玉米中黄曲霉素检测方案(固相萃取仪)

北京莱伯泰科仪器股份有限公司Beijing LabTech Instruments Co.， Ltd 玉米中黄曲霉毒素B族的检测 前言 黄曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1 简写为AFB1)是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。 黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、 稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。 本文参考 《GB 5009.22-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G 族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲专毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过 SPE1000 全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。 关键词：SPE1000 粮谷 黄曲霉毒素 GB 5009.22-2016 一、仪器设备及试剂 (一)仪器设备 SPE 1000全自动固相萃取系统，莱伯泰科公司； LC600二元高压梯度高效液相色谱：配有荧光检测器(莱伯泰科公司)； 黄曲霉毒素免疫亲和柱(月旭1mL) (二)试剂 甲醇，乙腈(色谱纯 FISHER Chemical)； 超纯水； 黄曲霉毒素B族标准储备液：黄曲霉毒素B1和B2(10ug/mL)，，甲醇； 黄曲霉毒素B族标准工作液：取10pL的标准储备液于 10mL的容量瓶中，用甲醇定容，得到浓度为10ng/mL 的标准工作液。 二、实验过程 (一)样品预处理 称取5g玉米米样(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30)，涡旋混匀，用均质器10000r/min 上下震荡均质 3 min， 在6000r/min下离心20min。准确移取 4mL上上上清液，加入10mL超纯水，混匀，待净化。 (二)加标样品 在2.1的待净化液中加入50pL 的 10ng/mL 黄曲霉毒素标准工作液，样品的加标浓度为 0.5ng/g。 (三)SPE 净化 按照图1所示的方法进行固相萃取方法编辑，加载并运行方法， SPE1000 进行2.1或2.2中样品的 SPE 萃取过程。 收集样品到收集瓶中，用超纯水定容到1.0mL， 用 0.22um 滤膜过滤，待检测。 图1黄曲霉毒素净化的固相萃取方法 (四)高效液相色谱-荧光检测条件 色谱柱： C18，柱长150mm， 内径4.6mm， 粒径5um， 或性能相当者； 流动相：超纯水：甲醇+乙腈(50+50)=68：32； 流速：1.0mL/min： 柱后衍生：光衍生； 荧光检测器：：激发波长360nm， 发射波长440nm； 柱温：40℃； 进样量：20pL。 三、实验结果 (一)黄曲霉毒素B族标样液相色谱图 图2为0.5ng/mL 的黄曲霉毒素B族标样的液相色谱图 图20.5ng/mL 的黄曲霉毒素B族标样液相色谱图 (二)空白样品色谱图 图3为空白样品的色谱图，在黄曲霉毒素B1和B2的出峰时间处没有峰，说明该样品中没有黄曲霉毒素B1 和B2检出。 图3空白样品色谱图 (三)加标样品色谱图 图4为加标样品的色谱图。 图4加标样品色谱图 (四)加标回收率结果 表1为加标回收率结果，4个平行样黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和 88.5%~93.2%， RSD 分别为2.7%和2.2%。 表1加标回收率结果 黄曲霉毒素 出峰时间/min 回收率/% 1 2 3 4 平均值 RSD/% 玉米 B1 15.53 83.2 85.1 86.3 81.1 83.9 2.7 B2 12.24 91.8 90.9 93.2 88.5 91.1 2.2 四、结果与讨论 本文参考《GB5009.22-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的食品中黄曲霉毒素B1和B2检测的方法，使用 LabTechSPE1000 全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素 B1 和B2的固相萃取，并用液相荧光检测器进行检测，方法的回收率分别为 81.1%~85.1%和 88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000 全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。 参考标准 1、GB 5009.22-2016 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定 前言:  黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。  黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。  本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。关键词： SPE1000  粮谷  黄曲霉毒素  GB 5009.22-2016