瘦肉精类 β-受体激动剂类检测前处理净化固相萃取净化柱专用柱29种

瘦肉精检测之简便固相萃取净化方法FaVEx-AG瘦肉精专用柱FaVEx-AG净化原理：称取畜类肌肉或内脏等样品，加入盐酸溶液酸解，让瘦肉精类兽药残留充分释放出来，然后加入酸化乙腈溶液萃取目标物；上清液通过FaVEx-AG瘦肉精类专用SPE净化柱时，杂质被保留在填料上，浓缩转溶，以液相色谱-串级质谱仪的方法（LC-MS/MS）分析。FaVEx-AG适用的瘦肉精种类：验证过29种（包括但不限于）：3-邻甲基-甲酚、福莫特罗、班特罗、溴丁烯醇、溴氯丁烯、卡莫特罗、西马特罗、西布特罗、克伦特罗、环己醇、氯戊醇、克伦特罗、克伦丙罗、科尔特罗、酚甾醇、福莫特罗、羟甲基克伦特罗、茚达特罗、异丙肾上腺素、美特罗、马喷特罗、奥达特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、沙美特罗、叔丁基去甲肾上腺素、特布他林、杜洛特罗、齐帕特罗。FaVEx-AG净化方法特点： 不需酶解，只需酸解，大大节省时间，1.5h完成一批20个样品净化； 操作简单，SPE柱无须活化平衡，节省溶剂、实验设备和人力； 样品溶液以每秒一滴的速度通过SPE柱，5分钟完成净化； 搭配正压固相萃取装置，批量6只/12只过柱，效率更高；样品提取与净化：畜肉或畜内脏基质 称取2.0g样品，加均质石、一定体积的盐酸溶液、剧烈震荡5min； 加10mL 乙腈溶液（1%乙酸)，剧烈振荡5min，离心（≥4000rpm）5min； 取一定体积的上清液加入FaVEx-AG SPE柱中，以每秒1滴的速度流出，收集全部滤液； 取一定体积的滤液，浓缩至近干，以甲醇/水（V/V=6:4）溶液定容至1.0mL； 过0.22μm滤膜后，上机LC-MS/MS分析。备注：使用HPPE-48高通量真空振荡浓缩仪，批量48个做浓缩回溶，效率更高；产品信息：品牌存货编码描述规格巨研FAVEX-AGFast Veterinary Drug Extraction Kit- Agonist 50/PK50只/盒欢迎联络索取药剂清单和仪器分析方法！公開日期：109年9月14日TFDAV0022.00 食品·動物#藥殘留量檢驗方法一乙型受體素類多重殘留快速萃取方法Method of Test for Veterinary Drug Residues in Foods - Fast ExtractionMethod for Multiresidue Analysis of β-Agonists 1.遮節圍：木檢验方法遮#芬畜產品之肌擎、卜曉及唱防。brombuterol等21項乙型受體素：多重残留分析。 2.检除方法：：檢體經酸水解，揉#乙型受體素快速萃取画 (Fast ExtractionCartridge， FaPEx-VAG)淫化後：，以液相臀析吕聯質譜儀(liquid chromatograph/tandem mass spectrometer，LC-MS/MS)分析之节法。 2.1.裝置 2.1.1.液相臀析吕聯質譜儀： 2.1.1.1.離子源∶電灑離子礼(electrospray ionization， ESI)。 2.1.1.2.臂析管： ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18· 1.8 um·p徑3.0mmx10cm'或后級品。 2.1.2.攪拌均質器(Blender)。 2.1.3..常速分散裝置(High speed dispersing device)：SPEX SamplePrep2010 GenoGrinder，1000rpm以上，式脂玉品。 2.1.4.旋漏混合器(Vortex mixer)。 2.1.5. 離心榄(Centrifuge)：達10000 xg以上，，溫度控制已達4℃以下青 2.1.6.每郭濃縮裝置(Nitrogen evaporator)。 2.2.詳藥：冰醋酸、鹽酸及日酸均揉詳藥特級；乙晴及日醇均探液相臂析級；去離子水(此霞限芬25℃口達18MQ·cm似上)；型受體素對照#標準品brombuterol等21項(品項見咐表)；cimaterol-d7、clenbuterol-dghydrochloride、fenoterol-d6hydrobromide、mabuterol-dg、ractopamine-d6、salmeterol-d3及 zilpaterol-d7后位素凡部標準品。 2.3.器昊及材料： 2.3.1.離心管：15mLz50mL，PP材質。 2.3.2.陶竟均質石(Ceramic homogenizer) ： Bond Elut QuEChERS P/N5982-9313，或后品。 2.3.3.濾嘆：孔徑0.22 um·Nylon材質。 2.3.4.聖疁針籠∶10mL，PP材質。 2.3.5.乙到受體素快速萃取面： FaPEx-VAG.·檢液負节量5mL·或后煞品。 2.4.1.含1%醋酸之乙晴溶液： 玖冰醋酸10 mL，如乙晴使或1000mL。 2.4.2.0.05N鹽酸溶液： 更鹽酸0.42 mL，緩緩如入去離子水90mL口，且如去離子水使式100mL。 2.4.3.0.1%酸溶液： 更日酸0.1mL，z入去離子水使式100mL。 2.4.4.0.1%酸：日醇(9：1，v/v)溶液： 头0.1%酸溶液典日醇以9：1(v/v)之比例混身 2.5.移動相溶液之譯製： 2.5.1.移動相溶液A： 取日酸1mL，如去離子水使心1000 mL，以濾嗔通濾，亞濾液供作移動相溶液A。 2.5.2.移動相溶液B： 取日酸1mL，如醇造或1000mL，以濾嗔遞濾，亞濾液供作移動相溶液B。 2.6.卜部棵準溶液之配製： 头相當艹含cimaterol-d7、clenbuterol-dg、fenoterol-d6mabuterol-d9ractopamine-d6`salmeterol-d2 zilpaterol-d7各約1mg，精確程定，分司以日醇溶解並定容至10mL，作盖卜部標準原液·冷凉貯存。 喉#時取遮量各卜部標準原液混合，以日醇稀釋至500 ng/mL，供作凡部標準溶液。 2.7.標準溶液之配制： 取相當含brombuterol、t-butylnorsynephrine (buctopamine))、cimaterol、cimbuterol、clenbuterol、clencyclohexerol、clenisopenterol、clenpenterol、clenproperol 、fenoterol、formoterol、isoxsuprine、mabuterol、mapenterol、3-o-methyl-colterol、ractopamine salbutamol、salmeterol、terbutaline、tulobuterol& zilpaterol之對照#標準品各約5mg'精釋確定，分司以日醇溶解逆定容至50mL，作兰棵準原液，冷凉貯存·隔#時取遮量各標準原液混合，以0.1%酸：日醇(9：1，v/v)溶液稀釋至100 ng/mL，供作棵準溶液。 2.8.檢液之部製： 將檢體.細切均質後，头約2g，精確程定，量艹50mL離心管口入队部標準溶液40 uL20.05M鹽酸1mL·早如入陶专均質石1顯，以高速分散裝置古1000 rpm振湿萃亞5分鐘，如c入含1%醋酸之乙晴溶液10 mL，蓋上離心管蓋，再以音速分散装置古1000 rpm振湿萃 取5分鐘，於4℃!4000xg離心5分鐘，亞上清液5mL注入乙型受體素快速萃取面，流速控制.1涌/秒·收集流出液，伦总檢液原液。头检液原液2.5 mL(a)，以每第吹至刷範，残留物以0.1%酸：日醇(9：1，v/v)溶液1mL溶解(b)，混合均身，經濾嘆通濾，供作梭液。 2.9.基質~配檢量總之製作： 取空白檢體·依2.8.等認製夫如卜部標準品之检液原液，取2.5 mL(a)，以事第吹亞刷乾，分日如入標準溶液5~300 pL、卜部棵準溶液10 uL及i量0.1%酸：日醇(9：1，v/v)溶液·使體積，1mL(b)，混合均身，供作基質~配檢量總溶液。依下列筷性進行分析，就各乙型受體素奥队部標準品波峰面積比，與對應之各乙型受體素濃度，分刮製作0.5~30 ng/mL之基質~配檢量總。 液相屑析吕聯質譜測定筷仕(注)： 臀析管：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18· 1.8 um·卜徑3.0mmx 10cm。 臀析管澀度：40°℃。 移動相溶液：：A液舆B液以下列°性追行梯度分析 時眉(min) A(%) B(%) 0.0→1.0 98→90 2→10 1.0一5.0 90→90 10→10 5.0→6.0 90→50 10→50 6.0→8.0 50→10 50→90 8.0→10.0 10→0 90→100 10.0→11.0 0→98 100→2 移動相流速：0.3mL/min。 注入量：5uL。 工平细管電壓(Capillary voltage) ： 4.0kV。 噴哮電壓(Nozzle voltage) ：0 kV。 離子化模式：ESI正離子。 乾燥第體澀度(Gas temperature)：280℃。 乾燥棄體流量(Gas flow) ： 9 L/min。 霧化第體壓*(Nebulizer gas pressure)： 40 psi。 鄞第溫度(Sheath gas temperature) ：350℃。 茸氣流量(Sheath gas flow) ： 11 L/min。 偵測模式：多重反應偵測(multiple reaction monitoring， MRM)。鎖測離子對、碎斗電壓(fragmentor voltage)奥碰撞能量(collision energy)如附表 註：上述測定族仕分析不遮時，依听范什之儀器，設定遮合之測定条仕。 2.10.鋼剛試除及含含量測定： 精確量亞檢液孕基質~配檢量總溶液各5uL，分司注入液相臀析吕聯質譜儀中，依2.9.等筷性進行分析，就檢液與基質~配檢量總溶液听得波峰之滯留時間及多重反應偵測相對离子验度(*錳引之，並依下列計算式求出檢體。各乙到受體素之含量(ppm)： C×V×F 檢體名各乙型受體素之含量(ppm)=M×1000 C：+基質~配檢量總求得檢液中名备乙型受體素之濃度(ng/mL) Ⅴ：萃亞檢體之含1%醋酸之乙晴溶液之體積(10 mL) M：玖樣分析檢體之重量(g) F：濃縮倍數，db/a求得 註：相對離子验度旦定性離子對與定量離子對之波峰函積相除而得(<100%)，容許節圍如下： 相對離子验度(%) 容許節圍(%) >50 ±20 >20~50 ±25 >10~20 ±30 ≤10 ±50 咐注：1.木檢除六法之定量極限势肌吸均总0.001 ppm、挚p及防均￥0.005 ppm。 2.檢體桌影響檢驗結果之物質時，應自行探討。 參考户獻： 1.Lin， S. K.， Chuang， W. C. and Chen， J. W. 2017. Quick extraction kitadapted to a procedure of detecting pesticide residues in agriculturalproducts and a method of obtaining a primary test liquid from anagricultural sample by the quick extraction kit. U.S. Patent No.9581579. 2. 衛生福利部。2019。食品·動物#藥残留量检除方法一乙型受體素類多重残留分析(MOHWV0041.04)。108年5月9日衛授令字第1081900642號公告修正。 參考臂析圆譜 鬧、以LC-MS/MS分析21項乙型受體素類動物#藥標準品及7項片位素卜部標準品之MRM塌譜 鬧、以LC-MS/MS分析21項乙型受體素類動物#藥標準品及7項卡位素队部棵準品之MRM圓譜(續) 咐表、Brombuterol等21項乙型受體素及卜部標準品之多重反應偵測模式參數 項女 分析物 離子對(注) 碎片電壓(V) 碰撞能量(eV) 产部標準品(社) 前隔離子(m/z)>產物離子(m/z) 1 Brombuterol 367>214*367>212367>293 104 493313 Mabuterol-d9 2 t-Butylnorsynephrine(Buctopamine) 210>136*210>192210>91 74 36168 Zilpaterol-d7 3 Cimaterol 220>160*220>202220>143 87 17217 Cimaterol-d7 4 Cimbuterol 234>160*234>216234>143 99 2595 Fenoterol-d6 5 Clenbuterol 277>132*277>203277>259 94 29135 Clenbuterol-d9 6 Clencyclohexerol 319>203*319>301 109 379 17 Fenoterol-d6 319>168 7 Clenisopenterol 291>188*291>273291>217 105 9 9 5 Mabuterol-d9 8 Clenpenterol 291>203*291>132291>168 105 301515 Mabuterol-d9 9 Clenproperol 263>245*263>203263>132 89 121826 Ractopamine-d6 10 Fenoterol 304>107*304>135 121 2917 Fenoterol-d6 11 Formoterol 345>149*345>121 94 5317 Clenbuterol-d9 12 Isoxsuprine 302>284*302>107302>150 114 29179 Mabuterol-d9 13 Mabuterol 311>237*311>217311>202 109 331325 Mabuterol-d9 14 Mapenterol 325>237*325>217325>202 109 412513 Mabuterol-d9 15 3-0-Methyl-colterol 240>166*240>134240>121 99 25219 Fenoterol-d6 16 Ractopamine 302>121*302>107302>284 104 372113 Ractopamine-d6 附表、Brombuterol等21項乙·到受體素及卜部標準品之多重反應偵測模式參數(續) 項文 分析物 離子對(注) 碎计電壓(V) 碰撞能量(eV) 八部標準品() 前隔離子(m/z)>產物離子(m/z) 17 Salbutamol 240>148*240>222240>166 99 1359 Zilpaterol-d7 18 Salmeterol 416>232*416>91 416>398 104 20109 Salmeterol-d3 19 Terbutaline 226>152*226>107226>125 104 29 21 9 Zilpaterol-d7 20 Tulobuterol 228>154*228>118228>172 94 29135 Mabuterol-do 21 Zilpaterol 262>185*262>202262>244 99 21175 Zilpaterol-d7 I.S. Cimaterol-d7 227>209 15 17 I.S. Clenbuterol-do 286>204 14 19 一 I.S. Fenoterol-d6 310>141 8 14 L.S. Mabuterol-dg 320>238 20 20 I.S. Ractopamine-d6 308>168 113 16 — I.S. Salmeterol-d3 419>235 138 24 一 I.S. Zilpaterol-d7 269>185 99 21 註：1.*盖定量離子對，定性離子對口視基質情況選擇進合之互少一對離子對2..卜部標準品已使升不卡數目务棵幟之卡位素内標，並修正MRM參數