维生素与注射液溶液中维生素检测方案(液相色谱仪)

结果与讨论标准品色谱图 同时分离注射液中12种水溶性和脂溶性维生素(LC-UV) 郭丽萍 金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司 水溶性维生素；脂溶性维生素；注射液 引言 维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类微量有机物质，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用，在食品、保健品及药品中的测定也变得越来越频繁。维生素是个庞大的家族， 目前所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水溶性两大类。高效液相色谱法作为一种快速分离、能同时测定多种物质的仪器分析方法，在多种维生素同时测定方面具有独特的优势。但是由于水溶性维生素和脂溶性维生素性质差异很大，所以很少将其在同一个方法里进行检测。 本方法采用 Thermofisher 的针对极性化合物有特殊选择性的 Acclaim PolarAdvantage ll C18 色谱柱，可以很有效的将9种水溶性维生素得到很好的保留和分离，同时能够在大 有机相存在的情况下，对脂溶性维生素得到很好的洗脱和分离，实现了一个方法解决两类性质差异很大的维生素的同时分离。 Thermo Ultimate 3000 系统： 泵： DGP-3600 分析柱：：Acclaim PolarAdvantage ll C18， 4.6×250mm，5um，PN： 063199， SN：001461 自动进样器：WPS-3000SL 柱温箱： TCC-3000 检测器： DAD-3000 流动相： A：0.025%TFA的水；B：乙腈；C：甲醇；梯度见表1.进样量：10pL 色谱软件： Chromeleon 7.1 柱温：室温 检测器波长：见表2. 表1.梯度淋洗条件 时间(min) 流速(mL/min) B(%) C(%) 0 1.0 0 0 2 1.0 0 0 5 1.0 13.5 0 15 1.0 40 0 15.5 1.0 36 60 17.5 2.0 36 60 32 2.0 0 100 33 1.8 0 0 34 1.0 0 0 44 1.0 0 0 表2.检测器波长变化条件 时间 (min) 流速(mL/min) 0 248 4 260 7 291 8.5 210 11 361 11.6 275 12.8 210 18 266 24.9 293 30 326 36 248 按照注射液冻干剂说明要求，向其中加入5mL超纯水，使其充分溶解，将溶解后的注射液通过 0.22 um 尼龙滤膜过滤后，使用超纯水稀释10倍，待测。 图1.9种水溶性维生素混标谱图 其中四水辅羧酶121.11mg/L、Vc 124.44 mg/L、烟酰胺 120 mg/L、Vb6 111.11 mg/L、右泛醇130mg/L、Vb12 121.11mg/L、核黄素112.22 mg/L、生物素 117.78 mg/L 图2.3种脂溶性维生素混标谱图 VA棕榈酸酯 466.67 mg/L、VE 400 mg/L、VD3 350 mg/L 实际样品分析 按照样品处理方法测定了注射液样品，测定结果如下： 图3.注射液样品谱图 样品1(mg/L) 样品 2(mg/L) 样品3 (mg/L) 四水辅羧酶 105.2670 100.7504 91.5744 VC 2710.1146 2300.7694 2514.6856 烟酰胺 881.0165 864.8852 910.3994 Vb6 107.1940 71.5889 68.2504 右泛醇 277.4218 262.2559 247.1492 Vb12 0.2197 0.0978 0.1193 叶酸 7.5988 7.2841 7.2608 核黄素 97.4134 102.0371 96.0390 生物素 1.2283 1.0457 0.7720 VD3 n.a. n.a. n.a. VE 196.8956 192.1588 64.6316 VA棕榈酸酯 106.0774 95.3412 31.8800 讨论与建议 本实验针对注射液的特点，将9种水溶性维生素和3种脂溶性维生素放在同一个分析方法里进行检测，从结果中可以看到分析结果良好。而因为水溶液中维生素C不稳定，所以有随着时间推移峰面积减少的现象，所以推荐对于维生素C的分析需要现做现配样品。 因为水溶性维生素比较易溶于水，而脂溶性维生素必须 溶解在有机溶剂里，而且如果有机溶剂中出现比较少的水也会导致脂溶性维生素的析出以及影响水溶性维生素中四水合辅羧酶、核黄素和烟酰胺的峰形，所以标准品中分别将水溶性维生素和脂溶性维生素分开混合测量。因为样品为冻干剂，且按照使用要求5mL超纯水溶解后依然浓度很高，所以再次将样样稀释10倍后进行分析。 SCIENTIFIC S CIENTIFICAN_C_LC- 维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必需从食 物中获得的一类微量有机物质，在人体生长、代谢、发 育过程中发挥着重要的作用，在食品、保健品及药品 中的测定也变得越来越频繁。维生素是个庞大的家族， 同时分离注射液中 12 种水溶性和脂溶性维生素 (LC-UV) Application Notes C_LC-47 郭丽萍  金燕 赛默飞世尔科技（中国）有限公司 目前所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水 溶性两大类。高效液相色谱法作为一种快速分离、能同 时测定多种物质的仪器分析方法，在多种维生素同时测 定方面具有独特的优势。但是由于水溶性维生素和脂溶 性维生素性质差异很大，所以很少将其在同一个方法里 进行检测。