血清中谷丙转氨酶活性检测方案(紫外分光光度计)

TEL-400-616-4686 谷丙转氨酶的活性测定实验 原理 血清谷丙转氨酶(SGPT)能催化丙氨酸与酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，丙酮酸在酸性条件下与2，4-二硝基苯肼可缩合成丙酮酸二硝基苯腙，该腙在碱性条件下呈现出橙红色，呈色深浅符合比尔定律，在520 nm处有最大吸收。SGPT 在肝脏中含量最高，，由于肝细胞损害，，i该酶逸出血液可使 SGPT含量明显增高。因此测定血清谷丙转氨酶的活性可作为肝中毒肝病的重要指标。 材料与仪器 丙酮酸 丙酮α-酮戊二酸 dl-丙氨酸24-二硝基苯肼氢氧化钠 恒温水浴锅美析 V1500C分光光度计 步骤 溶液配制： 1. 丙酮酸标准溶液：准确称取22 mg纯净丙酮酸钠，用 pH7.4磷酸缓冲液定容至100 ml。 2.SGPT底物溶液：准确称取α-酮戊二酸87.6mg， dl-丙氨酸 5.34g， 先用90 ml 0.1 mol/LpH7.4的磷酸缓冲液溶解，然后用 20%NaOH 溶液调至 pH7.4， 再以上述磷酸缓冲液稀释至300 ml，冰箱保存可用一周(加氯仿防腐) 3.0.1 mol/L pH7.4的磷酸缓冲液。 4.2-，4-二硝基苯肼溶液：称取19.8 mg2， 4-二硝基苯肼，置于100ml容量瓶中，先用8 ml浓盐酸溶解后，再加水稀释至刻度。 5.0.4mol/L氢氧化钠溶液。 操作步骤： 1.标准曲线的绘制：取干燥洁净试管6支，编号，按下表所示添加试剂。 管号 试剂 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准液(m1) SGPT底物溶液(ml) 磷酸缓冲液(ml) 0.000.50 0.10 0.05 0.10 040 0.10 0.15 035 0.10 0.20 0.30 010/ 0.25 0.25 0.10 0.45 0.10 向每管加0.5ml2，4-二硝基苯肼，再保温 20 min， 分别向各管加入0.4 mol/L 氢氧化钠溶液5ml，室温下静置10 min 后，用蒸馏水调零点，于520 nm 处测光密度。以各管光密度减去空白管光密度为纵坐标，丙酮酸微克数为横坐标作标准曲线。 试剂 测定管 对照管 血清(ml) SGPT底物溶液(ml) 0.1 0.5 0.1 一 37℃水浴 30min 2，4-二硝基苯肼溶液 (ml) SGPT底物溶液 (ml) 0.5 0.5 0.5 37C水浴 20min 0.4mol L氢氧化钠溶液 (ml) 5.0 D，5.0C 2.SGPT 活力测定：取洁净干燥试管4支，即测定管、对照管各2支，按下表添加试剂。各管反应完毕，混匀、室温下静10min 后，再以蒸馏水调零点测定光密度。由标准曲线上查得丙酮酸微克数，根据下式计算 SGPT 的活力： SGPT活力(单位)=(测定管微克数-对照管微克数)/2.5×0.1。 注意事项 1.在呈色反应中，2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙，底物中α-酮戊二酸可与之发生反应，生成α-酮戊二酸苯腙。故制作标准曲线时，需要加入一定量的底物以抵消α-酮戊二酸的影响。 上海美析仪器有限公司 2.在测定 SGPT活力时，应事先将底物、血清在37℃水浴中恒温，然后在血清管中加入底物，准时计时。 3.标准曲线上数值在 20~100U是准确可靠的，超过200U时，需将样品稀释。 4.丙氨酸应使用 DL-型，不使用D-型。如使用L-型，用量减半。 5.溶血标本不宜使用，因血细胞内转氨酶活力较高，会影响测定结果。 仪器参数 PROFESSIONAL SPECTRUM INSTRUMENT MANUFACTURER V-1500C 可见分光光度计 ●主机中文操作系统，7英寸彩色触摸屏显示 宽大的触摸屏可显示多组数据，菜单显示，可直接显示图谱 自动调0、调100%功能 波长自动调节 滤色片自动切换 ●宽大样品池(5mm~100mm) 具有最多十点标样建标准曲线测量功能 可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量 可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量 可断电保存测量设置的标准曲线参数 配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线 支持外接U盘存储及传输实验数据 光路结构 C-T式 测光方式 透过率、吸光度、浓度、能量 320~1100nm 波长调节 自动调节 波长范围光谱带宽 2nm 光度范围 -0.3~3A 波长准确度波长重现性透射比准确度透射比重现性 ±0.5nm 显示方式 7英寸彩色触摸屏 ≤0.2nm 检测器 进口硅光二极管 ±0.3%T 光源 进口钨灯 0.15%T 电源 AC 220V/50Hz或110V/60Hz 杂散光 ≤0.04%t(340nm NaNo2) 功率 120W 稳定性 0.001A/h (500nm预热后) 仪器尺寸 480×350×220mm 主机净重 11Kg 主机1台 1cm石英比色皿2只 1cm玻璃比色皿4只 防尘罩1只 电源线1根 使用说明书1本 上海美析仪器有限公司 关于我们 上海美析仪器公司简介 上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发发光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 上海美析仪器有限公司 (美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了 CE 认证、FCC 认证、RoHS 认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等) 上海美析仪器有限公司 上海美析仪器有限公司 TEL：http：//www.macylab.com 血清谷丙转氨酶（SGPT）能催化丙氨酸与酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸，丙酮酸在酸性条件下与2，4-二硝基苯肼可缩合成丙酮酸二硝基苯腙，该腙在碱性条件下呈现出橙红色，呈色深浅符合比尔定律，在520 nm处有最大吸收。SGPT 在肝脏中含量最高，由于肝细胞损害，该酶逸出血液，可使 SGPT 含量明显增高。因此测定血清谷丙转氨酶的活性可作为肝中毒肝病的重要指标。