Kjeltec 9 ™分析仪/蒸馏单元按照 AOAC Official Method 964.21使用蒸馏单元测定食品中的甲醛

Kjeltec 9 ™分析仪/蒸馏单元按照 AOAC Official Method 964.21使用蒸馏单元测定食品中的甲醛AN 5526 优化的标准曲线，，高灵敏度 应用摘报 KjeltecTM 9 蒸馏单元 按照 AOAC 964.211使用 Kjeltec 9 蒸馏单元测 定食品中的甲醛 FOSS Kjeltec'M 9 蒸馏单元 样品类型 Kjeltec 9 是 一 种自动化的蒸馏装置，主要用于遵循凯氏定氮法进行 蛋白质分析，但也可广泛用于许多不同的蒸馏过程。该解决方案对 于检测量不那么大的实验室是完美的，并可以执行许多不同的蒸馏 方法。 本应用摘报中所述的方法包括下列 类别的样本： ● 食品 检出限：0.05-30 pg FOSS Nils Foss Alle 1 DK-3400 Hi l lerod Denmark Tel ： +45 7010 3370 Rev.1 应用信息 1.1 介绍 可以使用 Kjeltec 9 蒸馏单元按照 AOAC 964.21 测试食品中的甲醛含 量 。 1.2 原理 甲醛(CH2O)的测定先用蒸汽蒸馏法，再用分光光度法。甲醛与乙酸铵中的乙酰丙酮(C5H8O2)反应生 成3，5-二 乙酰-1，4-二 氢 丙氨酸。 用分光光度计在412 nm 处用标准比色皿测 量 该化合物的吸收。 需 要用甲醛储备液生成校准曲线。根据吸光度信号和制备的标准曲线计算未知样品浓度。储备液及 其分析证书(CoA)可从化学供应商处获得。 1.3 安全防范 小心的操作试剂来保证安全。对于试剂的操作可以参考有关的 MSDS 。 应始终佩戴个人防护装备，如手套、实验室工作服和防护眼镜等。处理热的消化管时也要加以注 意 。 遵守仪器用户手册和 MSDS 中的安全说明。 Fig. 1 个人防护设备 1.4 设备 A.分析天平，精确到0.1mg B.B FOSS Kjeltec 9 蒸馏装置 C 750 ml 蒸馏管 D. 能够在412 nm处进行测量的分光光度计，包括光程长度为10毫米、容量为 1.5 mL 的比色皿。 E. 锥形瓶，500ml F. 移液管，50mL 1.5 试剂 在分析中，使用分级纯以上级别的试剂。 有关试剂制备的进一步信息，请参考 AN 5511。 A.乙酰丙酮(C5HgO2) B. 乙酰丙酮溶液 0.25%(V/V)： a.用少 量 水稀释25克醋酸铵。 b. 加入冰乙酸3mL， 乙酰丙酮0.25 mL。 C.将溶液稀释至 100mL， 调整pH至6.0。 C. 醋酸铵 (C2H7NO2) D. 冰乙酸，99.7% w/w (CH：COOH) E. 甲醛储备液(1000 mg/L) 甲醛储备液标准化流程： a. 根据参考方法，如果 CoA 没有提供甲醛储备液中的甲醛浓度，则按照参考方法计算储备液中 的甲醛含量： b. 将25.0mL甲醛溶液转移到1000ml量瓶中，用水稀释到标记处。 c. 将10.0 mL新配制的甲醛储备液转移到一个锥形瓶中。 d. 加入25.0mL标准碘溶液和10.0 mL氢氧化钠溶液，轻轻混合。然后让溶液静置5分钟。 e.用 11.0 mL 盐酸酸化溶液，用标准硫代硫酸钠溶液滴定过量碘。当溶液颜色变淡时，加入 0.1 mL淀粉溶液。加入淀粉溶液后，颜色立即变为深蓝色。 f. 继续滴定，直到颜色由深蓝色变为无色。 q. 同 样，用10.0 mL 去离子水进行空白滴定。 h. 用空白和样品滴定值的差值计算储备液中的甲醛含量。 F. 甲醛稀释标准溶液(5ug/mL， 浓度在 CoA 上声明) a.2.5 mL 甲醛储备液转移到50mL容 量 瓶中。 b. 混合均匀，用水稀释至 50mL。 c. 将1毫 升此溶液继续加水稀释至100毫 升，混合均匀。 1.6 分析细节 1.蒸馏到体积大约为300至350 mL 。 2.将收集的蒸馏物转移到500ml容量瓶中，用去离子水将蒸馏物稀释到500ml。 1.6.1 蒸馏程序 型号 稀释水 蒸汽功率 Delay/SAfE 接收液 蒸馏时间 试管排空 Kjeltec 9蒸馏单元 100 ml 60% SAfE 30 ml 去离子水 15 min 否 Table 1 甲醛分析蒸馏的 一 般程序 1.7 步骤 1.7.1 样品准备 固体样品应研磨并均质到合适的颗粒大小。颗粒尺寸应小于1mm。 。称量10g固体样品到 750mL蒸馏管中。 液体样品调整到室温。溶解的二氧化碳通过剧烈摇动样品或使用超声波水浴脱气来去除。 。移取100mL液体样品到 750mL蒸馏管中。 所有制备的样品应尽快进行分析或保存在2-5℃之间，直到进行分析为止。 1.7.2 使用分光光度计制作标准曲线 将适 量 甲醛稀释标准溶液(5ug/mL)移液到带塞的试管中，制得一系列参比溶液。 标准溶液序号 0 (Blank) 1 2 3 4 5 甲醛稀释标准溶液(5.0pg /mL)， mL 0 0.2 0.8 2.0 4.0 6.0 甲醛， pg 0 1.0 4.0 10 20 30 Table 2 移取甲醛稀释标准溶液制作标准曲线 1. 每个试管用去离子水稀释至 10ml，加入2 mL 0.25%乙酰丙酮溶液。 2.将试管放入60℃的水浴中 10分钟，冷却至 室 温。 3. 吸取 1.5 mL标准溶液到 1 cm 比色皿中。 4. 记录每个标准溶液对应的甲醛/乙酰丙酮试剂络合物在 412 nm 处的吸光度值。 5. 同时也进行空白样品(去离子水)的测试。 6. 标准溶液A的吸光度值减去空白溶液的 A0 值设为Y值。 7. 甲醛含 量 (ug)设为X值。然后用线性回归法制作标定曲线。 1.7.3 样品测量 1.移取 10mL稀释好的馏出液到 一 个有塞子(玻璃)的试管中，用移液管移取2ml 0.25%乙酰丙酮溶 液加在同一试管中。 2. 将试管放入60℃的水浴中 10分钟，冷却至室温。 3. 记录样品对应的甲醛/乙酰丙酮试剂络合物在412 nm处的吸光度值。 4. 同时也进行空白样品(去离子水)的测试。 1.8 结果表达 根据计算出的Y值，可以在标准曲线中得到甲醛含量(ug)。 1.8.1 计算 甲醛/乙酰丙酮在412 nm 处的吸光度值"Y"可按下式计算。 A：样品的吸光度值 Ao： 空白的吸光度值 甲醛含 量 C (ug/mL或 ug/g)可按以下公式计算： X：根据吸光度值在标准曲线中查得的甲醛含量。 m： 样品量 50：稀释因子 1.8.2 方法性能 样品 使用本应用摘报中描述的程序对小麦粉、米线、豆腐干和豆腐进行了甲醛含 量 的初步筛选(n=2)。选择米粉进行完整分析(n=10)，因为该样品在四种样品中甲醛含 量 最高。采用 Kjeltec 8200 蒸馏装 置进行性能比较(n=3)。 所有的样品都使用 KN295 Knifetec 磨到合适的颗粒大小，使用的样品量见1.7.1。 样品按 Table 3 进行分析。 型号 稀释水 蒸汽功率 Delay/SAfE 接收液 蒸馏时间 试管排空 Kjeltec 9 蒸馏单元 100 ml 60% SAfE 30ml 去离子水 15 min 否 Kjeltec 8200 蒸馏单元 100 ml 60% SAfE 30ml 去离子水 15 min 否 Table 3 用于方法性能数据的样品和甲醛标准溶液的分析条件。 甲醛含量标准曲线 标准溶液按 1.7.2进行分析；由于最初的样品筛选发现分析样品中的甲醛含量非常低，所以制作了两 条标准曲线。 Table 4 X 轴为甲醛含量(ug)。Y轴为每个校准点的吸光度读数(n=3)。 Table 5 X 轴为甲醛含量(ug)。Y轴为每个校准点的吸光度读数(n=3)。 Kjeltec 9 蒸馏单元的结果 该研究是在 FOSS 使用 Kjeltec 9 蒸馏单元进行的。使用本应用摘报中描述的程序进行。 No. 样品(g)米线 吸光度 Y (As-Ao) 甲醛含量， ug/g 甲醛含量， pg/g B1 0，0612 B2 0，0611 一 B3 0，0608 常规标准曲线 高灵敏度标准曲线 S2 10，0073 0，0647 0，0039 0，6359 0，9948 S3 10，0015 0，0638 0，0030 0，4318 0，7963 S4 10，0060 0，0639 0，0031 0，4543 0，8181 S5 10，0054 0，0634 0，0026 0，3407 0，7076 S6 10，0087 0，0639 0，0031 0，4542 0，8179 S7 10，0007 0，0640 0，0032 0，4772 0，8406 S8 10，0032 0，0640 0，0032 0，4771 0，8404 S9 10，0034 0，0635 0，0027 0，3635 0，7298 S9 10，0080 0，0631 0，0023 0，2725 0，6411 S10 10，0000 0，0635 0，0027 0，3636 0，7301 平均值 0，00298 0，427 0，791 标准偏差 0，0004 0，099 0，097 %相对标准偏差 14，74 23，35 12，26 Table 6 Kjeltec 9 蒸馏单元数据 1.8.3 Kjeltec 8200 蒸馏单元的结果 该研究是在 FOSS 使用 Kjeltec 8200 蒸馏单元进行的。使用本应用摘报中描述的程序进行。 No. 样品(g)米线 吸光度 Y (As-Ao) 甲醛含量， ug/g 甲醛含量， ug/g B1 0，0613 一 B2 0，0611 一 B3 0，0604 常规标准曲线 高灵敏度标准曲线 S1 10，0016 0，0657 0，0053 0，9544 1，3051 S2 10，0002 0，0653 0，0049 0，8636 1，2168 S3 10，0008 0，0655 0，0051 0，9090 1，2610 S4 10，0018 0，0661 0，0057 1，0453 1，3936 平均值 0，01 0，94 1，29 标准偏差 0，00 0，077 0，075 %相对标准偏差 6，51 8，22 5，83 Table 7 Kjeltec 8200 蒸馏单元数据 1.9 参考方法 [1] AOAC Official Method 964.21 2 问题和反馈 如果您对这个应用摘报有任何问题或反馈，请联系 FOSS 的支持团队。 Jacob Strange Ebbesen Product Specialist， Service 3 版本历史 版本 发布日期 修改内容 批准 1 2022-06-14 首发 JSE