血液中脂质检测方案(液质联用仪)

No.C237http：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439400-650-0439 ApplicationNews 高效液相色谱质谱联用仪 LCMSTM-8060 No.C237 血液中主要脂质轮廓分析分 LC/MS/MS方法 山田真希、久保明美 对用户的好处 ◆可进行血液中主要脂质的轮廓分析。◆LCMS-8060 同时分析正/负离子时仍可获得高质量数据(极性切换时间： 5 msec)。 仅使用少量人血液即可解析主要脂质的脂肪酸组成。 前言 磷脂质(PL)、甘油三酯(TG)、胆固醇酯(CE)为血液中的主要脂质(图1)。这些主要脂质的细微结构在与各种疾病的关联性和病理学研究中备受关注。 本文使用 LCMS-8060 结合多反应监测(MRM)模式，开发了一种脂质轮廓分析方法(应用报告No.C137)。 本方法将监测目标扩展至血液中的多种主要脂质，不仅涵盖磷脂，还包括 CE、TG、游离脂肪酸、胆固醇。方法可同时对约360个脂质 MRM分析通道(离子对)进行监测，对人血液中约100种脂质进行鉴别：包括51种PL、26种 TG、11种CE、以及CE过氧化物、游离脂肪酸、游离胆固醇。 本方法还阐明了各种脂质的脂肪酸组成，也同样适用于血浆和血清分析。 图1血浆中的主要脂质 l分析条件 采用 Nexera UHPLC 和 LCMS-8060 系统。LCMS-8060 为正/负离子极性切换时间 5 msec 的超高速三重四极杆质谱仪(图2)。UHPLC 及 MS 的分析条件如表1所示。 图2LCMS-8060外观 表1分析条件 [HPLC条件](NexeraTM) 色谱柱 ： Phenomenex Kinetex@c8 (150 mm × 2.1 mml.D.， 2.6 um) 柱温 ： 50℃ 流动相A ： 20mM甲酸铵-水 流动相B ：乙腈/异丙醇(50/50， v/v) 流速 ：0.4mL/min 进样量 ：1pL [MS 条件] (LCMS-8060) 离子源 ：ESI，正/负离子模式 监控模式 ：MRM 雾化气流速 ：3.0 L/min 干燥气流速 ： 10.0 L/min 加热气流速 ：10.0 L/min DL管温度 ：250℃ 加热模块温度 ： 400°℃ 接口温度 ：150℃ 碰撞气 CID 压力 ：270kPa 延迟时间/驻留时间 ： 3msec./ 1 msec. 试样预处理 人血液购于 BiolVT (US)。在5pL血液中加入含有0.1%甲酸的甲醇500uL， 充分混匀；离心后取1uL 上清液于 LC/MS/MS进行分析(图3)。LPL(溶血磷脂质)、PL、CE、TG 的 MRM色谱图如图4所示。 图3试样预处理 图4LPL、PL、CE、TG 的 MRM色普图 脂质轮廓分析方法包含靶向磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)及鞘磷脂(SM)的磷脂质及溶血磷脂质的约2000 个MRM 监测通道。正离子模式下可检出 PC、SM、PE及 PS脱离极性基团而产生的产物离子；负离子模式下可检出源于PI的极性基团和源于脂肪酸的产物离子。如前文所述，实现多通道正负性离子同时监测，源于 LCMS-8060 超快速的正/负离子极性切换时间(5 msec)。 除 CE 和 TG外，本方法缩小了人血液中磷脂和溶血磷脂的MRM 监测通道范围，约360个MRM 通道可在20分钟内完成监测。使用1pL(相当于10nL血液)人血液提取物进行分析，可鉴定超过100种脂质；其中，可以解以51种PL与 26 种TG的脂肪酸组合。 <磷脂质； PL> 从微量人血液中可检出51种磷脂质。 PE 的 MRM 色谱图及归属结果如图5所示。 图4 PE38：4、PE38：5、PE38：6 的 MRM 色谱图 Nexera 及 LCMS 是岛津制作所株式会社在日本及其他国家的商标。 Kinetex 是 Phenomenex， Inc. 的注册商标。 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 在正离子模式下，将 m/z 369设定为产物离子，监控12个MRM 通道，可检出 CE。CE过氧化物亦同时监测。检测出CE18：2 为 CE中信号最强谱峰。CE 过氧化物 CE-OOH18：2在血液和血清样品中被检出。 <甘油三酯；TG> 监测TG时，使用中性丢失模式监测了90个MRM 通道。TG54：6 的 MRM 色谱图及归属结果如图6所示。 图6 TG54：6 的 MRM色谱图 (A)TG 18：2-18：2-18：2(B)TG 16：0-18：2-20：4 (C)TG 16：0-18：1-20：5(D)TG 16：0-18：0-22：6*1 *1未确认18：0中性产物丢失的产物离子 结论 本文建立了一种基于MRM 分析模式的人血液中主要脂质的轮廓分析方法。通过本方法，可以从微量人血液中检出100种以上的脂质，并阐明磷脂质及甘油三酯中的脂肪酸组合。 岛津应用云 ( 免责声明： ) ( *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ) ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) 磷脂质（PL）、甘油三酯（TG）、胆固醇酯（CE）为血液中的主要脂质。这些主要脂质的细微结构在与各种疾病的关联性和病理学研究中备受关注。本文建立了一种基于MRM分析模式的人血液中主要脂质的轮廓分析方法。通过本方法，可以从微量人血液中检出100种以上的脂质，并阐明磷脂质及甘油三酯中的脂肪酸组合。