猪肉中氯霉素检测方案(旋涡混合器)

兽残篇) www.biocomma.cn固相萃取产品应用手册(6版) indd 482021/1/27 15：04：44 猪肉食品中氯霉素检测的固相萃取方法 (Copure C18) 《GB/T 22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》 一、样品提取 称取均质后的5.0g猪肉试样，精确到0.01 g。置于50mL离心管中，加入5mL水，于涡旋混合器上快速混合1 min，使试样完全溶解。准确加入15 mL 乙酸乙酯，在振荡器上振荡10 min， 以3000 r/min 离心10 min， 准确吸取层层乙酸乙酯12mL转入15 mL的离心管中，置于浓缩吹氮仪在45℃吹扫蒸干，加入5mL水溶解，待净化。 二、SPE 柱净化 (Copure° C18， 1000 mg/6mL) 活化：小柱使用前依次采用5mL 甲醇、5 mL 水活化。 上样和洗脱：将待净化液过柱，待溶液完全流出后，用2×3mL水过柱，然后再用5mL乙腈/水溶液(2：8，v/v)淋洗，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干小柱，最后用6mL 乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液。 重新溶解：洗脱液于45℃用氮气吹干，用乙腈/水溶液(2：8，v/v)定容至1mL，经有机滤膜过滤后上机供 LC-MS/MS 测定。 三、仪器条件 质谱仪： API 4000 色谱柱： Venusil ASB C18 (2.1 mm×150 mm， 5 Hm) 流动相： A： 10 mmol/L乙酸溶液 B：甲醇流速：0.2mL/min柱温：40℃进样体积：5L离子源：电喷雾(ESI)， 负离子模式检测方式：多反应监测(MRM) 表1质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas (CUR) 30 Ion Source Gas 1(GS 1) 50 Ion Source Gas 2(GS 2) 40 Ion Spray Voltage(IS) -4500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) 0n 表2 氯霉素及内标的母离子和子离子参数表 物质名称 保留时间(min) 检测离子对 DP EP CE CXP 氯霉素 4.90 320.9/151.9 -60 -10 -25 -12 320.9/256.9 -60 -10 -25 12 氯霉素内示 4.90 326.1/157.0 -60 -10 -25 -12 四、实验结果 表32.0 g/kg 猪肉中氯霉素添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 氯霉素 98.3 96.3 90.6 95.1 4.2 图1氯霉素及内标氯霉素总离子流图 订购信息 货号 描述 包装 COC1861000 Copure@ C18固相萃取柱，1000 mg/6 mL 30支/盒 SF130-22-NL 尼龙/中13 mm/0.22 Pm/有机系 100个/盒 MF047-45-MCE MCE/中47 mm/0. 45 Hm/水系 200片/盒 MF047-45-PTFE PTFE/D47 mm/0. 45 Hm/有机系 200片/盒 V2-AL 2 mL棕色短螺纹广口样品瓶，带书写处 100个/盒 SC2-5 2 mL蓝色聚丙烯盖，预开口， 9-425 100个/盒 SPEMF12G 12位固相萃取负压装置，玻璃缸体 1个/盒 一、样品提取 称取均质后的 5.0 g 猪肉试样，精确到 0.01 g。置于 50 mL 离心管中，加入 5 mL 水，于涡旋混合器上快速混合 1 min， 使试样完全溶解。准确加入 15 mL 乙酸乙酯，在振荡器上振 荡 10 min，以 3000 r/min 离心 10 min，准确吸取上层乙酸 乙酯 12 mL 转入 15 mL 的离心管中，置于浓缩吹氮仪在 45℃ 吹扫蒸干，加入 5 mL 水溶解，待净化。 二、SPE 柱净化（Copure® C18，1000 mg/6 mL） 活化：小柱使用前依次采用 5 mL 甲醇、5 mL 水活化。 上样和洗脱：将待净化液过柱，待溶液完全流出后，用 2×3 mL 水过柱，然后再用 5 mL 乙腈 / 水溶液 (2:8, v/v) 淋洗，弃去全部淋出液。用真空泵减压抽干小柱，最后用 6  mL 乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液。 重新溶解：洗脱液于 45℃用氮气吹干，用乙腈 / 水溶液 (2:8,  v/v) 定容至 1 mL，经有机滤膜过滤后上机供 LC-MS/MS 测定。 三、仪器条件 质谱仪：API 4000 色谱柱：Venusil ASB C18 (2.1 mm×150 mm, 5 µm) 流动相：A：10 mmol/L 乙酸铵溶液   B：甲醇 流速：0.2 mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5 µL 离子源：电喷雾 (ESI)，负离子模式 检测方式：多反应监测 (MRM) 表 1 质谱仪离子源参数