牛肉中氯霉素检测方案(固相萃取仪)

LabTech SPE 固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物源食品中的氯霉素 氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染，后因对造血系统有严重不良反应，故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素可用于有特效作用的伤寒、副伤寒和立克次体病等及敏感菌所致的严重感染。氯霉素在脑脊液中浓度较高，也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者。由于氯霉素可引起严重的毒副作用，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对牛肉中的氯霉素进行固相萃取富集，用高效液相色谱质谱仪进行检测。 本文参考“农业部781号公告-2-2006动物源食品中氯霉素残留量的测定液相色谱一串联质谱法”采用 SPE1000全自动固相萃取系统，测定氯霉素的回收效果，实验证明， 氯霉素回收率在 90.2%~99.5%之间，重现性 RSD为3.5%，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于动物源食品中的氯霉素样品前处理。 关键词：氯霉素，SPE1000 全自动固相萃取系统，液相色谱串联质谱， 1实验过程 1.1仪器与试剂 SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司)； SCIEX 4500 液相色谱串联质谱(SCIEX)； 氯霉素，100mg/L，坛墨质检； 氯霉素D5， 100mg/L，坛墨质检； 氯化钠(分析纯)； 正己烷(色谱纯)； 乙酸乙酯(色谱纯)； 乙腈(色谱纯)； ( 传真：01 0 - 8 0 4 86354( 总部 )/6 4974268( 市场) ) 1.2标准工作液的配制 取1mL氯霉素标品于10 mL 容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为10 pg/mL 的标准储备液。 取100 uL的氯霉素标准储备液，用甲醇定容到10mL， 配制成0.1 ug/mL标准工作液。 取1mL氯霉素D5标品于 10 mL 容量瓶中，，甲醇定容，配置成浓度为10 ug/mL 的标准储备液。 取100_L的氯霉素D5 标准储备液，用甲醇定容到10mL， 配制成 0.1 ng/mL标准工作液。 1.3试验方法 1.3.1样品准备 取均质后的样品 5g 置于50mL离心管中，加入内标200uL， 氯霉素标液200uL，加入乙腈5mL，4%氯化钠5mL，涡旋 2min， 4000rad/min 离心10min，取上清液至另一个50mL离心管中，重复提取一次，合并提取液。提取液中加液正己烷5mL， 涡旋 2min，2000rad/min 离心10min，弃去上层清液，重复一次，加入水饱和乙酸乙酯5mL，涡旋1min，2000rad/min 离心10min， 将上层液转移到15mL离心管中，重复提取一次，合并提取液氮吹至干，用水：乙腈(95：5)5mL溶解，备用。 同时做样品空白，加入内标200uL，剩下同样品处理。 1.3.2固相萃取及浓缩 按照图1所示的方法进行 SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至干，用1mL流动相定容。 ( 电 话 ： 01 0-8 0 4 86450 (总 部)/ 6 497 31 19( 市 场) ) ( 传真：01 0 - 8 0 4 86354( 总部 )/6 4974268( 市场) ) 关闭 图1氯霉素的SPE 富集方法 1.3.3 UPLC-MS 测定牛肉中氯霉素 液相条件： 色谱柱： C18，5 um， 4.6mm*100mm； 流速：0.2mL/min ； 进样量：5uL； 流动相：乙腈：水=40：60； MS条件： 气帘气~40 CAD~9 TEM~150 GS1~40喷雾电压-4500V 表1氯霉素母离子/子离子(定量例子152.0) 名称 母离子/子离子 CE DP CXP 氯霉素 321.0/152.0 -23 -70 -8 321.0/256.7 -16 -70 -8 氯霉素D5 326.1/156.9 -23 -70 -30 2试验结果 2.1牛肉中氯霉素色谱图 2.1.1牛肉中氯霉素标品色谱图 图2为取 200 pL 的氯霉素标准工作液和200uL氯霉素内标工作液，用流动相定容到1.0 mL检测，氯霉素标品出峰色谱图，出峰时间为1.50min。 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-8 0 4 86450 (总 部)/ 6 497 31 19( 市 场) ) 图2氯霉素标品出峰色谱图 2.1.2牛肉中氯霉素样品色谱图 图3氯霉素加标样品出峰色谱图，出峰时间为 1.50min， 图4为空白样品色谱图。 图3氯霉素加标样品出峰色谱图 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-8 0 4 86450 (总 部)/ 6 497 31 19( 市 场) ) ( 传真：01 0 - 8 0 4 86354( 总部 )/6 4974268( 市场) ) 图4空白样品色谱图 2.2 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素回收率 液质测定牛肉中氯霉素回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在之间90.2%~99.5%，重现性 RSD 为3.5%。 表2牛肉中氯霉素的加标回收率(加标量4ug/kg) 名称 回收率(%) 平均值 RSD 1 2 3 4 5 6 (%) (%) 氯霉素 99.5 96.0 98.5 95.3 90.2 94.3 95.6 3.5 3结果与讨论 SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率在90.2%~99.5%，重现性为3.5%，准确度与平行性良好且自动化效率高，可应用于此类类品的前处理方法中。 ( 参考文献 ) 农业部781号公告-2-2006动物源食品中氯霉素残留量的测定液相色谱一串联质谱法 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-8 0 4 86450 (总 部)/ 6 497 31 19( 市 场) ) ( 传真：01 0 - 8 0 4 86354( 总部 )/6 4974268( 市场) ) 地址：北京空港工业区Your Lab， Our Techwww.labtechgroup.com 氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染，后因对造血系统有严重不良反应，故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素可用于有特效作用的伤寒、副伤寒和立克次体病等及敏感菌所致的严重感染。氯霉素在脑脊液中浓度较高，也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者。由于氯霉素可引起严重的毒副作用，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对牛肉中的氯霉素进行固相萃取富集，用高效液相色谱质谱仪进行检测。本文参考“农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法”采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定氯霉素的回收效果，实验证明，氯霉素回收率在90.2%~99.5%之间，重现性RSD为3.5%，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于动物源食品中的氯霉素样品前处理。关键词：氯霉素，SPE1000全自动固相萃取系统，液相色谱串联质谱，