食用油脂中辣椒素检测方案(液相色谱仪)

图B.1合成辣椒素MRM色谱图 图B.2天然辣椒素MRM色谱图 图B.3二氢辣椒素MRM色谱图 原理试样经二氯甲烷溶解，氢氧化钠水溶液提取酸化后，过固相萃取柱净化，采用液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。试剂材料水为GB/T 6682规定的一级水。乙腈（CH3CN）：色谱纯。甲醇（CH3OH）：色谱纯。甲酸（CH2O2）：质谱级。二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。氢氧化钠（NaOH）：分析纯。浓硫酸（H2SO4）：98%，分析纯。标准溶液标准储备液：分别称取天然辣椒素、合成辣椒素、二氢辣椒素标准品0.1 g（精确至0.000 1 g），用甲醇溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为1 mg/mL。贮存于4 ℃冰箱中，有效期3个月。混合标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液适量于容量瓶中，用甲醇将其稀释成含量分别为0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL的标准系列混合工作液。临用时配制。仪器和设备高效液相色谱-液质联用仪：配有电喷雾离子源。C18 固相萃取（SPE）小柱：1000 mg，6 mL，或等效SPE柱。超声波清洗器。分析天平：感量为0.000 1 g。离心机：转速≥4000 r/min。涡旋混合器。试样制备准确称取1 g（精确至0.000 1 g）样品于10 mL具塞塑料试管中，加入1 mL二氯甲烷，再加入3 mL 2%氢氧化钠溶液，涡旋提取10 min，4000 r/min离心10 min，取上层水相；残留有机相再用3 mL 2%氢氧化钠溶液重复提取一次，合并水相，再用稀硫酸溶液调节pH至2-3之间后进行固相萃取操作。C18 SPE小柱预先用3 mL乙腈淋洗3次，再用3 mL纯水淋洗2次进行活化，然后将调节完pH值的水相提取液加入小柱，控制流速至每秒1-2滴，待全部溶液通过SPE小柱后，以3 mL超纯水淋洗2次，弃去流出液，最终以3 mL乙腈洗脱2次。乙腈洗脱液50℃氮吹近干，用0.5 mL甲醇溶解后过微孔滤膜（0.22 μm，有机相），过滤液置于进样小瓶内衬管中供LC-MS/MS测定。色谱条件色谱柱：C18柱，1.8 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当者；流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.2.1），B为0.1%甲酸乙腈溶液（3.2.2）流速：0.3 mL/min；柱温：40 ℃；进样量：2 μL。结果此方法的检出限为：合成辣椒素0.05 μg/kg；天然辣椒素0.03 μg/kg；二氢辣椒素0.02 μg/kg。此方法的定量限为：合成辣椒素0.2 μg/kg；天然辣椒素0.1 μg/kg；二氢辣椒素0.1 μg/kg。