仔猪饲粮、粪便中粗脂肪、粗纤维检测方案(纤维测定仪)

动物营养学报2021，33(6)：3154-3164Chinese Journal of Animal Nutrition 王晨昱等：D-天冬氨酸对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和营养物质表观消化率的影响31556期 * Corresponding author， professor， E-mail： tjli@ isa.ac.cn D-天冬氨酸对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和营养物质表观消化率的影响 王晨昱1，2 刘永辉 李 响 胡 鲜 何流琴1，3 李铁军1，2* 印遇龙1，2 (1.中国科学院亚热带农业生态研究所，动物营养生理与代谢过程湖南省重点实验室，长沙 410125；2.中国科学院大学现代农业科学学院，北京100049；3.湖南师范大学生命科学学院，动物肠道功能湖南省重点实验室，长沙 410081) 摘 要：本试验旨在研究 D-天冬氨酸对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、血清游离氨基酸含量和营养物质表观消化率的影响。选取45日龄体重为(10.74±0.25) kg 的三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪44头，随机分为4组，每组ll个重复，每个重复l头猪，其中对照组饲喂基础饲粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂在基础饲粮中添加50、500和5 000 mg/kg D-天冬氨酸的试验饲粮。正试期为28 d。结果表明：1)与对照组相比，试验第14天，试验Ⅰ组断奶仔猪体重显著提高(P<0.05)；添加50 mg/kg D-天冬氨酸显著提高断奶仔猪平均日增重和平均日采食量，且显著降低料重比(P<0.05)。2)与对照组相比，添加D-天冬氨酸对断奶仔猪脏器指数无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比，试验Ⅱ和Ⅲ组的血清总蛋白(TP)含量显著提高(P<0.05)，3个试验组血清白蛋白(ALB)含量和碱性磷酸酶(ALP)活性亦显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比，试验组的的清异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和缬氨酸(Val)含量显著降低(P<0.05)，但是赖氨酸(Lys)含量显著升高(P<0.05)。试验Ⅲ组血清天冬氨酸(Asp)含量显著高于其他3组(P<0.05)，试验Ⅱ组的血清甘氨酸(Gly)和半胱氨酸(Cys)含量显著高于其他3组(P<0.05)。5)与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组粗脂肪表观消化率显著提高(P<0.05)；试验Ⅰ组的粗蛋白质、总能和粗纤维表观消化率最低。综上所述，在低蛋白质平衡饲粮中添加50 mg/kg的 D-天冬氨酸可改善仔猪生长性能，促进营养物质吸收利用。 关键词：D-天冬氨酸；断奶仔猪；生长性能；血清生化指标；表观消化率 中图分类号：S828 文献标识码：A 文章编号：1006-267X(2021)06-3154-11 天冬氨酸(Asp)作为一种功能性氨基酸1，在糖代谢、尿素循环、线粒体功能等代谢方面发挥着重要的生物学作用[2]，可改善动物机体免疫和抗氧化功能以及促进生长发育3J。而作为L-天冬氨酸(L-Asp)的同分异构体D-天冬氨酸(D-Asp)则很少被关注。研究表明，经碱性、高pH和长期加热等加工技术处理的食品含有包括 D-Asp 在内 的大量D-氨基酸4，体内也可通过D-天冬氨酸 氧化酶和天冬氨酸消旋酶转酶或者合成获得14-6」D-Asp 大多分布于脑(包括海马和前额叶皮层)和内分泌器官(肾上腺、垂体和睾丸)中，对维持动物正常的中枢神经系统和神经元功能以及调控激素水平平方面发挥重要作用。添加 D-Asp可调节小鼠生长激素的释放，促进小鼠的生长发 ( 收稿日期：2020-11-10 ) ( 基金项目：国家自然科学基金项目(31872371，31902168)；广西重点研发计划(桂科AB19259012)；中国科协青年托举人才项目 (2019QNRC001)；湖湘青年英才计划项目(2020RC3052)；广东省基础与用用基础研究基金项目(2019A1515110852)；湖南省自然科学优秀青年科学基金项目(2019JJ30017)；湖南省科技领军人才项目(2019RS3022) ) ( 作者简介：王晨昱(1996一)，男，陕西宝鸡人，硕士研究生，动物营养与饲料科学专业。E-mail： wa n gchenyu_su@126.com ) ( *通信作者：李铁军，研究员，博士生导师，E-mail： tjli@isa.ac.cn ) 育18J，在热应激条件下，饲粮添加适量 D-Asp 或添加可产生 D-Asp 的活菌，可通过调节神经系统有效降低直肠温度，产生镇静作用，从而改善雏鸡的采食量以及生长性能9。除了在缓解雏鸡热应激方面有很大潜力，D-Asp 也可以通过改变肠道微生物菌群区系影响断奶仔猪的生长性能10J。目前关于D-Asp 功能研究大多集中于医学和药学领域，在畜牧养殖业中关于 D-Asp 对生猪机体健康和生长性能的影响研究鲜少报道。因此，本研究拟通过在饲粮中添加不同水平的 D-Asp，探讨其对断奶仔猪生长性能、血清生化指标、游离氨基酸含量以及营养物质表观消化率的影响，为改善仔猪生长性能和提高营养物质表观消化率提供理论依据，同时为畜禽功能性氨基酸营养需要与饲养管理提供新的调控策略。 材料与方法 1.1 试验材料 D-Asp(纯度≥98%)购自湖南某生物科技有限公司。基础饲粮购自长沙某饲料科技有限公司。三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪购于湖南某农牧发展有限公司。 1.2 试设计 选择44头体况相近的45日龄健康三元杂交(杜×长×大)断奶仔猪，平均体重为(10.74±0.25)kg，随机分为4组，每组11个重复，每个重复l头猪，公母各占1/2，其中对照组饲喂粗蛋白质(CP)含量为17%的玉米-豆粕型基础饲粮，D-Asp添加量根据 Li 等[10]和前期预试验结果设置，鹉验Ⅰ、、Ⅲ组分别饲喂在基础饲粮中添加50、500和5000 mg/kg D-Asp 的试验饲粮。基础饲粮的配制参照 NRC(2012)中 10~30 kg体重断奶仔猪营养需要标准，其组成及营养水平见表1，饲粮中氨基酸含量见表2。 1.3 饲养管理 本试验在中科院亚热带农业生态研究所动物饲养室进行，全封闭式猪舍，漏缝金属材质地板，不锈钢可调式料槽，乳头式饮水器。仔猪单笼饲养，并按照猪场标准饲养管理程序对试验猪进行驱虫与免疫处理。预试期5 d，正试期28d。每天饲喂粉料3次，时间为 07：30、12：00 和18：30，自由饮水和采食，以食槽无剩料为原则。整个圈舍 采取自然通风，在养殖期内对所有圈舍进行不定期消毒和清扫。 表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table l1(Composition and nutrient levels of thebasal diet (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 豆粕 Soybean meal 14.20 玉米 Corn 63.50 豆油 Soybean oil 2.00 石粉 Limestone 0.74 氯化钠 NaCl 0.40 膨化大豆 Expanded soybean 7.50 鱼粉 Fish meal 3.00 乳清粉 Dried whey powder 3.00 葡萄糖 Glucose 2.76 赖氨酸 Lys 0.61 蛋氨酸 Met 0.18 苏氨酸 Thr 0.20 色氨酸 Trp 0.04 磷酸氢钙 CaHPO 0.87 预混料 Premix 1.00 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels2 消化能 DE/(MJ/kg) 14.55 赖氨酸 Lys 1.23 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.68 苏氨酸 Thr 0.73 色氨氨 Trp 0.20 总能 GE/(MJ/kg) 17.49 粗蛋白质 CP 17.33 粗脂旨 EE 7.26 粗纤维 CF 2.30 粗灰分 Ash 6.27 1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided thefollowing per kg of the diet： VA 24 375 IU，VB 7.5 mg，VB，18.75 pg， VB，9 mg，VB275 mg，VD， 7 500 IU， VE 60 IU，VK， 7.5 mg，生物素 biotin 0.45 mg，叶酸 folic acid 1.0 mg，D-泛酸 D-pantothenic acid 37.5 mg，烟酸 nicotinic acid75 mg，Cu (as copper sulfate) 6 mg， Fe (as ferrous sulfate)100mg，Mn (as manganese sulfate) 4 mg， Zn (as zinc sul-fate) 100 mg，I (as potassium iodide) 0.14 mg，Se (as sodi-um selenite) 0.30 mg。 2)消化能、赖氨酸、蛋氨酸+半胱氨酸、苏氨酸和色氨酸为计算值，其余为实测值。DE， Lys， Met+Cys， Thr andTrp were calculated values， while the others were measuredvalues. 表2 饲粮中氨基酸含量 Table 2 Amino acid contents in diets % 项目 对照组 试验Ⅰ组 试验Ⅱ组 试验Ⅲ组 Items Control group Test groupl lest group l Test group Ⅲ 蛋氨酸 Met 0.20 0.19 0.19 0.20 苏氨酸 Thr 0.66 0.65 0.65 0.66 赖氨酸 Lys 1.23 1.11 1.15 1.08 异亮氨酸 Ile 0.63 0.59 0.60 0.61 亮氨酸 Leu 1.26 1.23 1.25 1.24 苯丙氨酸 Phe 0.73 0.70 0.71 0.72 结氨酸 Val 0.73 0.71 0.72 0.72 天冬氨酸 Asp 1.27 1.25 1.26 1.56 丝氨酸 Ser 0.59 0.59 0.58 0.58 谷氨酸 Glu 2.49 2.42 2.44 2.46 甘氨酸 Gly 0.70 0.66 0.66 0.67 丙氨酸 Ala 0.83 0.83 0.84 0.83 酪氨酸 Tyr 0.34 0.33 0.32 0.33 组氨酸 His 0.38 0.36 0.37 0.37 精氨酸 Arg 0.89 0.85 0.85 0.86 脯氨酸 Pro 0.80 0.82 0.83 0.81 1.4 样品采集和指标测定 1.4.1 生长性能的测定 于试验第14、21和28天，分别对断奶仔猪进行称重，记录每天的采食量和健康状况，根据采食量和体重计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。 1.4.2 脏器指数的测定 饲养试验结束后，每组随机选取6头猪，共24头猪，禁食12 h，麻醉后屠宰解剖，屠宰后取出心脏、肝庄、脾脏和肾脏，将表面水分吸干后进行称重，并计算脏器指数。 1.4.3 血清生化指标的和游离氨基酸含量的测定 饲养试验结束后，断奶仔猪禁食12 h，进行空腹采血，取前腔静脉血液10 mL，3 000 r/min 4℃离心10 min，取上层血清于1.5mL离心管中，-20℃冻存。待测时，将血清解冻，取300 uL用CX4 型全自动生化分析仪(美国 Backman 公司)测定，测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)、葡萄糖(GLU)、氨的含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性。测定方法按罗氏(Roche)生化试剂盒操作说明进行。 取700 uL 血清，加入8%磺基水杨酸700 pL，充分混匀，静置1h，4℃，10 000 r/min离心20 min，离心过后取下层水相，过0.22 um滤膜后装入上样瓶存于4℃，用氨基酸分析仪(L8900，日本)测定血清游离氨基酸的含量。 1.4.4 粪便的收集处理和营养物质表观消化率的测定 1.4.4.1 粪便的采集、处理及测定 在试验结束前3天对粪样进行采集，混匀后将收集的粪样分为2份，其中一份使用10% HC1进行固氮，以 10 g/mL 的浓度进行，用于测定粪便中的粗蛋白质含量。另一份粪样置于105℃烘箱中处理，待到恒重后取出称重，用于测定粪便中的绝干干物质含量。将烘干的样品粉碎过40目筛保存待测。 1.4.4.2营养物质表观消化率的测定 饲粮和粪便样品中的干物质含量根据 GB/T6435—2006测定；粗蛋白质含量根据CGB/T6432—1994 测定；粗脂肪(EE)含量根据 GB/T6433—2006测定；粗灰分(Ash)含量根据 GB/T6438—2007测定；粗纤维(CF)含量根据 GB/T6434—2006测定。 本试验采用内源指示剂-盐酸不溶灰分(AIA)法进行表观消化率的测定，计算公式如下： 营养物质表观消化率(%)=100-[(饲粮中 AIA 含量/粪中 AIA 含量)×(粪中营养物质含量/饲粮中营养物质含量)×100]。 1.5数据处理与统计分析 试验数据先用 Excel 2018 软件进行整理和分析，数据以平均值(mean)±标准误(standard error，SE)表示，然后使用 SPSS 22.0 统计软件对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)。单因素方差分析显著时，采用 Duncan 氏法对数据进行多重比较，以 P<0.05 作为显著性判断依据，0.05≤P<0.10 为有差异趋势。 2结果 2.1D-Asp 对断奶仔猪生长性能的影响 由表3可知，试验第14天，试验Ⅰ组的平均体重、ADFI和 ADG 显著高于其他3组(P<0.05)，且比对照组分别提高19.6%、8.8%和35.6%。而试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组F/G均显著低于对照组(P<0.05)，分别降低16.4%、10.6%和12.8%，其中试 验Ⅰ组F/G最低。 试验第21天，试验Ⅰ组平均体重最高，较对照组提高13.5%，并且较试验Ⅱ和Ⅲ组分别提高12.1%和9.2%，但是各组之间差异不显著(P>0.05)。试验Ⅰ组的 ADFI 最高，试验Ⅱ组的 ADFI最低。试验Ⅰ组的 ADG 显著高于其他3组(P<0.05)，与对照组相比，显著提高了16.4%。试验I组的F/G也显著低于其他3组(P<0.05)，较对照组降低20.2%。 试验第28天，试验Ⅰ组平均体重最高，较对照组提高 10.2%，并且相较试验Ⅱ和Ⅲ组分别提高11.3%和8.4%，但是各组之间差异不显著(P>0.05)。与对照组相比，试验Ⅱ组的 ADFI 显著降低(P<0.05)；试验Ⅰ组ADFI 最高，且显著高于试验Ⅲ组(P<0.05)。试验Ⅰ组的 ADG 显著高于其他3组(P<0.05)，与对照组相比，显著提高了23.5%。试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组F/G均显著低于对照组(P<0.05)，分别降低16.3%、11.0%和15.8%，其中试验Ⅰ组F/G最低。 表3 D-Asp对断奶仔猪生长性能的影响 Table 3 Effects of D-Asp on growth performance in weaned piglets 项目 对照组 试验Ⅰ组 试验Ⅱ组 试验Ⅲ组 P值 ltems Control group fest group 1 lest group ll Test group Ⅲ P-value 体重 Body weight/kg 始重 Initial body weight 10.40±0.55 11.05±0.29 10.73±0.48 10.78±0.47 0.715 第14天 Day 14 16.99±0.75° 20.32±0.6l“ 17.49±0.61° 18.26±0.54° 0.005 第21天 Day 21 21.67±1.05 24.60±0.89 21.94±0.65 22.53±0.71 0.078 末重 Final body weight 25.43±1.07 28.02±1.00 25.18±0.90 25.84±0.92 0.156 平均日采食量 ADFI/(kg/d) 第1~14天 Days l to 14 0.91±0.02° 0.99±0.03° 0.89±0.01' 0.91±0.03° 0.048 第1~21天 Days l to 21 1.08±0.04 1.12±0.04 1.00±0.03 1.03±0.03 0.058 第1~28天 Days l to 28 1.15±0.03 1.20±0.02 1.05±0.03° 1.10±0.03bc 0.005 平均日增重 ADG/(kg/d) 第1~14天 Days l to 14 0.45±0.01 0.6l±0.02° 0.49±0.02° 0.52±0.03° <0.001 第1~21天 Days l to 21 0.55±0.02° 0.64±0.02° 0.54±0.01° 0.57±0.02° 0.0ll 第1~28天 Days l to 28 0.51±0.02° 0.63±0.01° 0.55±0.02° 0.57±0.02° 0.002 料重比 F/G 第1~14天 Days l to 14 2.26±0.05 1.89±0.02° 2.02±0.04° 1.97±0.05° <0.001 第1~21天 Days l to 21 2.08±0.03° 1.66±0.04° 1.86±0.06° 1.75±0.08 <0.001 第1~28天 Days l to 28 2.09±0.05° 1.75±0.02° 1.86±0.04° 1.76±0.04 <0.001 同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。 In the same row， values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05)， while withdifferent small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below. 表5 D-Asp 对断奶仔猪血清生化指标的影响 Table 5)Effects of D-Asp on serum biochemical indexes in weaned piglets 项目 对照组 试验Ⅰ组 试验Ⅱ组 试验Ⅲ组 P值 Items Control group Test group I Test group ll Test group Ⅲ P-value 总蛋白 TP/(g/L) 50.30±2.53° 53.15±1.71be 55.74±0.59a 58.86±0.96° <0.001 白蛋白 ALB/(g/L) 29.35±1.84° 39.06±1.71 40.69±0.50 41.22±1.15° <0.001 谷丙转氨酶 ALT/(U/L) 34.25±2.92 37.24±3.91 43.44±3.45 43.30±2.50 0.133 谷草转氨酶 AST/(U/L) 59.70±5.70 64.22±5.72 73.60±3.98 62.11±2.17 0.171 碱性磷酸酶 ALP/(U/L) 111.80±7.33° 144.00±6.64 143.80±10.80° 140.67±7.80° 0.024 葡萄糖 GLU/(mmol/L) 2.83±0.22 2.55±0.44 3.03±0.37 2.79±0.19 0.779 氨NH，/(mmol/L) 593.91±26.08 579.51±34.40 586.91±38.00 624.53±35.15 0.787 2.4 D-Asp 对断奶仔猪血清游离氨基酸含量的影响 由表6可知，对于必需氨基酸，随着饲粮中D-Asp添加水平的增加，断奶仔猪血清中的游离异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)含量呈线性降低趋势，对照组中所含 Ile、Leu 和 Val 含量显著高于其他试验组(P<0.05)；与对照组相比，添加不同水平的 D-Asp 可显著提高断奶仔猪血清中赖氨酸(Lys)含量，同时不同程度降低苯丙氨酸(Phe)的含量；饲粮中添加不同水平 D-Asp 对血清中蛋氨酸(Met)和苏氨酸(Thr)含量无显著影响 (P>0.05)。对于非必需氨基酸，饲粮中添加不同水平 D-Asp 对血清丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)、酪氨酸(Tyr)和脯氨酸(Pro)含量均无显著影响(P>0.05)；随着饲粮中 D-Asp 添加水平的增加，血清组氨酸( His)的含量降低，对照组的含量最高且显著高于试验组(P<0.05)；与对照组相比，试验Ⅰ组血清甘氨酸(Gly)和半胱氨酸(Cys)含量显著升高(P<0.05)，且显著高于其他2组试验组(P<0.05)，试验Ⅲ组血清 Asp 含量显著高于其他3组(P<0.05)。试验Ⅲ组血清精氨酸(Arg)含量也显著高于试验Ⅰ和Ⅱ组(P<0.05)，与对照组差异不显著(P>0.05)。 表6 D-Asp对断奶者猪血清游离氨基酸含量的影响 Table 6Effects of D-Asp on serum free amino acid contents in weaned piglets ug/mL 项目 对照组 试验Ⅰ组 试验Ⅱ组 试验Ⅲ组 P值 Items Control group Test group I Test group ll Test group Ⅲ P-value 必需氨基酸EAA 蛋氨酸 Met 17.74±2.68 14.08±1.70 15.02±2.55 14.00±1.01 0.599 苏氨酸 Thr 73.46±4.57 77.24±7.99 80.50±9.14 89.16±2.58 0.408 赖氨酸 Lys 31.90±1.55° 61.20±7.63° 60.88±7.54 64.23±3.00° 0.004 异亮氨酸 Ile 21.85±0.44 15.38±0.79° 14.80±0.46 12.60±0.26° <0.001 亮氨酸 Leu 37.18±2.39° 31.28±1.48° 30.53±1.12° 30.15±1.24° 0.036 苯丙氨酸 Phe 29.54±2.03° 21.02±1.44 24.34±2.45 23.70±1.41ab 0.037 缬氨酸 Val 42.05±1.85° 29.64±2.58° 27.68±0.92bc 23.25±0.42° <0.001 非必需氨基酸 NEAA 天冬氨酸 Asp 23.90±0.52° 21.23±0.56° 21.72±1.78° 27.98±0.80° 0.005 丝氨酸 Ser 27.98±0.88 24.84±2.28 25.52±2.18 29.80±0.91 0.265 谷氨酸 Glu 99.90±2.85 94.95±0.81 94.78±6.00 100.20±1.78 0.641 甘氨酸 Gly 82.42±5.37° 113.55±5.68° 91.56±6.48° 98.88±2.798 0.010 丙氨酸 Ala 93.35±6.24 85.36±3.42 92.06±7.13 86.78±1.95 0.659 半胱氨酸 Cys 6.75±0.17° 9.00±0.53 5.98±0.63° 6.50±0.46' 0.004 酪氨酸 Tyr 36.78±3.58 29.00±2.09 27.72±2.20 32.42±1.81 0.089 组氨酸 His 28.12±0.61° 17.38±1.05° 14.40±1.26 13.63±0.87 <0.001 精氨酸 Arg 41.25±2.73 21.25±0.71° 35.43±3.45° 44.53±2.19° <0.001 脯氨酸 Pro 48.52±6.18 42.03±1.38 37.42±4.03 47.12±3.58 0.282 2.5 D-Asp 对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响 由表7可知，与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的粗脂肪表观消化率显著提高(P<0.05)，分别提高了 7.8%、10.3%和10.5%，但粗灰分表观消化率显著降低(P<0.05)，分别降低了14.5%、11.6%和11.1%。与对照相相比，试验Ⅰ和Ⅱ组粗蛋白 质和粗纤维表观消化率显著降低(P<0.05)，试验Ⅲ组与对照组间无显著差异(P>0.05)。与对照组相比，试验Ⅰ组总能表观消化率显著显低了 3.1%(P<0.05)，其他试验组与对照组间无显著差异(P>0.05)。不同水平 D-Asp 对干物质表观消化率无显著影响(P>0.05)。 表7D-Asp 对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响 Table 7Effects of D-Asp on nutrient apparent digestibilities in weaned piglets 项目 对照组 试验I组 试验Ⅱ组 试验Ⅲ组 P值 Items Control group fest group 1 fest group l Test group Ⅲ P-value 干物质 DM 67.88±0.62 66.03±1.57 63.63±2.77 60.42±3.36 0.195 总能 GE 88.23±0.43 85.50±0.42° 86.83±0.73 87.98±0.36° 0.006 粗蛋白质 CP 84.24±0.81 76.15±1.29° 79.22±2.08bc 83.31±0.84 <0.001 粗脂肪EE 78.56±2.43° 84.72±0.80° 86.66±0.71° 86.83±0.80° <0.001 粗灰分 Ash 66.83±1.55° 57.16±0.78° 59.07±1.30° 59.42±1.45° <0.001 粗纤维 CF 47.35±3.74 38.77±1.46 34.90±3.00 39.89±1.70 0.025 3 讨 论 3.1 D-Asp 对断奶仔猪生长性能和脏器指数的影响 在养猪生产过程中，断奶仔猪阶段生长性能的好坏直接关系生猪后期育肥阶段的生长和肉品质安全，是影响经济效益的关键指标11。在动物体内，L-Asp是肠上皮细胞的主要能量来源，与谷氨酸同是合成 Pro、Arg、丙氨酸(Ala)等氨基酸的底物，可通过改善肝脏代谢来缓解仔猪氧化应激12]。而 D-Asp 则主要分布于神经和内分泌系统中，可有效调控动物激素水平进而影响动物的生理活动1131。本研究结果表明，饲粮中添加不同水平 D-Asp 可以不同程度地改善断奶仔猪 ADFI、ADG 和降低 F/G。尤其是添加 50 mg/kg D-Asp时，可显著提高断奶仔猪的 ADG 和 ADFI 以及降低F/G。添加500 和5000 mg/kg 的 D-Asp 在平均体重方面与对照组差异不显著，但是仍然可以显著降低 F/G，这意味着添加不同水平 D-Asp可不同程度地改善断奶仔猪的生长性能和提高饲料转化率。其原因可能如下：一方面 D-Asp可转化为L-氨基酸用于机体蛋白质的合成，另一方面D-Asp也可合成N-甲基-D-天冬氨酸直接或间接刺激 N-甲基 D-天冬氨酸受体[14]，而适量的N-甲基D-天冬氨酸能够调控动物生长激素等激素的水平，调控脂肪代谢，从而显著提高仔猪的生长速度和采食量15]。Li等L10]研究表明，饲粮添加1% L-Asp 对断奶仔猪生长性能无显著影响，但添加1% D-Asp 会抑制其生长和破坏仔猪免疫功能。也有研究表明，在饲粮中添加2% D-Asp显著抑制鸡的生长，添加 6% L-Asp 则不会抑制生长[16]。这些结果与本研究结果均相反，这可能是因为饲粮中添加过量的 D-Asp 不能有效地被动物机体内的天冬氨酸消旋酶或氧化酶所降解，导致细胞内D-Asp 过量积累，阻碍畜禽生长发育[4]，但是适量D-Asp 的添加则可促进动物的生长发育。 脏器指数主要是反映动物内脏器官是否中毒以及脏器功能强弱的一个关键指标指17]，同时也可以反映动物生长发育的状况和营养物质吸收情况[18]。本试验研究发现，饲粮中添加不同水平的D-Asp 对断奶仔猪的心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、肺脏指数以及肾脏指数均没有显著影响，这表明低水平 D-Asp 对断奶仔猪内脏器官无毒害作用。 3.2 D-Asp 对断奶仔猪血清生化指标的影响 动物机体的原料以及消化产物的代谢都是通过血液的运输来实现，血清生化指标的变化能够直接反映动物的营养状态和健康状况，也能反映组织器官机能的变化19]。本研究结果表明，断奶仔猪血清 TP 和ALB的含量呈剂量效应，即随着D-Asp 添加水平的增加，血血 TP 和 ALB 含量显著增加。血清 TP 和 ALB 的含量主要受饲粮类型以及营养水平的影响，可以反映机体的蛋白质代谢水平和免疫机能20J。血清 TP 和 ALB含量的提高，则说明断奶仔猪体内的蛋白质合成代谢增加以及提高免疫力。动物血清中的ALT、AST 和ALP 的活性可以反映动物肝脏功能的受损程度和抗应激能力211。本试验中，添加不同水平的D-Asp对仔猪血清中 AST 和 ALT 活性并没有显著影响，却可显著提高血清中 ALP 的活性，这一结果与 Li 等[10]研究添加1% D-Asp 或 DL-Asp 的结果相一致。这可能是由于添加 D-Asp 会促进肝脏代谢，增强肝脏中的 D-Asp 氧化酶活性，加快脂肪消化吸收和钙磷沉积，提高机体抗应激能力，从而改善仔猪的生长发育。 3.3 D-Asp 对仔奶仔猪血清游离氨基酸含量的影响 Lys 是生猪生长过程中的第一限制性氨基酸，本研究发现，添加不同水平 D-Asp 可显著提高血清游离 Lys含量，这表明体内蛋白质合成速度加快，提高产肉效率，促进肌肉的生长发育[22]。支链氨基酸(Val、Leu、Ile)参与机体内蛋白质和能量的代谢，可以通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路调节机体能量和蛋白质的代谢，促进动物生长和健康23]，而添加不同水平的 D-Asp则显著降低血清支链氨基酸含量，这是否预示着添加 D-Asp 干扰了支链氨基酸的代谢，有待进一步研究。本研究表明，添加不同水平的 D-Asp 显著降低血清 Phe 含量，而 Phe 与 Tyr 具有协同作用，Phe 与 Tyr 的比值可以作为衡量 Phe 在体内的累积情况，在本试验中各组 Phe 与 Tyr 的比值分别为0.80、0.72、0.88和0.73，表明不添加或添加中剂量的 D-Asp 可有 Phe 累积的现象24]，从而抑制了仔猪生长发育，这也进一步证实了500 mg/kgD-Asp 添加量的仔猪表现出比其他组生长发育迟缓和采食量低的现象。当饲粮提供的非必需氨基酸不能满足动物机体需求时，动物机体能通过一 系列转氨反应合成非必需氨基酸以满足动物的需求[25]。本研究发现，添加不同水平的 D-Asp 可显著影响血清非必需氨基酸 Asp、Gly、Cys、His 和Arg 的含量，但对 Ser、Glu、Ala、Tyr和 Pro 含量无显著影响。添加低水平和中水平的D-Asp 可降低血清 Arg 和 His 含量，这可能是因为添加少量的D-Asp 可有效提高精氨酸酶和组氨酸酶的活性，从而加速 Arg 和 His 的分解1261。血清中 Gly 和 Cys主要是参与机体的脂肪代谢和解毒作用127-28」，添加50 mg/kg 的 D-Asp 可显著增加血清中的 Gly和 Cys 的含量，从而调控机体的脂肪代谢，促进断奶仔猪生长发育和蛋白质的合成。 3.4 D-Asp 水平对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响 目前国内外尚无对 D-Asp 影响断奶仔猪表观消化率的影响研究，因此，本试验探讨了饲粮添加不同水平 D-Asp 对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响，以期说明具有旋光性的D-氨基酸对断奶仔猪营养需求的作用。本研究发现，添加不同水平 D-Asp 可有效提高断奶仔猪粗脂肪表观消化率。饲粮中的脂肪通常是在肠道脂肪酶的作用下，将其分解为游离脂肪酸和甘油，以乳糜微粒的形式进入血液循环129]。口服 D-Asp 会引起新生雏鸡体温的抑制，同时也可以影响血浆代谢产物中的甘油三酯含量，这进一步证明 D-Asp 与机体脂质代谢有关，可以影响小肠对脂质的吸收。有研究报道，D-氨基酸的添加会导致消化道蠕动能力降低，进而降低动物营养物质消化率130J。这与本试验结果一致，本试验发现添加不同水平D-Asp可降低断奶仔猪粗蛋白质和总能表观消化率，且添加50 mg/kg D-Asp 时，其粗蛋白质和总能表观消化率最低，这主要是因为 D-Asp 会降低肠道蠕动能力，同时此处理增加了断奶仔猪的采食量，在这双重因素的作用下降低了饲粮的消化率。营养物质表观消化率的变化一定程度上也与肠道微生物有关，D-氨基酸可阻止各种细菌生物膜的形成和促进已形成的生物膜分解，从而影响肠道微生物有益菌和有害菌的分布131J。D-Asp作为D-氨基酸的一种，也可影响动物肠道微生物种群区系，从而影响了粗纤维及其他营养物质表观消化率，但具体的作用机制还需要进一步研究。 结 论 饲粮中添加不同水平的 D-Asp，尤其是添加50 mg/kg 的 D-Asp 时，可有效提高断奶仔猪的生长性能和饲料转化率，促进营养物质的吸收利用，影响体内氨基酸代谢。因此，50 mg/kg D-Asp有潜力作为一种新型的功能性添加剂应用于断奶仔猪饲粮中。 ( 参考文献： ) ( [1 WANG HB，LIUYL，SHI HF，et al.Aspartate atten-uates intestinal inju r y and inhibits TLR 4 and NODs/ NF-kB and p38 signaling i n w eaned p i gs after LPSchallenge[J] . 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Hunan Provincial Key Laboratory ofAnimal Nutritional Physiology and Metabolic Process， College of Life Science， Hunan Normal University， Changsha 410081， China) Abstract： The aim of this study was to investigate the effects of D-aspartate on growth performance， serum bi-ochemical indices， serum free amino acid contents and nutrient apparent digestibilities in weaned piglets. Forty-four healthy crossbreed weaned piglets (Duroc×Landrace×Yorkshire) weighing (10.74±0.25) kg and wererandomly divided into 4 groups with 11 replicates per group and l pig per replicate at the age of 45 days. Thecontrol group was fed a basic diet. The test groups I， Ⅱ and Ⅲ were fed the basic diet supplemented with50，500 and 5 000 mg/kg D-aspartate. The experiment lasted for 28 days. The results showed as follows： 1)compared with the control group， the weight of weaned piglets on the 14th day in the test group I was signifi-cantly increased (P<0.05). Adding 50 mg/kg D-aspartate could significantly promote the average daily gain，average daily feed intake， and also significantly reduce the ratio of feed to gain (P<0.05). 2) Compared withthe control group， D-aspartate in the diet had no significant effect on the organ indexes (P>0.05).3) Com-pared with the control group， serum total protein (TP) content was significantly increased in the groups Ⅱ andⅢ (P<0.05). The content of serum albumin (ALB) and the activity of alkaline phosphatase (ALP) in threetest groups were significantly higher than those in the control group (P<0.05)， and they were increased withthe leve of D-aspartate increased. 4) Compared with the control group， the serum isoleucine (Ile)， leucine(Leu)， phenylalanine (Phe) and valine (Val) contents in three test groups were significantly reduced (P<0.05)， but the lysine (Lys) content was significantly increased (P<0.05). The serum Asp content in thegroup Ⅲ was significantly higher than that in the other three groups (P<0.05)， and the serum glycine(Gly)and cysteine (Cys) contents in the group I were significantly higher than those in the other three groups (P<0.05).5) Compared with the control group， the apparent digestibility of crude fat in the test groups I，Ⅱand Ⅲ was significantly increased (P<0.05). The test group I had the lowest apparent digestibility in crudeprotein， total energy and crude fiber. In summary， adding 50 mg/kg of D-aspartate to low-protein balanced di-ets can effectively improve piglet growth performance and promote nutrient absorption and utilization.[ ChineseJournal of Animal Nutrition，2021，33(6)：3154-3164] Key words： D-aspartate； weaned piglets； growth performance； serum biochemical indices； apparent digesti-bility ( (责任编辑 陈 鑫) ) 血清游离氨基酸含 量和营养物质表观消化率的影响。与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组粗脂肪表观消化率显著提高（Ｐ＜0.05） ；试验 Ⅰ组的粗蛋白质、总能和粗纤维表观消化率最低。 综上所述，在低蛋白质平衡饲粮中添加 50mg／kg的 Ｄ－天冬氨酸可改善仔猪生长性能，促进营养物质吸收利用。