饮料及糕点中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠以及脱氢乙酸检测方案

S5；4.6 mm i.d.×250mm 食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠以及脱氢乙酸的同时分析贰 GB5009.28-2016条件下分析 首先，我们尝试按照 GB5009.28-2016 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定项下方法，分别使用 SP-100-5-ODS-P；4.6 mmi.d.×250 mm 和SUPERIOREX ODS S5； 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱，对安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸混合标准品进行分析。 结果如下图所示，两支色谱柱在国标原条件下均可达到五种物质分离度大于2.5的良好分离结果，，且 DAISOPAK SP-100-5-0DS-P整体分离结果及脱氢乙酸峰形明显较 SUPERIOREX ODS 好。 (峰上所标数值为分离度) HPLC Conditions 色谱柱：SP-100-5-ODS-P；4.6 mm i.d.×250mm；；SUPERIOREXODSS5；4.6 mm i.d.×250mm 流动相：20mmol/L乙酸铵：甲醇=95：5 流速：1.0mL/ min 温度：35°C 检测：PDA 230nm 浓度：各约0.1mg/mL 进样量：10pL 随后，我们尝试使用上述两款色谱柱在相同条件下，对市售饮料及糕点样品进行分析。 结果下图所示，饮料样品中未检出五种添加剂，糕点样品中可检出山梨酸、脱氢乙酸峰，使用两支色谱柱均可得到糕点样品的良好分析结果，，且DAISOPAK SP-100-5-ODS-P整体分离结果及峰形明显较好。 E Mnutes HPLC Conditions： 色谱柱： SP-100-5-0DS-P； 4.6 mm i.d.×250mm ；； SUPERIOREX ODS 流动相：20mmol/L乙酸铵：甲醇=95：5 流速：1.0mL/min 温度：35°℃ 检测：PDA 230nm 浓度：40mg/mL 进样量：10pL 样品：饮料样品：以水为稀释剂稀释至40mg/mL；糕点样品：称取样品400 mg 于10mL容量瓶中，加5mL水超声20min， 冷却后加入400 pL 92g/L的亚铁氰化钾和400 pL 183 g/L的乙酸锌溶液，加水定容超声5min， 离心，过滤。 为了进一步改善脱氢乙酸峰形及各物质间分离，我们尝试在国标流动相基础上加入2mmol/L甲酸，同时为避免酸性物质保留过强，采用梯度洗脱的方式来进行分析。结果表明，本方法可在20 min 内得到五种物质分离度大于 4.9的良好分离结果，且各峰峰形均得到明显改善。但由于甲酸的加入导致出峰顺序有所改变，苯甲酸、山梨酸保留有所延长。 下图为使用SP-100-5-0DS-P；4.6m m i.d.×250 mm和 SUPERIOREXODS S5；4.6 mm i.d.×250mm 两款色谱柱采用此流动相方法分别对混合标准品和实际样品的分析结果。 HPLC Conditions： 色谱柱： SP-100-5-ODS-P；4.6mm i.d.×250mm； SUPERIOREX ODS S5；4.6mm i.d.×250mm 流动相：A： 20mmol/L 乙酸铵+2mmol/L甲酸 B：：甲醇 B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min)→5%(35min) 流 速：1.0mL/min 温 度：35°C 检 测： PDA 230nm 浓 度：各约0.1mg/mL 进样量：10pL E HPLC Conditions： 色谱柱： SP-100-5-0DS-P；4.6 mmi.d.×250mm；SUPERIOREX ODS S5； 4.6 mm i.d.×250mm 流动相：A：20mmol/L 乙酸铵+2mmol/L甲酸 B：：E甲醇 B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min)→5%(35min) 流速：1.0mL/min 温度：35°C 检测：PDA 230nm 浓度：40 mg/mL 进样量：10uL 样品：饮料样品：以水为稀释剂稀释至40mg/mL； 糕点样品：称取样品400 mg于10mL容量瓶中，加5mL水超声20min， 冷却后加入400 pL 92 g/L的亚铁氰化钾和400 uL 183 g/L 的乙酸锌溶液，加水定容超声5 min，离心，过滤。 因为上面方法中甲酸的加入会导致出峰顺序的改变，这里，我们尝试使用 DAISOPAK SP-100-5-ODS-P； 4.6 mm i.d.×250mm色谱柱，在GB5009.28-2016条件基础上将流动相条件调整为20mmol/L 乙酸铵：甲醇=92：8，对5种食品添加剂进行分析。 结果如下图所示，总体分析时间得到了缩短，脱氢乙酸的峰形有了一定的改善，且出峰顺序没有发生改变。 HPLC Conditions： 色谱柱：SP-100-5-ODS-P；4.6 mm i.d.×250mm； 流动相：20mmol/L乙酸铵：甲醇=92：8 流速：1.0 mL/ min 温度：35°C 检测： PDA 230nm 浓度： 安赛蜜、糖精钠、苯甲酸各约 0.1mg/mL；山梨酸、脱氢乙酸各约0.067mg/mL 进样量：10 pL 为了进一步缩短分析时间，我们也尝试使用国标原方法以及上面提到的国标原流动相基础上加甲酸的方法，分别使用 4.6x150mm 规格的SP-100-5-0DS-P和 SUPERIOREXODS 色谱柱，对安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、、L山梨酸、脱氢乙酸混合标准品进行分析。 如下面结果所示，使用150mm柱长的上述两款色谱柱，可以进一步缩短分析的时间，且[DAISOPAK SP-100-5-0DS-P整体分离结果明显较SUPERIOREX ODS 好。 HPLC Conditions： 色谱柱：SP-100-5-ODS-P；4.6 mmi.d.×150mm ；；SUPERIOREX ODSS5；4.6mm i.d.×150mm 流动相：20mmol/L乙酸铵：甲醇=95：5 流速：1.0 mL / min 温度：35°C 检测： PDA230nm 浓度： 安赛蜜、糖精钠、苯甲酸各约 0.1mg/mL；山梨酸、脱氢乙酸各约0.067mg/mL 进样量：10pL HPLC Conditions： 色谱柱： SP-100-5-0DS-P；4.6 mmi.d.×150mm；SUPERIOREX ODSS5；4.6mm i.d.×150mm B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min)→5%(35min) 流 速：1.0mL/min 温 度：35°℃ 检 测： PDA 230nm 浓 度：各约0.1mg/mL 进样量：10pL 总结 综上所所，按照 GB5009.28-2016食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定项下方法，无论使用柱长 150 mm 还是250 mm 的 SP-100-5-0DS-P 或SUPERIOREX ODS 色谱柱，均可得到安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠以及脱氢乙酸五种食品添加剂混合标准品的基线分离结果，但DAISOPAK SP-100-5-0DS-P 的分析效果更加优秀。 流动相中加甲酸的梯度条件可明显改善色谱峰形及分离，但苯甲酸、、山梨酸保留会变强，五种物质出峰顺序较国标原方法会有所变化。若想进一步改善糖精钠、苯甲酸之间的分离度，可适当延长初始有机相运行时。另外，在使用4.6x150mm 规格色谱柱的实验中，流动相梯度条件仍有一定的提升空间。 通过将国国方法中流动相的比例调整为 20 mmol/L 乙酸铵：f甲醇=92：8(原方法为95：5)，使用 DAISOPAK SP-100-5-ODS-P； 4.6 mmi.d.×250mm色谱柱可以缩短分析时间并改善脱氢乙酸的峰形。 本次所选的饮料样品中不含本次检测的五种食品添加剂；糕点样品中检出山梨酸、脱氢乙酸。使用250mm柱长的两支色谱柱均可得到两种样品的良好分析结果。但由于食品样品多种多样，本次只选择两种样品，很难说具有广泛代表性，客户可根据自己的样品情况对分析条件进行进一步优化。 以上实验过程供参考。 食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠以及脱氢乙酸的同时分析 贰 GB5009.28-2016条件下分析 首先，我们尝试按照GB5009.28-2016食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定项下方法，分别使用SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm和SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱，对安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸混合标准品进行分析。 结果如下图所示，两支色谱柱在国标原条件下均可达到五种物质分离度大于2.5的良好分离结果，且DAISOPAK SP-100-5-ODS-P整体分离结果及脱氢乙酸峰形明显较SUPERIOREX ODS好。（峰上所标数值为分离度） HPLC Conditions ：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm ；SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm流动相：20 mmol/L 乙酸铵：甲醇=95:5流速：1.0 mL / min温度：35 °C检测：PDA 230 nm浓度：各约0.1 mg/mL进样量：10 µL 随后，我们尝试使用上述两款色谱柱在相同条件下，对市售饮料及糕点样品进行分析。结果下图所示，饮料样品中未检出五种添加剂，糕点样品中可检出山梨酸、脱氢乙酸峰，使用两支色谱柱均可得到糕点样品的良好分析结果，且DAISOPAK SP-100-5-ODS-P整体分离结果及峰形明显较好。   HPLC Conditions：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm ；SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm流动相：20 mmol/L 乙酸铵：甲醇=95:5流速：1.0 mL / min温度：35 °C检测：PDA 230 nm浓度：40 mg/mL进样量：10 µL样品：饮料样品：以水为稀释剂稀释至40 mg/mL；糕点样品：称取样品400 mg于10 mL容量瓶中，加5 mL水超声20min，冷却后加入400 µL 92 g/L的亚铁氰化钾和400 µL 183 g/L的乙酸锌溶液，加水定容超声5 min，离心，过滤。 国标原流动相基础上加甲酸进行分析 为了进一步改善脱氢乙酸峰形及各物质间分离，我们尝试在国标流动相基础上加入2 mmol/L甲酸，同时为避免酸性物质保留过强，采用梯度洗脱的方式来进行分析。结果表明，本方法可在20 min内得到五种物质分离度大于4.9的良好分离结果，且各峰峰形均得到明显改善。但由于甲酸的加入导致出峰顺序有所改变，苯甲酸、山梨酸保留有所延长。 下图为使用SP-100-5-ODS-P;4.6m m i.d.×250 mm和SUPERIOREX ODS S5;4.6 mm i.d.×250 mm 两款色谱柱采用此流动相方法分别对混合标准品和实际样品的分析结果。  HPLC Conditions：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm；SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm流动相：A：20mmol/L 乙酸铵+2mmol/L甲酸         B：甲醇B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min) →5%(35min)流  速：1.0 mL / min温  度：35°C检  测：PDA 230nm浓  度：各约0.1mg/mL进样量：10µL  HPLC Conditions：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm；SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×250 mm流动相：A：20 mmol/L 乙酸铵+2 mmol/L甲酸  B：甲醇B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min) →5%(35min)流速：1.0 mL / min温度：35 °C检测：PDA 230 nm浓度：40 mg/mL进样量：10 µL样品：饮料样品：以水为稀释剂稀释至40 mg/mL；糕点样品：称取样品400 mg于10 mL容量瓶中，加5 mL水超声20 min，冷却后加入400 µL 92 g/L的亚铁氰化钾和400 µL 183 g/L的乙酸锌溶液，加水定容超声5 min，离心，过滤。 调整国标原流动相比例进行分析 因为上面方法中甲酸的加入会导致出峰顺序的改变，这里，我们尝试使用DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱，在GB5009.28-2016条件基础上将流动相条件调整为20mmol/L 乙酸铵：甲醇=92:8，对5种食品添加剂进行分析。结果如下图所示，总体分析时间得到了缩短，脱氢乙酸的峰形有了一定的改善，且出峰顺序没有发生改变。  HPLC Conditions：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm ；流动相：20 mmol/L 乙酸铵：甲醇=92:8流速：1.0 mL / min温度：35 °C检测：PDA 230 nm浓度： 安赛蜜、糖精钠、苯甲酸各约0.1mg/mL；山梨酸、脱氢乙酸各约0.067 mg/mL进样量：10 µL 使用4.6x150mm规格色谱柱进行分析 为了进一步缩短分析时间，我们也尝试使用国标原方法以及上面提到的国标原流动相基础上加甲酸的方法，分别使用4.6x150 mm规格的SP-100-5-ODS-P和SUPERIOREX ODS色谱柱，对安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸混合标准品进行分析。 如下面结果所示，使用150 mm柱长的上述两款色谱柱，可以进一步缩短分析的时间，且 DAISOPAK SP-100-5-ODS-P整体分离结果明显较SUPERIOREX ODS好。  HPLC Conditions：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×150 mm ；SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×150 mm流动相：20 mmol/L 乙酸铵：甲醇=95:5流速：1.0 mL / min温度：35 °C检测：PDA 230 nm浓度： 安赛蜜、糖精钠、苯甲酸各约0.1mg/mL；山梨酸、脱氢乙酸各约0.067 mg/mL进样量：10 µL  HPLC Conditions：色谱柱：SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×150 mm；SUPERIOREX ODS S5; 4.6 mm i.d.×150 mm流动相：A：20mmol/L 乙酸铵+2mmol/L甲酸         B：甲醇B(%)5%(0min)→5%(5min)→40%(15min)→40%(20min)→5%(20.1min) →5%(35min)流  速：1.0 mL / min温  度：35°C检  测：PDA 230nm浓  度：各约0.1mg/mL进样量：10µL 总结 综上所述，按照GB5009.28-2016食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定项下方法，无论使用柱长150 mm还是250 mm的SP-100-5-ODS-P或SUPERIOREX ODS色谱柱，均可得到安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠以及脱氢乙酸五种食品添加剂混合标准品的基线分离结果，但DAISOPAK SP-100-5-ODS-P的分析效果更加优秀。 流动相中加甲酸的梯度条件可明显改善色谱峰形及分离，但苯甲酸、山梨酸保留会变强，五种物质出峰顺序较国标原方法会有所变化。若想进一步改善糖精钠、苯甲酸之间的分离度，可适当延长初始有机相运行时。另外，在使用4.6x150mm规格色谱柱的实验中，流动相梯度条件仍有一定的提升空间。 通过将国标方法中流动相的比例调整为20 mmol/L 乙酸铵：甲醇=92:8（原方法为95：5），使用DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱可以缩短分析时间并改善脱氢乙酸的峰形。 本次所选的饮料样品中不含本次检测的五种食品添加剂；糕点样品中检出山梨酸、脱氢乙酸。使用250 mm柱长的两支色谱柱均可得到两种样品的良好分析结果。但由于食品样品多种多样，本次只选择两种样品，很难说具有广泛代表性，客户可根据自己的样品情况对分析条件进行进一步优化。 以上实验过程供参考。