本文在变色龙软件的控制下建立了针对药材及饮片中30种农药的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis的分析方法。
thermoscientific 前处理流程: 热线8008105118电话4006505118www.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎ 2020 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产,除非另有指明。 全新一代三重四极杆质谱TSQ Fortis结合变色龙软件同时检测药材及饮片中30种农药残留 孙银、刘钊、高鹏、陈冰、王立杰赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 TSQ Fortis、药材及饮片、农残 摘要 本文在变色龙软件的控制下建立了针对药材及饮片中30种农药的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis的分析方法。所用色谱条件:色谱柱为Accucore aQ (100×2.1mm, 2.6um), 流动相A为0.1%甲酸(含5mmol/L甲酸铵)水溶液,B为乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5mmol/L甲酸铵)(95:5),流速0.3mL/min, 柱温40℃。使用ESI源,扫描方式为选择反应监测(SRM)。结果表明:采用QuEChERS法对人参、甘草、金银花等10种中药基质样品进行前理,TSQ Fortis进行测定,以金银花基质为例,30种农药限值均能满足药典中“0212药材和饮片检定通则”中定量限的要求;在0.1~100ng/mL浓度范围内,所有化合物线性关系良好; 5ng/mL浓度水平下连续6针进样,30种农药RSD均小于10%。因此,该方法可用于基质样品的检测分析。 1.引言 我国是中药资源最丰富的国家,随着我国医药的不断发展,药材及饮片使用量不断增多,中药材产业的发展日益受到人们的重视。然而,为了追求经济效益的最大化,在中药种植和保存过程中滥用农药的行为屡见不鲜,这将不利于中药行业的长期稳定发展。近年来,国家药典委员会颁布了一系列检测法规以提高中药材质量。最近《中国药典》2020版也已发行,预计将于12月30日正式实施。这对于保障公众用药的安全性和有效性,推进医药产业升级以及提高药材质量具有重要意义。 2020版《中国药典》四部通则修订了“0212药材和饮片检定通则”以及“2341 农药残留测定法””。其中“0212药材和饮片检定通则”中明确规定禁用农药种类及限量标准,并在“2341农药留留测定法”中第五法给出禁用农药的具体检测方法,标准中规定使用LC-MS/MS方法检测的化合物有30种。 LC-MS/MS方法因其检测灵敏度高、选择性好、分析速度快等优点,从而成为农药残留分析检测的重要方法。本文基于新版药典通则,建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱TSQ Fortis分析药材及饮片中30种农残的方法,在多种中药基质中均取得了良好的灵敏度、重现性和线性,因此方法符合新版药典标准要求,,可用于药材及饮片中农残的准确定量分析。 2.实验部分 2.1仪器与试剂: Thermo ScientificTM Vanquish超高效液相色谱仪; ThermoScientificTM TSQ Fortis三重四极杆质谱配置变色龙软件;乙乙(LCMS级, 美国Thermo Fisher公司)、甲醇(LCMS级, 美国Thermo Fisher公司);实验用水为去离子水;甲酸(LCMS级, Fisher A117-50);甲酸铵(LCMS级, SIGMA)。30种农药化合物清单如下表。 表130个化合物列表 2.2色谱条件 色谱柱::Thermo Scientific Accucore aQ (100×2.1 mm, 2.6 pm); 柱温40℃;进样量2pL;流动相A:0.1%甲酸, 5 mmol/L甲酸铵水溶液,B:乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L甲酸铵))(95:5);梯度洗脱程序见表2。 表2梯度洗脱程序 Time (min) Flow (mL/min) A(%) B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 2.3质谱条件 表3离子源参数 lon Source Type ESI(+) Positive lon (v) 4000 Sheath Gas (Arb) 35 Aux Gas (Arb) 10 Sweep Gas (Arb) 0 on Transfer Tube Temp(℃) 350 Vaporize Temp (℃) 350 Q1 Resolution (FWHM) 0.7 Q3 Resolution (FWHM) 1.2 表430个化合物SRM参数 化合物名称 分子量 母离子 子离子 碰撞能 Tube Lens Source Fragmentation 411 196.071* 15.07 74 0 胺苯磺隆 410.41 411 168 27.16 74 0 243.014 130.958* 20 80 3.2 灭线磷 242.33 243.014 214.97 10.81 80 3.2 304.113 217* 23.04 102 1 苯线磷 303.36 304.113 201.929 35.48 102 1 247 108.929* 17.72 62 3.2 地虫硫磷 246.33 247 137.071 10.39 62 3.2 314 162.071* 15.61 71 9.7 氯唑磷 313.7 314 120 25.81 71 9.7 水胺硫磷 289.29 307.09 307.09 188.887* 230.958 10.86 15.32 75 75 0 0 141.962 94.014* 14.3 79 0 甲胺磷 141.13 141.962 124.96 14.3 79 0 223.16 224.068 127* 16.17 84 1 久效磷 224.068 193 10.25 84 1 260.38 261 75.125* 10.18 55 0 甲拌磷 261 199 7.23 55 0 255.29 256.095 140.039* 27 80 5 硫环磷 256.095 61.343 26 80 5 磷胺 299.69 300.038 174.125* 12.5 80 6.5 300.038 226.958 12.83 80 6.5 治螟磷 333.32 323.03 171.071* 14.5 98 1 323.03 114.889 29.31 98 1 320.43 321.065 115.074* 28 97 1 特丁硫磷砜 321.065 143.045 22 97 1 288.36 305.071 187* 10.23 97 0 特丁硫磷亚砜 305.071 96.946 39.34 97 0 *为定量离子 2.4样品前处理 参考“2341通则《第五法药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定》”快速样品处理法(QuEChERS)对10种中药基质进行处理,耗材清单见表5。 10种基质如下: 表5 QuEChERS 法所用耗材 方法类别 规格 货号 无水硫酸镁6g,无水乙酸钠1.5g, 50/包 60105-335-B 无水硫酸镁900 mg、N-丙基乙二胺 300 mg、十八烷基硅快速样品处理法(QuEChERS 法)烷键合硅胶300 mg、硅胶 300 mg、石墨化碳黑90 mg, 15 60105-509-BmL,50/包 色谱柱 Accucore aQ C18 (100×2.1 mm, 2.6 um) 17326-102130 图1 QuEChERS法前处理流程图 3.结果与讨论 3.1样品的色谱图 4.0e4- 图25ng/mL浓度下金银花基质中30个化合物的提取离子流图 3.2仪器灵敏度、线性和精密度 以金银花基质为例,采用2.4样品前处理方式制备空白基质,将高浓度混标逐级稀释,配制成浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、100ng/mL的基质标准溶液,使用Fortis进行分析检测,考察仪器灵敏度和线性范围。另配制浓度为5ng/mL的基质加标样品,连续进样6次,考察精密度。 表630个化合物LOQ、线性以及重现性 结果表明,所有化合物的LOQ在0.1~1ng/mL之间,具有良好的灵敏度,限量值与国标限值相比较,所有化合物定量限均低 于药典中“0212药材和饮片检定通则”规定的定量限;所有化合物在0.1~100ng/mL浓度范围内,线性关系良好;5ng/mL连续6针进样,峰面积重现性均小于10%。图3为金银花基质中30个化合物的线性关系。 图3金银花基质中30个化合物的线性关系(1-100ng/mL) 3.3回收率实验 选用人参、党参、泽泻、甘草、半夏、金银花、菊花、五味子、车前子、陈皮10种中药基质为代表,按照2.4样品前处理方式进行处理,加标浓度分别为5 pg/kg和10 pg/kg, 每个浓度水平平行处理3份样品,考察前处理方法的稳定性。结果表明,每种基质的回收率结果符合2341通则方法学指标,前处理精密度良好,可用于中药基质的实际测定。 图3金银花基质加标回收率结果 图4陈皮基质加标回收率结果 4.结论 本文建立了TSQ Fortis检测药材和饮片中30种农残的方法,结果表明,所有化合物灵敏度均能满足要求,所得定量限均在0.1~1ng/mL之间,远优于药典中“0212药材和饮片检定通则”规定各化合物的定量限;按照“2341农药残留测定法”采用QuEChERS 法对人参、甘草、金银花等10种中药基质样品进行前处理,加标回收率以及方法重现性均能满足方法学指标,表明该方法可用于中药材及饮片中农药残留的分析检测。 我国是中药资源最丰富的国家,随着我国医药的不断发展, 药材及饮片使用量不断增多,中药材产业的发展日益受到人 们的重视。然而,为了追求经济效益的最da化,在中药种植 和保存过程中滥用农药的行为屡见不鲜,这将不利于中药行 业的长期稳定发展。近年来,国家药典委员会颁布了一系列 检测法规以提高中药材质量。最近《中国药典》2020 版也 已发行,预计将于12月30日正式实施。这对于保障公众用 药的安全性和有效性,推进医药产业升级以及提高药材质量 具有重要意义。2020版《中国药典》四部通则修订了“0212药材和饮片检 定通则”以及“2341 农药残留测定法”。其中“0212药材 和饮片检定通则”中明确规定禁用农药种类及限量标准,并 在“2341农药残留测定法”中第五法给出禁用农药的具体检 测方法,标准中规定使用LC-MS/MS方法检测的化合物有30 种。 LC-MS/MS方法因其检测灵敏度高、选择性好、分析速度快 等优点,从而成为农药残留分析检测的重要方法。本文基于 新版药典通则,建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱 TSQ Fortis分析药材及饮片中30种农残的方法,在多种中药 基质中均取得了良好的灵敏度、重现性和线性,因此方法符 合新版药典标准要求,可用于药材及饮片中农残的准确定量 分析。
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赛默飞色谱与质谱为您提供《药材及饮片中30种农药残留检测方案(液质联用仪)》,该方案主要用于中药材和饮片中限度检查检测,参考标准--,《药材及饮片中30种农药残留检测方案(液质联用仪)》用到的仪器有赛默飞TSQ Fortis™ 三重四极杆质谱仪