奶及奶制品中雌三醇残留量检测方案(其它色谱仪及分离设备)

奶及奶制品中雌三醇残留量的测定 GB 29698-2013 适用范围 本标准规定了奶及奶制品中雌三醇残留量的测定方法（本实验样品为牛奶）。 参考标准：《GB 29698-2013 食品安全国家标准 奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多残留的测定 气相色谱-质谱法》 溶液的配置 1mol/L NaOH溶液：取4.0g氢氧化钠固体，用水溶解并稀释至100mL。 5mol/L盐酸溶液：取浓盐酸48mL，用水溶解并稀释至100mL。 95%正己烷-乙酸乙酯溶液：95mL正己烷+5mL乙酸乙酯。 70%正己烷-乙酸乙酯溶液：70mL正己烷+30mL乙酸乙酯。 标准储备溶液：准确吸取1.0mL 1000μg/mL雌三醇液体标准品，用甲醇溶解定容至10mL，配制成100μg/mL标准储备液，标准储备溶液避光于0~4ºC保存。 标准工作溶液：准确移取标准储备液100μL用甲醇定容至10mL，得到1μg/mL标准工作溶液，标准工作溶液避光于0~4ºC保存。 提取步骤 准确称取10g试样（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入5mL乙腈、15mL乙酸乙酯，涡旋3min，以8000r/min离心5min，吸取上清液于50mL鸡心瓶中，残渣重复上述步骤重复提取一次，合并提取液。于40℃下浓缩至近干，用1mol/L NaOH溶液6mL分三次溶解，转至另一50mL离心管中，加20mL正己烷涡旋振荡1min，以8000r/min离心3min，收集下层提取液，用5mol/L盐酸溶液调pH至5.0-5.2，备用。 净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® C18小柱，规格：500mg/6mL。 活化平衡：5mL甲醇，5mL水； 上样：将备用液全部上样，弃去； 淋洗：5mL水，弃去并压干； 洗脱:5mL甲醇，收集并压干。 收集洗脱液于40℃氮吹至干，用5mL 95%正己烷-乙酸乙酯溶液溶解残余物，待净化。 SPE柱：月旭Welchrom® Silica小柱，规格：500mg/6mL。 活化平衡：5mL正己烷； 上样：将待净化液全部上样，弃去； 淋洗：5mL正己烷，弃去并压干； 洗脱:5mL 70%正己烷-乙酸乙酯溶液，收集于具塞玻璃试管中并压干。 衍生化 将上述洗脱液于40℃氮吹至干，加入30μL七氟丁酸酐、70μL丙酮盖紧盖子，涡旋混合30s，于30℃恒温箱中衍生30min，氮吹至干，准确加入1mL正己烷，涡旋混合10s，溶解残余物，供GC-MS分析。 注意事项 加标水平：10g样品中加入100μL 1μg/mL标准工作液，因此加标水平为0.01mg/kg，最终机度数为 0.1μg/mL。 色谱条件 7.1气相色谱条件 色谱柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 进样口温度 250℃ 升温程序 120℃，保持2min，以15℃/min升温至250℃，再以5℃/min升温至300℃，保持5min。 载气 高纯氦气（纯度>99.999%） 进样方式 不分流进样 恒流模式 1.,0mL/min 进样量 1μL 7.2质谱条件 电离方式 电子轰击电离源（EI） 电离能量 70eV 传输线温度 280℃ 离子源温度 230℃ 四极杆温度 150℃ 监测方式 449.1/409.1/356.1 溶剂延迟 5min 色谱图或者加标回收率结果 图1. 雌三醇0.1μg/mL空白加标标准溶液图谱 物质 保留时间 类型 峰宽 面积 开始时间 结束时间 雌三醇 14.941 M 0.048 22316 14.847 14.997 图2. 牛奶样品图谱 图3. 牛奶样品加标0.01mg/kg图谱 表2、加标回收率表 物质 加标水平 平均回收率 RSD值（n=2） 雌三醇 0.01mg/kg 94.85% 4.12% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00504-11006 SPE小柱 Welchrom® C18,500mg/6mL,30pk 00500-11006 SPE小柱 Welchrom® Silica,500mg/6mL,30pk 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 03904-22001 气相毛细管柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00826-E020S01MMEVC 雌三醇标准品 A2S, CAS No.:50-27-1,1000µg/ml 于 甲醇,1.1ml 1 适用范围 本标准规定了奶及奶制品中雌三醇残留量的测定方法（本实验样品为牛奶）。  参考标准：《GB 29698-2013 食品安q国家标准 奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多残留的测定 气相色谱-质谱法》2 提取步骤准确称取10g试样（j确至0.01g）于50 mL离心管中，加入5mL乙腈、15mL乙酸乙酯，涡旋3min，以8000r/min离心5min，吸取上清液于50mL鸡心瓶中，残渣重复上述步骤重复提取一次，合并提取液。于40℃下浓缩至近干，用1mol/L NaOH溶液6mL分三次溶解，转至另一50mL离心管中，加20mL正己烷涡旋振荡1min，以8000r/min离心3min，收集下层提取液，用5mol/L盐酸溶液调pH至5.0-5.2，备用。3 净化步骤SPE柱：月旭Welchrom  C18小柱，规格：500mg/6mL。活化平衡：5mL甲醇，5mL水；上样：将备用液全部上样，弃去；淋洗：5mL水，弃去并压干；洗脱：5mL甲醇，收集并压干。收集洗脱液于40℃氮吹至干，用5mL 95%正己烷-乙酸乙酯溶液溶解残余物，待净化。SPE柱：月旭Welchrom  Silica小柱，规格：500mg/6mL。活化平衡：5mL正己烷；上样：将待净化液全部上样，弃去；淋洗：5mL正己烷，弃去并压干；洗脱：5mL 70%正己烷-乙酸乙酯溶液，收集于具塞玻璃试管中并压干。4 衍生化将上述洗脱液于40℃氮吹至干，加入30μL七氟丁酸酐、70μL丙酮盖紧盖子，涡旋混合30s，于30℃恒温箱中衍生30min，氮吹至干，准确加入1mL正己烷，涡旋混合10s，溶解残余物，供GC-MS分析。5 色谱条件气相色谱条件色谱柱：WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：250℃；升温程序：120℃，保持2min，以15℃/min升温至250℃，再以5℃/min升温至300℃，保持5min；载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；进样方式：不分流进样；恒流模式：1.0mL/min；进样量：1μL。质谱条件电离方式：电子轰击电离源（EI）；电离能量：70eV；传输线温度：280℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；监测方式：449.1/409.1/356.1；溶剂延迟：5min。6 色谱图或者加标回收率结果7 相关产品信息