猪肉中19种磺胺类兽药残留检测方案(旋涡混合器)

NL：1.26E5TIC MS RT： 0.00-14.00 Copure磺胺专用净化管 QuEChERS 方法对猪肉中19种磺胺类兽药残留的 UPLC-MS-MS 测定 磺胺类药物廉价且高效，常用于生猪的疾病防治，有时甚至作为饲料添加剂用来促生长或增产，但是过量使用会导致其在猪肉中残留。研究显示，磺胺类药物代谢时间长且有蓄积，，食用磺胺类药物残留的生鲜猪肉存在极大的的康风险。猪肉中脂质含量在20%~30%，磷脂含量在1%~3%，在对这类高脂质样品进行检测和分析时，共萃取的磷脂会在色谱柱上聚集，影响色谱柱使用寿命；同时磷脂会使质谱信号产生离子抑制，导致质谱分析中的低回收率，进而影响仪器分析的灵敏度和方法的重现性，这给我们对高脂质样品进行兽药残留检测提出了更高要求。 为了应对这一挑战，逗点生物采用最新研发的磷脂去除磺胺专用 QuEChERS 净化管，能够有效实现样品中的磷脂去除和脂质吸附。建立了采用 QuEChERS 方法检测则肉中19种磺胺类兽药残留的 LC-MS/MS方法。该方法(5 ng/g 和10 ng/g)两个水平的加标回收率均在 60-120%之间， RSD 小于10%，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有较高的回收率和良好的磷脂去除和脂质净化效果，能够作为猪肉中磺胺类兽药残留检测的参考方法。 、样品前处理 1.1 样品提取 (1)将猪肉样品粉碎均匀，称取2.0g猪肉于 50 mL离心管中，加入4mL水，涡旋混匀2 min；再加10mL1%乙酸乙腈涡旋混匀 10 min； 之后再加入 QuEChERS 盐包 (Cat. No. COQ050050H)， 涡旋2 min， 在4℃下 5000 r/min 离心5 min。静置15 min，上层乙腈层待净化。 1.2 样品净化 (1)取待净化的上层乙腈层6 mL于15 mL 磺胺专用 QuEChERS 净化管 (Cat. No.COQ015427)中， 涡旋 2 min， 5000 r/min 离心5 min。 (2)取上清液4 mL 乙腈层转移至另一试管中，40℃下氮气吹干，用含0.1%甲酸的甲醇-水溶液(水：上甲醇=9：1溶液)定容至1mL，过 0.22 um滤膜，待上机测试。 二、 仪器条件 (1)色谱条件 仪器： UPLC-MS/MS (Thermo Fisher TSQ Endura) 色谱柱： Commasil兽残专用柱(2.1 mmx100 mm， 3 um) 流动相：A：水(0.1%甲酸) B：：含0.1%甲酸的甲醇-乙腈溶液(甲醇：乙腈=2：8) 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 流速：0.3mL/min 柱温：35C 进样量： 10pL 表1梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0 98 2 3.0 90 10 8.0 65 35 10.0 20 80 11.0 5 95 12.0 98 2 14.0 98 2 (1)质谱条件 离子源： HESI 电喷雾电压：3500V 鞘气压力：40 arb 辅气压力：2arb 离子传输管：380℃ 辅气温度：350℃ 表2组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子) 序号 名称 保留时间/min 母离子 子离子 1 乙酰磺胺 3.41 215.0 108.0、155.9* 2 磺胺吡啶 4.97 250.1 155.8*、183.9 3 磺胺嘧啶 4.06 251.1 92.1、155.9* 4 磺胺甲恶唑 7.75 254.0 108.1、155.9* 5 磺胺噻唑 4.88 256.0 155.9*、92.1 6 磺胺甲基嘧啶 5.27 265.1 155.8*、171.8 7 磺胺二甲异恶唑 8.18 268.0 113.0、155.8* 8 磺胺甲噻二唑 6.38 271.0 92.1、155.9* 9 苯酰磺胺 8.65 277.0 107.9、155.9* 10 磺胺二甲异嘧啶 3.56 279.1 124.0*、185.8 11 磺胺二甲嘧啶 6.11 279.1 155.8、185.8* 12 磺胺甲氧哒嗪 6.33 281.0 155.8*、126.0 13 磺胺对甲氧嘧啶 6.47 281.0 155.9*、214.9 14 磺胺间甲氧嘧啶 7.19 281.0 155.9*、214.9 15 磺胺氯哒嗪 7.28 285.0 92.1、155.9* 16 磺胺邻二甲氧嘧啶 7.68 311.1 155.8*、244.9 17 磺胺间二甲氧嘧啶 9.08 311.1 155.8*、244.8 18 磺胺苯吡唑 9.14 315.0 157.9*、159.9 19 酞磺胺噻唑 8.12 404.0 148.9、255.8 三、实验结果 表3 19种磺胺类兽药加标回收实验结果 检测项目 加标水平(ng/g) 逗点生物Copure 国外A品牌 国外S品牌 国外B品牌 回收率R/% RSD/% 回收率R/% RSD/% 回收率R/% RSD/% 回收率R/% RSD/% 乙酰磺胺 5.0 82.1 5.11 72.1 5.11 76.5 5.65 56.5 5.75 10.0 72.3 4.52 51.5 4.25 64.1 6.25 51.5 4.75 磺胺吡啶 5.0 74.6 5.67 86.4 5.16 76.1 5.65 71.2 5.25 10.0 74.0 5.05 96.5 4.29 95.8 5.12 96.9 6.15 磺胺嘧啶 5.0 72.8 5.15 68.9 6.32 71.5 7.36 56.7 6.45 10.0 77.7 5.12 54.9 5.96 73.6 7.96 61.0 7.52 磺胺甲恶唑 5.0 80.2 4.53 36.9 5.61 56.9 4.15 52.2 6.86 5.36 100- 5.26 90 5.53 4.99 80- 5.56 4.89 ① c4.85c > 一 5.64 4.77 5.68 4.71 5.72 5.87 8.18 4.63 5.91 20- 4.52 6.02 8.22 6.07 8.28 10- 4.21 6.67 8.34 1.551.76 1.85 6.70 3.8221 9.80 10.93 3.77E3TIC MS 图1不同品牌净化处理猪肉样品后的 TIC 图，子离子扫描m/z=184 (①猪肉样品-未净化处理 ②国外A品牌-净化处理 ③国外S品牌-净化处理 ④国外B品牌-净化处理 ⑤逗点生物 Copure@-净化处理 ) 图2添加水平为 5 ng/g时猪肉样品中19种磺胺类兽残 TIC 色谱图 四、 订购信息 产品信息 描述 规格 COQ050050H 兽残专用提取管，50 mL离心管 50支/盒 COQ015427 磺胺专用 QuEChERS 净化管， 15 mL 离心 50支/盒 管 SF130-22-PTFE PTFE/D13 mm/0.22 um/ 有机系 100支/盒 MF047-45-MCE MCE/D47 mm/0.45 um/ 水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/D47 mm/0.45 um/ 有机系 200 片/盒 V2-AL 2mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SC2-1 2mL蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 100个/盒 SD-3000-D biocommaR多管涡旋混匀仪 1台/箱 为应对这一挑战，逗点生物采用最新研发的磷脂去除磺胺专用QuEChERS净化管，能够有效实现样品中的磷脂去除和脂质吸附。建立了采用QuEChERS方法检测猪肉中19种磺胺类兽药残留的LC-MS/MS方法。该方法（5 ng/g和10 ng/g）两个水平的加标回收率均在60-120 %之间，RSD小于10 %，操作简便快捷，与国内外的竞品相比，具有较高的回收率和良好的磷脂去除和脂质净化效果，能够作为猪肉中磺胺类兽药残留检测的参考方法。一、样品前处理1.1样品提取将猪肉样品粉碎均匀，称取2.0 g猪肉于50 mL离心管中，加入4 mL水，涡旋混匀2 min；再加10 mL 1% 乙酸乙腈涡旋混匀10 min；之后再加入QuEChERS盐包（Cat. No. COQ050050H），涡旋2 min，在4℃下5000 r/min离心5 min。静置15 min，上层乙腈层待净化。1.2样品净化取待净化的上层乙腈层6 mL于15 mL 磺胺专用QuEChERS净化管（Cat. No. COQ015427）中， 涡旋 2 min，5000 r/min离心5 min。取上清液4 mL乙腈层转移至另一试管中，40℃下氮气吹干，用含0.1 %甲酸的甲醇-水溶液（水：甲醇=9:1溶液）定容至1 mL，过0.22 μm滤膜，待上机测试。二、仪器条件2.1色谱条件仪器：UPLC-MS/MSThermo Fisher TSQ Endura色谱柱：Commasil®兽残专用柱2.1 mm×100 mm，3 μm流动相：A：水（0.1 %甲酸）   B：含0.1 %甲酸的甲醇-乙腈溶液（甲醇:乙腈=2:8）洗脱方式：梯度洗脱，见表1流速：0.3 mL/min柱温：35℃进样量：10 μL表1 梯度洗脱程序2.2质谱条件离子源：HESI电喷雾电压：3500 V鞘气压力：40 arb辅气压力：2 arb      离子传输管：380 ℃辅气温度：350 ℃表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）三、实验结果表3  19种磺胺类兽药加标回收实验结果图1 不同品牌净化处理猪肉样品后的TIC图子离子扫描m/z=184①猪肉样品-未净化处理②国外A品牌-净化处理③国外S品牌-净化处理④国外B品牌-净化处理⑤逗点生物Copure®-净化处理图2 添加水平为5 ng/g时猪肉样品中19种磺胺类兽残TIC色谱图四、订购信息如感兴趣，敬请垂询