2分析条件 色 谱 柱： SH-I-5Sil MS (30m × 0.25mm × 0.25 um) 柱温程序： 60℃ (2 min)_10℃ /min_320℃ (5 min) 进样口温度： 260℃ 接口温度： 320℃ 载气控制方式： 恒线速度(47.2cm/s) 检测器电压：：调谐电压 +0.7kV 进样方式： 不分流进样(1min) 采集方式： MRM，离子对信息见表1 离子源温度： 230℃ ■样品前处理 样品前处理流程如下图所示。 图1 样品前处理流程图 ■结果与讨论 3.1 MRM 参数 结合岛津 Smart Pesticides Database 农残数据库以及自建数据库方法文件，建立 MRM 方法，， MRM 采集参 数如下表所示。 表1 MRM 采集参数 序号 名称 保留时间 min 定量离子对 CE 定性离子对1 CE 定性离子对2 CE 1 甲胺磷 9.586 141.00>95.00 8 141.00>79.00 22 141.00>126.00 4 2 敌敌畏 9.888 109.00>79.00 8 185.00>93.00 14 185.00>109.00 14 3 沙蚕毒素 10.174 149.10>71.10 8 149.10>102.10 6 103.10>70.10 8 4 丙泊酚 11.417 163.00>117.00 15 178.00>163.10 12 163.00>121.10 9 5 速灭威 12.778 108.00>80.00 8 108.00>90.00 14 一 6 巴比妥 13.316 156.00>141.00 9 156.00>98.00 18 156.00>80.00 24 7 异丙威 13.776 136.00>121.00 10 121.00>77.00 22 121.00>103.00 12 8 苯佐卡因 14.221 120.00>92.10 9 120.00>65.10 21 165.00>120.10 15 9 氧乐果 14.430 156.00>110.00 8 110.00>79.00 10 156.00>79.00 22 10 2，4-D甲酯 14.932 175.00>111.00 9 199.00>156.00 15 175.00>145.00 15 11 久效磷 15.452 127.10>109.00 12 127.10>95.00 16 192.10>127.10 10 12 治螟磷 15.518 322.00>202.00 10 322.00>174.00 18 322.00>294.00 4 13 甲拌磷 15.628 260.00>75.00 8 231.00>129.00 24 231.00>175.00 12 14 非那西丁 15.675 179.10>109.00 21 179.10>137.10 9 179.10>80.00 27 15 毒鼠强 15.712 212.00>132.00 6 212.00>92.00 9 240.00>212.00 9 16 异戊巴比妥 15.968 156.10>141.10 9 156.10>98.00 15 156.10>80.00 24 17 乐果 16.008 125.00>47.00 14 125.00>79.00 8 143.00>111.00 12 18 呋喃丹 16.147 164.10>149.10 8 149.10>121.10 10 164.10>103.10 24 19 莠去津 16.215 215.10>58.00 14 215.10>173.10 6 200.10>104.10 18 20 戊巴比妥 16.248 156.10>141.10 9 156.10>98.00 15 156.10>80.00 24 21 哌替啶 16.433 247.10>71.00 12 172.10>157.10 15 247.10>232.10 6 22 特丁硫磷 16.547 231.00>128.90 26 231.00>174.90 14 231.00>202.90 8 23 司可巴比妥 16.803 167.00>124.00 9 168.00>153.00 9 167.00>106.00 15 24 乙拌磷 16.893 153.00>97.00 10 153.00>125.00 6 186.00>153.00 6 25 咖啡因 17.284 194.10>109.10 12 109.10>55.00 6 194.10>137.10 9 26 2，4-滴丁酯 17.658 185.00>155.00 15 276.00>185.00 9 185.00>142.90 15 27 乙草胺 17.733 174.10>146.10 12 223.10>132.10 22 223.10>147.10 10 28 苯海拉明 17.735 165.10>115.10 24 152.10>126.10 24 165.10>139.10 24 29 甲基对硫磷 17.776 263.00>109.00 14 125.00>47.00 12 125.00>79.00 8 30 利多卡因 17.849 234.10>86.00 6 234.10>205.10 9 234.10>132.10 18 31 甲草胺 17.936 188.10>160.10 10 188.10>132.10 18 160.10>132.10 10 32 苯环利定 18.041 200.00>117.10 15 200.00>84.10 15 200.00>115.10 24 GCMSMS-276 33 氨基比林 18.293 231.00>97.10 18 231.00>111.10 12 231.00>56.10 27 34 右美托咪定 18.443 200.00>185.00 12 200.00>132.00 9 185.00>158.00 9 35 马拉硫磷 18.526 173.10>99.00 14 173.10>127.00 6 158.10>125.00 10 36 苯巴比妥 18.686 204.10>161.10 12 204.10>144.10 18 161.10>143.10 9 37 倍硫磷 18.714 278.00>109.00 20 278.00>169.00 14 278.00>125.00 20 38 毒死蜱 18.758 196.90>168.90 14 313.90>257.90 14 313.90>285.90 8 39 对硫磷 18.773 139.00>109.00 8 291.10>109.00 14 291.10>137.00 6 40 水胺硫磷 18.888 289.10>136.00 14 230.00>212.00 10 230.00>198.00 10 41 氯苯那敏 19.169 203.00>167.00 24 167.00>139.00 27 203.00>125.00 27 42 阿尼西坦 19.295 135.00>77.00 15 135.00>107.00 9 219.00>135.00 9 43 文拉法辛 19.932 134.00>119.00 12 134.00>65.00 27 119.00>65.00 21 44 丁草胺 20.163 176.10>147.10 14 188.10>160.10 12 188.10>132.10 18 45 α-硫丹 20.173 194.90>160.00 8 194.90>125.00 24 194.90>123.00 22 46 稻瘟灵 20.452 231.10>189.00 10 290.10>118.00 14 290.10>204.10 6 47 美沙酮 20.538 72.00>57.10 15 72.00>70.10 12 72.00>62.10 24 48 丙草胺 20.559 262.10>202.10 10 238.10>162.10 10 238.10>146.10 10 49 噻嗪酮 20.769 172.10>57.00 14 175.10>132.10 12 175.10>117.10 24 50 阿米替林 21.016 215.10>189.10 21 202.10>152.10 30 202.10>176.10 27 51 虫螨腈 21.062 247.10>227.00 16 139.00>102.00 12 247.10>200.00 24 52 多虑平 21.160 58.00>42.00 21 58.00>30.00 12 178.00>152.00 15 53 丁卡因 21.256 71.00>56.00 12 71.00>43.00 9 176.00>92.00 18 54 3-硫丹 21.263 194.90>160.00 8 194.90>125.00 24 194.90>123.00 22 55 美达西泮 21.466 242.10>207.10 15 270.10>242.10 33 242.10>165.10 24 56 米氮平 21.548 195.00>167.00 27 265.00>195.00 9 195.00>151.00 27 57 布比卡因 21.803 140.00>84.00 15 140.00>98.00 12 140.00>56.00 24 58 司普替林 21.942 261.00>83.00 18 217.00>202.00 21 217.00>215.00 27 59 炔草酯 22.047 349.00>266.00 10 349.00>238.00 15 266.00>222.00 15 60 卡马西平 22.153 236.10>193.10 12 193.10>165.10 27 193.10>139.10 39 61 禾草灵 22.353 340.00>253.00 14 253.00>162.00 22 253.00>145.00 24 62 苄呋菊酯 22.492 143.10>128.10 10 171.10>143.10 6 171.10>128.10 14 63 艾司西酞普兰 22.840 324.00>58.00 9 324.00>45.00 21 238.00>218.00 12 64 胺菊酯 23.013 164.10>107.10 14 164.10>77.00 22 164.10>135.10 8 65 联苯菊酯 23.018 181.10>166.10 12 181.10>179.10 12 181.10>153.10 8 66 甲氰菊酯 23.146 181.10>152.10 22 265.10>210.10 12 181.10>127.10 28 67 地西泮 23.223 256.00>221.00 21 283.00>248.00 15 283.00>238.00 21 68 氯丙嗪 23.667 318.10>86.00 12 272.00>257.00 24 318.10>272.10 21 69 氯氟氰菊酯 24.005 208.00>181.00 8 197.00>141.00 12 197.00>161.00 8 70 2-氯地西泮 24.087 318.00>255.20 21 318.00>283.10 12 255.00>165.30 33 71 氯巴占 24.202 300.00>255.00 18 255.00>239.00 36 300.00>283.00 15 GCMSMS-276 72 咪达唑仑 24.472 325.10>310.10 9 310.10>257.10 24 310.10>247.10 27 73 氟硝西泮 24.646 312.00>266.00 18 286.00>240.00 15 312.00>237.00 30 74 氯菊酯 24.877 183.10>153.10 14 183.10>168.10 14 163.10>127.10 8 75 普拉西泮 24.913 324.10>295.10 21 295.10>267.10 12 324.10>241.10 21 76 奥氮平 25.495 242.10>213.10 9 229.10>196.10 21 242.10>209.10 9 77 氯氰菊酯 25.651 163.10>127.10 6 163.10>91.00 14 181.10>152.10 22 78 精喹禾灵 25.816 372.10>299.10 14 299.10>255.10 18 299.10>91.10 22 79 氯硝西泮 26.432 280.10>234.10 12 314.10>268.10 12 280.10>205.10 30 80 氯氮平 26.557 243.00>208.00 18 243.00>181.00 27 256.00>192.00 24 81 氰戊菊酯 26.577 225.10>119.10 20 225.10>147.10 10 419.10>225.10 6 82 氟胺氰菊酯 26.745 250.10>55.00 20 250.10>200.00 20 252.10>55.00 20 83 艾司唑仑 26.854 259.10>205.10 18 293.10>239.10 18 259.10>231.10 9 84 尼莫地平 26.952 296.00>196.00 24 254.00>196.00 12 296.00>254.00 9 85 溴氰菊酯 27.093 180.90>151.90 22 252.90>93.00 20 252.90>171.90 8 86 扎来普隆 27.463 248.00>231.00 15 248.00>221.00 15 305.00>262.00 15 87 三唑仑 27.871 313.00>277.00 24 313.00>242.00 33 342.00>313.00 18 88 曲唑酮 30.062 205.10>176.10 12 278.10>194.10 12 205.10>162.10 9 注1： “_”表示未设置相应离子对参数。 注2：同分异构体参数未显示全部峰的保留时间。 3.2标准溶液谱图 配制各农药等毒((药)物为100 ng/mL的混合标准溶液，检测得到的 TIC图和部分化合物质量色谱图如下 图所示。 图2标准溶液总离子流图(100ng/mL) Q109.00>79.00(+) 1.09e6 Q 108.00>80.00(+) 6.75e5 敌敌畏 速灭威 巴比妥 图3 部分毒(药)物MRM色谱图(浓度100 ng/mL) 3.3校准曲线及重复性结果 分别配制浓度为10、20、50、100和 200 ng/mL 的88种混合标准溶液，过 0.22 um微孔滤膜， 供GC-MS/MS 分析。 对混合标准品按1.2中的分析条件进行分析。以浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标外标法绘制校准曲线。部分校准曲线结果见图4，88种毒(药)物校准曲线线性相关系数均大于0.995。 对 50 ng/mL 混合标准溶液连续分析6次，计算重复性，峰面积 RSD 为 0.42%~6.52%，重复性良好。 图4 标准品校准曲线(部分) 3.4空白血液添加筛查定性实验结果 在血液空白样品中加入混标，添加量为 50 ng/mL浓度水平，按照2.1样品前处理流程，平行处理3份后上 机，考察筛查结果。 空白血液样品中，未出现与标准工作溶液中目标物保留时间相同(偏差小于等于±1.0%)的三对母离子/子离子对的色谱峰，无基质干扰信号。 空白血液添加检材样品提取液中出现与标准工作溶液中目标物保留时间相同(偏差小于等于±1.0%)的三 对母离子/子离子对的色谱峰，且添加样品提取液中两个离子对相对丰度比与标准工作溶液中目标物比较的最 大允许相对误差在允许的范围内，88种目标化合物均被检出，检出阳性结果可靠，，平行样品峰面积重复性 RSD <20%。 结论 使用岛津气相色谱-三重四极杆质谱联用仪 GCMS-TQ8050 NX 建立了生物检材基质中88种毒(药)物同时 筛查的方法。结果表明，该方法操作简单、分析速度快、重复性好、准确度高，可供相关人员参考。 岛津应用云