咖啡豆中赭曲霉毒素A的测定 （Copure® MAX混合阴离子交换柱）

咖啡豆中赭曲霉毒素A的测定（Copure® MAX混合阴离子交换柱）《GB 5009.96-2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定 第二法 离子交换固相萃取柱净化高效液相色谱法》咖啡作为一种日常饮料，其质量安全至关重要。真菌毒素污染是影响咖啡质量安全的关键风险因子之一，其中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A，OTA)是咖啡中最常见的真菌毒素之一。逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定咖啡豆中OTA含量的方法，试样经提取后，经离子交换固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱仪结合荧光检测器测定。经验证，加标回收率范围95-105%，RSD值小于5%，满足测试要求。样本前处理1.1提取咖啡豆样品经粉粹后，称取试样粉2.5 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管(带盖)中，加入25 mL甲醇-碳酸氢钠溶液(30 g/L)(体积比50：50)于涡旋振荡器振荡提取10 min，8000 r/min离心5.0 min后上清液用滤纸过滤，取10 mL提取滤液待净化。 1.2净化 分别用5.0 mL甲醇、5.0 mL甲醇-碳酸氢钠溶液(30 g/L)(体积比50：50)活化MAX萃取柱，然后将上述待净化提取液加入固相萃取柱，调节流速以1滴/s~2滴/s的速度通过柱子，压干。然后分别依次用5.0 mL淋洗液（0.1 mol/L氢氧化钾溶液：乙腈：水=(3：50：47）、5.0 mL水、5.0 mL甲醇淋洗小柱，抽干。加入5.0 mL洗脱液（甲醇：乙腈：甲酸：水=40：50：5：5），收集洗脱液于玻璃氮吹管中，于45℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL乙腈-2%乙酸水溶液(体积比50：50)，涡旋复溶，过滤至进样小瓶中，上液相色谱测试。1.3过程空白实验不称取试样，按上述步骤进行实验。仪器条件设备：Thermo Scientific UltiMate 3000色谱柱：Commasil®AQ-C18（4.6 mm*250 mm，5 um）检测器：荧光检测器（激发波长333 nm、发射波长460 nm ）流动相：A：2%乙酸水  B：乙腈洗脱方式：梯度洗脱条件见下表1流速：1 mL/min 进样体积：5 µL表1 流动相及梯度洗脱条件时间/min流动相A流动相B088122.0881210.0802012.0703019.0505030.0505031.0010039.0010040.0881245.08812实验测试结果表2 咖啡豆中赭曲霉毒素A加标回收实验结果检测项目加标浓度（μg/kg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）赭曲霉毒素A20.097.099.02.7410195.9图1 校准点液相色谱图（5 μg/L）图2 咖啡豆本底液相色谱图图3 咖啡豆中赭曲霉毒素A的液相色谱图（加标浓度20 μg/kg）订购信息货号描述包装COMAX3200Copure®混合阴离子交换柱，200 mg/3 mL50支/盒CSAQC183059Commasil® AQ-C18 4.6mm*250mm,5um1根/盒SDC-3000-Dbiocomma® 多管涡旋混匀仪1台/箱BN24biocomma® 24孔智能氮吹仪1台/箱SF130-22-PTFECopure®针式过滤器， 孔径0.22 μm，PTFE有机系100个/盒SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒咖啡豆中赭曲霉毒素A的测定 (Copure@ MAX 混合阴离子交换柱) 《GB 5009.96-2016食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A的测定 第二法离子交换固相萃取柱净化高效液相色谱法》 咖啡作为 一 种日常饮料，其质量安全至关重要。真菌毒素污染是影响咖啡质量安全的关 键风险因子之 一 ，其中赭曲霉毒素 A(Ochratoxin A， OTA)是咖啡中最常见的真菌毒素之一。 逗点生物结合自身产品优势，建立了固相萃取-高效液相色谱法测定咖啡豆中 OTA 含量 的方法，试样经提取后，经离子交换固相萃取柱净化后，采用高效液相色谱仪结合荧光检测 器测定。经验证，加标回收率范围 95-105%， RSD 值小于 5%，满足测试要求。 一 、样本前处理 1.1提取 咖啡豆样品经粉粹后，称取试样粉2.5g(精确至0.01 g)于 50 mL 离心管(带盖)中，加入 25 mL 甲醇-碳酸氢钠溶液(30 g/L)(体积比 50： 50)于涡旋振荡器振荡提取 10 min， 8000 r/min 离心 5.0 min 后上清液用滤纸过滤，取10 mL 提取滤液待净化。 1.2净 化 分别用 5.0 mL 甲醇、5.0 mL 甲醇-碳酸氢钠溶液(30g/L)(体积比50：50)活化 MAX萃取 柱，然后将上述待净化提取液加入固相萃取柱，调节流速以1滴/s~2滴/s的速度通过柱子，压干。然后分别依次用 5.0 mL 淋洗液(0.1 mol/L 氢 氧化钾溶液：乙腈：水=(3：50：47)、5.0 mL 水、5.0 mL 甲醇淋洗小柱，抽干。加入5.0 mL 洗脱液(甲醇：乙腈：甲酸：水=40：50：5：5)，收集洗脱液于玻璃氮吹管中，于45℃下氮气吹至近干。加入1.0 mL 乙腈-2%乙酸水溶液(体积比50：50)，涡旋复溶，过滤至进样小瓶中，上液相色谱测试。 1.3过程 空 白实验 不称取试样，按上述步骤进行实验。 二 、仪器条件 设备： Thermo Scientific Ult i Mate 3000 色谱柱：CommasilAQ-C18 (4.6 mm*250 mm， 5um) 检测器：荧光检测器(激发波长 333 nm、发射波长 460nm) 流动相：A：2%乙酸水 B：乙腈 洗脱方式：梯度洗脱条件见下表1 流速：1 mL/min 进样体积：5uL 表1流动相及梯度洗脱条件 时间/min_ 流动相A 流动相B 0 88 12 2.0 88 12 10.0 80 20 12.0 70 30 19.0 50 50 30.0 50 50 31.0 0 100 39.0 0 100 40.0 88 12 45.0 88 12 三 、实验测试结果 表2咖啡 豆 中赭曲霉 毒 素A加标回收实验结果 检测项目 加 标浓度<(ug/kg) 回收率(%) 平均回收率((%) RSD((%) 图1校准点液相色谱图(5ug/L) 三 OTA2823 图2咖啡豆本底液相色谱图 图3咖啡 豆 中赭曲霉 毒 素A的液相色谱图(加标浓度 20 ug/kg) 订购信息 货号 描述 包装 COMAX3200 Copure@混合阴离子交换柱，200 mg/3 mL 50支/盒 CSAQC183059 Commasil@ AQ-C18 4.6mm*250mm，5um 1根/盒 SDC-3000-D biocomma@ 多管涡旋混匀仪 1台/箱 BN24 biocomma@ 24 孔智能氮吹仪 1台/箱 SF130-22-PTFE Copure@针式过滤器，孔径 0.22 um， PTFE 有机系 100个/盒 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL 螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm， 9-425 100个/盒