动物性食品中10种磺胺类药物多残留检测方案(其它色谱仪及分离设备)

动物性食品中10种磺胺类药物多残留的测定GB29694-2013 1、适用范围 本标准适用于猪和鸡的肌肉和肝脏组织中（本实验样品为鸡肝）的磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异恶唑、磺胺异恶唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲基嘧啶单个或多个药物残留量的检测。 参考标准：《GB29694-2013 动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定 》 2、溶液的配置 1、0.1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水溶解并稀释至1 000 mL。 2、0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830 mL，用乙腈溶解并稀释至1 000 mL。 3、洗脱液：取氨水5 mL，用甲醇溶解并稀释至100 mL。 4、0.1 mol/L盐酸溶液：取盐酸0.83 mL，用水溶解并稀释至100 mL。 5、50%甲醇乙腈溶液：取甲醇50 mL，用乙腈溶解并稀释至100 mL。 6、100 μg/mL磺胺类药物混合标准贮备液：精密称取磺胺类药物标准品各5mg，于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100 μg/mL的磺胺类药物混合标准贮备液。-20℃以下 保存，有效期6个月。 7、10 μg/mL磺胺类药物混合标准工作液：精密量取100 μg/mL磺胺类药物混合标准贮备液 1.0 mL，于10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为10 μg/mL的磺胺类药物混合标准工作液。-20℃以下保存,有效期6个月。 3、提取步骤 称取试料5 g±0.05 g，于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20 mL，涡动2 min，4 000 r/min 离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL，重复提取一次，合并两次提取液。 鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液4 mL，于40℃下旋转蒸发浓缩至少于3 mL，转至15mL离心管中。用0.1 mol/L盐酸溶液2 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混合30 s，3000 r/min离心5 min，弃正己烷。再次用正己烷3 mL洗鸡心瓶，转全同一离心管中，涡旋混合30s，3000 r/min离心5 min，弃正己烷，取下层净化液备用。 4、SPE 净化步骤净化 SPE柱：月旭Welchrom® P-SCX规格：60mg/3mL。 活化：甲醇2 mL，0.1 mol/L盐酸溶液2 mL，弃去； 上样：净化液全部上样，弃去； 淋洗：0.1 mol/L盐酸溶液1 mL，50%甲醇乙腈溶液2 mL，弃去； 洗脱：4mL5%氨水甲醇，压干，接收。 洗脱液在40℃下氮吹至干，准确加入1mL0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL，涡旋溶解，过0.22μm有机微孔滤膜，待测。 5、注意事项 加标水平：在5.0g样中加入25μL10 μg/mL磺胺类药物混合标准工作液，加标水平0.05mg/kg，机读数为0.25 μg/mL。 6、色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate®ODS-3(250 mm×4.5 mm,粒径5μm） 流动相：0.1%甲酸+乙腈，梯度洗脱见表1。 流速：1 mL/min。 柱温：30℃ 检测波长：270 nm 进样体积：20μL 表1流动相梯度洗脱条件 时间 min 0.1%甲酸 % 乙腈 % 0.0 83 17 5.0 83 17 10.0 80 20 22.3 60 40 22.4 15 85 30.0 15 85 31.0 83 17 48.0 83 17 7、色谱图及加标回收率结果 图1.10种磺胺类药物混合标品0.25 μg/mL对照图谱 表1、出峰情况 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 分离度 塔板数 min mAU*min mAU % EP EP 磺胺醋酰 6.688 0.5071 4.15 14.41 0.96 8.4 21062 磺胺吡啶 8.45 0.3254 2.16 9.25 0.91 5.84 20511 磺胺甲基嘧啶 9.91 0.3513 2.07 9.98 0.92 12.92 22270 磺胺甲氧哒嗪 13.507 0.2594 1.35 7.37 1.07 12.49 34104 磺胺间甲氧嘧啶 16.848 0.3153 1.95 8.96 0.99 5.71 76337 磺胺氯哒嗪 18.233 0.2918 1.86 8.29 0.97 7.94 90740 磺胺甲基异恶唑 20.095 0.5643 3.87 16.03 0.94 5.94 124508 磺胺异恶唑 21.412 0.2945 2.17 8.37 0.99 9.83 156684 苯甲酰磺胺 23.558 0.2518 1.77 7.15 0.96 2.24 180896 磺胺二甲基嘧啶 24.037 0.3592 2.74 10.2 0.96 n.a. 217747 图2.鸡肝样品图谱 图3.鸡肝样品样加标0.05mg/kg图谱 表2.样加标0.05mg/kg回收率表 峰名称 平均回收率 Rsd（N=2） 磺胺醋酰 75.97% 1.94% 磺胺吡啶 98.86% 3.90% 磺胺甲基嘧啶 94.10% 3.17% 磺胺甲氧哒嗪 95.89% 0.82% 磺胺间甲氧嘧啶 97.65% 1.87% 磺胺氯哒嗪 96.10% 4.88% 磺胺甲基异恶唑 89.06% 2.66% 磺胺异恶唑 89.26% 2.17% 苯甲酰磺胺 88.40% 3.12% 磺胺二甲基嘧啶 96.16% 1.93% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00523-20016 SPE小柱 Welchrom® P-SCX,60mg/3mL,50pk 00837-05006 离心管 Welchrom® 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00837-05003 离心管 Welchrom® 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,灭菌，15mL，25/包 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00275-31043 液相色谱柱 Ultimate®ODS-3,250 mm×4.5 mm,5μm 00826-S152P250 磺胺醋酰标准品 A2S, CAS No.:144-80-9,250mg 00826-S089P250 磺胺吡啶标准品 A2S, CAS No.:144-83-2,250mg 00826-S028P250 磺胺甲基嘧啶标准品 A2S, CAS No.:127-79-7,250mg 00826-S129P250 磺胺甲氧哒嗪标准品 A2S, CAS No.:80-35-3,250mg 00826-S115P050 磺胺间甲氧嘧啶标准品 A2S, CAS No.:1220-83-3,50mg 00826-S029P100 磺胺氯哒嗪标准品 A2S, CAS No.:80-32-0,100mg 00826-S016P250 磺胺甲恶唑(磺胺甲基异恶唑)标准品 A2S, CAS No.:723-46-6,250mg 00826-S085P01G 磺胺二甲异恶唑/磺胺异恶唑标准品 A2S, CAS No.:127-69-5,1000mg 00826-S151P250 苯甲酰磺胺/苯酰磺胺标准品 A2S, CAS No.:127-71-9,250mg 00826-S020P250 磺胺二甲嘧啶标准品 A2S, CAS No.:57-68-1,250mg 声明：除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:上海市松江区明南路85号启迪漕河泾（中山）科技园.紫荆园10号楼 邮编：201600 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号 邮编：321000 Tel:400-810-6969 E-mail:lingyuyu @welchmat.com 适用范围本标准适用于猪和鸡的肌肉和肝脏组织中（本实验样品为鸡肝）的磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异恶唑、磺胺异恶唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲基嘧啶单个或多个药物残留量的检测。 参考标准：《GB29694-2013 动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定 》 提取步骤🔹称取试料5 g±0.05 g，于50 mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20 mL，涡动2 min，4000 r/min 离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL，重复提取一次，合并两次提取液。 🔹鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液4 mL，于40℃下旋转蒸发浓缩至少于3 mL，转至15mL离心管中。用0.1 mol/L盐酸溶液2 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3 mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同一离心管中，涡旋混合30 s，3000 r/min离心5 min，弃正己烷。再次用正己烷3 mL洗鸡心瓶，转全同一离心管中，涡旋混合30 s，3000 r/min离心5 min，弃正己烷，取下层净化液备用。 SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® P-SCX规格：60mg/3mL。活化：甲醇2 mL，0.1 mol/L盐酸溶液2 mL，弃去；上样：净化液全部上样，弃去；                   淋洗：0.1 mol/L盐酸溶液1 mL，50%甲醇乙腈溶液2 mL，弃去；洗脱：4mL5%氨水甲醇，压干，接收。洗脱液在40℃下氮吹至干，准确加入1mL0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL，涡旋溶解，过0.22μm有机微孔滤膜，待测。 色谱条件色谱柱：月旭Ultimate® ODS-3(250 mm×4.5 mm,粒径5μm）；流动相：0.1%甲酸+乙腈，梯度洗脱见表1；流速：1 mL/min；柱温：30℃；检测波长：270 nm；进样体积：20μL。 表1流动相梯度洗脱条件色谱图及加标回收率结果表1、出峰情况表2.样加标0.05mg/kg回收率表相关产品信息