细胞中超声波破碎检测方案(细胞破碎仪)

实验目的 获取蛋白分子量和等电点，推算诱导蛋白分子量： 方法一：Mr=115*1000/3=38*10³Da（1个氨基酸的大约分子量为115）Mr=1*37=37kDa（1kb DNA对应333个氨基酸，大约37kDa） 方法二：将氨基酸序列输入特定的软件中，获取蛋白的分子量和等电点性质。 实验材料 LB培养基（Luria-Bertani），PBS缓冲液（phosphate buffered saline），离心机，移液器，超声波破碎仪实验步骤利用实验确定的最佳诱导条件进行大量诱导表达，将诱导后的菌液转移到离心管中（15ml），配平后，4000rpm离心5min，弃去上清，收集菌体； 用等体积PBS缓冲液洗涤菌体1~2次，然后4000rpm离心5min，弃去上清，收集菌体； 用10ml PBS缓冲液进行悬浮（每1g菌体加入10ml缓冲液），离心洗涤； 将超声发射杆插入菌悬液中，并拧紧夹子，将菌液管固定好，然后将装冰水的烧杯通过托架向上抬起，将菌悬液置于冰水中； 超声条件：功率50W`150W，工作1s，间隙2s，温度控制在30℃以下，冰浴条件下开始超声破碎，超声总时间10~30min； 超声结束后，取出样品，并用无菌水清洗超声杆； 超声破碎后，菌悬液变轻； 溶液配平后，4℃，12000rpm离心20min； 离心结束后，将上清液转移到新的离心管中，作为粗酶液； 取出40μl的粗酶液作为细胞破碎的上清液； 沉淀部分用10ml PBS缓冲液悬浮，然后取出40μl作为细胞破碎沉淀的悬浮液； 将超声波破碎的上清样品与沉淀悬浮样品，放入-20℃冰箱中保存备用； SDS-PAGE分析，样品有诱导前、诱导后、破碎、上清、破碎沉淀； 利用可溶性蛋白及超声波破碎细胞的上清液、粗酶液，准备过清和层析柱。