药材，饮片中农药残留检测方案(液质联用仪)

thermoscientific热线8008105118电话 4006505118www.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。 ◎2019 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 全新一代三重四极四质谱TSQ Fortis同时分析检测药材及饮片中30种农药残留 高鹏、陈冰、王立杰赛黑飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 关键词 摘要 本文建立了针对药材及饮片中30种农药的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱分析方法。色谱条件：分析柱为Thermo Scientific Ac-cucore aQ (100×2.1 mm， 2.6 um)， 流动相为乙腈-水(均含0.1%甲酸，5mM甲酸铵)，流速0.3 mL/min，柱温40℃。采用ESI源，扫描方式为选择反应检测(SRM)。结果表明： TSQ Fortis测定30种农药检出限均能满足《中国药典》中“0212药材和饮片检定通则”中定量限的要求。在2ng/mL浓度水平下连续进样8针，30种农药RSD均小于6.2%。采用该方对对基质样品进行分析，灵敏度和重现性结果良好。 随着我国医药的不断发展，药材及饮片使用量不断增多，使其成为我国用药的重要组成部分。随着其使用量的不断增多，使用过程中的安全隐患也不断增加。除去本身的药性安全，还有其生产环境和加工制作过程中引入的安全问题，如农药残留问题等。许多国家和地区针对农药在植物性食物和中药材中的农药残留量都制定了严格的限量标准，我国国家药典委员会颁布的《中国药典》中“0212药材和饮片检定通则”也明确制定了严格的限量标准。 LC-MS/MS是分析农药残留的重要方法，有很高的灵敏度和选择性。本文建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis分析药材及饮片中30种农残的方法，方法符合国家法规标准要求， 取得了良好的灵敏度、重现性和线性范围。基质样品分析结果满意，可用于药材及饮片中痕量农残的准确定量分析。 2.实验部分 2.1仪器与试剂： Thermo ScientificTM Vanquish超高效液相色谱仪； Thermo Scien-tific TM TSQFortis三重四极杆质谱；乙腈(色谱纯，美国ThermoFisher公司)、甲醇(色谱纯，美国Thermo Fisher公司)； 实验用水为Milli-Q去离子水；甲酸(色谱纯，SIGMA)；甲酸铵(色谱纯， SIGMA)。30种农药化合物单个标准品(化合物列表见表1) 表1化合物列表 2.2色谱条件 色谱柱： Thermo Scientific Accucore aQ (100× 2.1 mm， 2.6 um)；柱温40℃；进样量10uL；流动相A：0.1%甲酸，5mM甲酸铵水溶液，B：0.1%甲酸，5mM甲酸铵乙腈；梯度洗脱程序见表2。 表2梯度洗脱程序 Time(min) Flow(mL.min-1) A(%) B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 2.4质谱条件 采集模式：正模式扫描；喷雾电压：4000V；鞘气压力：35Arb；辅助气压力： 10Arb；雾化气温度：350℃；离子传输管温度：350℃。Q1分辨率：0.7；Q3分辨率：1.2；CID碰撞能：1.5 mTorr。 表330化合物SRM参数 *为定量离子。 3.1质谱条件的优化 采用“T”三通对三十种农药的质谱参数进行优化。Tune软件可以自动监控多种化合物的信号强度和喷雾稳定性，对鞘气、辅助气、喷雾电压以及碰撞能量进行同时优化，可以得到保证所有化合物喷雾温度和信号最优的质谱条件。 3.2仪器灵敏度、线性和精密度 将高浓度标准品逐级稀释，配制成系列标准曲线：0.1ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、2 ng/mL、5ng/mL、10 ng/mL、20ng/mL、50 ng/mL、100ng/mL。在Fortis上使用上述条件进行分析，考察仪器灵敏度、重现性和线性范围。 结果表明所有化合物的LOQ在0.1~5 ng/mL之间，具有良好的灵敏度，检出限与国标限值相比较，所有化合物定量限均低于《中国药典》中“0212药材和饮片检定通则”规定的定量限；2 ng/mL连续进8针，峰面积重现性均小于等于6.19%。所有化合物在0.1 ng/mL~100 ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系。图1为1 ng/mL浓度下典型化合物的提取离子流图。 表430种农残LOD、LOQ、线性、重现性测试结果 Time (min) Time (min) Time (min) 图1：1ng/mL浓度下部分化合物的提取离子流图 3.3基质加标分析 空白基质溶液制备：参照《中国药典》中“2341农药残留测定法”的制备方法。 空白基质加标：氮吹吹干，甲醇：水(v/v=1/1)复溶，然后加标，， 2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL， 2 ng/mL浓度下典型化合物的提取离子图见图2。 上机测试，结果表明30种化合物的基质加标2、5、10 ng/mL分别连续进样8针，峰面积重现性RSD均小于等于7.4%，具体见表5，图3和图4是基质加标2 ng/mL浓度下连续进样8针提取离子图(以甲胺磷和灭线磷为例)。 各离子通道不存在溶剂效应和干扰，可准确定量定性。 表5基质加标30种农残重现性(n=8)测试结果 序号 化合物 基质2ppb RSD/% 基质5ppb RSD/% 基质10ppb RSD/% 1 甲胺磷 3.96 4.48 4.11 2 苯线磷 3.64 2.75 2.70 3 苯线磷砜 4.1 4.40 3.32 4 苯线磷亚砜 5.64 6.14 4.03 5 地虫硫磷 6.29 6.88 4.76 6 治螟磷 3.3 3.50 3.43 7 克百威 1.71 1.70 1.67 8 3-羟基克百威 6.93 5.34 5.24 9 胺苯磺隆 4.54 4.90 3.81 10 甲磺隆 5.33 4.79 4.69 11 氯磺隆 4.19 3.37 3.31 12 硫线磷 3.98 4.27 4.19 13 氯唑磷 4.93 3.95 1.91 14 甲拌磷 4.76 5.15 4.06 15 甲拌磷亚砜 5.43 5.91 4.80 16 甲拌磷砜 6.27 3.46 3.40 17 蝇毒磷 4.4 4.74 4.66 18 硫环磷 3.19 3.37 3.31 19 磷胺 3.47 3.69 3.62 20 涕灭威 5.22 5.67 5.57 21 涕灭威砜 6.23 6.81 6.69 22 涕灭威亚砜 7.4 7.00 6.88 23 久效磷 5.44 4.92 3.81 24 内吸磷 1.77 2.76 2.33 25 灭线磷 2.44 1.71 1.81 26 特丁硫磷砜 3.33 2.19 3.47 27 特丁硫磷亚砜 6.33 3.59 5.69 28 水胺硫磷 4.78 3.20 5.08 29 杀虫脒 3.98 2.64 4.19 30 甲基异柳磷 5.13 3.45 4.47 图2：基质加标2 ng/mL浓度下部分化合物的提取离子流图 图3：甲胺磷基质加标重现性(2 ng/mL、n=8、RSD=3.96%) 图4：灭线磷基质加标重现性(2 ng/mL、n=8RSD=2.44%) thermoscientific 4.结论 本文建立了TSQ Frotis分析药材和饮片中30中农残的方法，所有化合物定量限在0.1~5 ng/mL之间， 《中国药典》中“0212药材和饮片检定通则”规定各化合物的定量限在10~100 ng/mL之间，灵敏度均能满足要求。采用该方法对基质样品进行分析，也均取得了优异的灵敏度和重现性结果，各离子通道不存在溶剂效应和干扰，可准确定量定性。 本文建立了TSQ Frotis分析药材和饮片中30中农残的方法，所有化合物定量限在0.1~5 ng/mL之间，《中国药典》中“0212药材和饮片检 定通则”规定各化合物的定量限在10~100 ng/mL之间，灵敏度均能满足要求。采用该方法对基质样品进行分析，也均取得了优异的灵敏 度和重现性结果，各离子通道不存在溶剂效应和干扰，可准确定量定性。