免疫细胞（T细胞、NK细胞、B细胞、DC细胞等）中细胞状态，类型，分化潜力检测方案(荧光显微镜)

培养皿类型 尼康细胞解决方案 “细胞解决方案” 是一种开放性、创新性的定制服务 尼康提供全面的细胞成像解决方案，包括硬件设备，图像分析和数据评估，并结合咨询来解决您的成像和细胞培养问题。这些定制解决方案由成像专家团队设计，他们在世界领先的成像公司拥有数十年的综合经验。我们的团队可以定制适合您特定细胞类型和培养方法的成像算法，从而创建一个专门的系统，使用您自己的质量标准评估细胞质量。 尼康为细胞领域中的挑战性问题提供三大解决方案 细胞品质评价·Cell quality evaluation package(QEP) 运用相差图像进行非侵入性细胞评价对细胞培养的整个过程进行品控细胞培养技能的可视化与数据化寻找和保持最优化的细胞培养条件 药物开发支持 Drug discovery support assay 基于活细胞成像的高通量药物筛选 对细胞疾病模型进行时间序列监控 细胞筛选平台 Cell sorting platform (Beacon) 运用光电位移技术，极大缩短开发细胞系所需时间 与传统技术相比， Beacon可将特定细胞系的开发周期缩短为几天 成像设备 BioStation CT BioStudio-T 尼康BioStation CT可使用相差和荧光对细胞进行长期延时成像 尼康BioStation CT是一种先进的自动化细胞培养观察装置，专门用于干细胞研究。尼康的BioStation CT非常适合活细胞成像，在显微图像采集过程中可保持稳定的环境。 Nikon BioStation CT ①存储架 ②观察台 活细胞分析 由于其低诱导效率， iPS细胞集落或分化细胞通常难以检测。 BioStation CT通过整孔扫描成像能够清楚地检测iPS细胞集落或分化细胞。 先进的图像分析技术有助于活细胞筛选，定量评估和更好地研究干细胞重编程/分化过程和疾病建模。 稳定的培养条件 用户可以使用各种培养皿/板(孔板，培养皿，培养瓶) 温度、湿度、CO，浓度和O，浓度由精确的传感器和反馈系统控制。 BioStation CT采用了一个机械臂运输装置，可在加热和加湿的培养区域内提供稳定的容器运输。观察装置中的高精度电动载物台可对所有类型培养皿/板自动成像选定的整个区域。 内部温度由嵌入培养箱六面的面板加热器直接控制，实现高度精确的温度维持。 高分辨率成像 可对全盘高分辨扫描图像的局部放大，实现监测追踪由单细胞培养至单克隆的全过程 荧光成像 以长寿命低能耗的LED照明作为光源。最高可搭载5种荧光滤块。最高可实现3通道同时成像。可实现对荧光蛋白例如CFP， YFP，Kusabira Orange， DsRed， Texa：Red and Cy5 的高效观测。 Day 2 of culture Day 3 of culture Day 4 of culture Day 5 of culture Day 6 of culture Day 7 of culture 细胞培养观察系统： BioStation CT ·集活细胞成像与分析为一体的软件 ·全自动图像采集 ·全自动培养板/皿移动 精准温控 ·适用多种类型培养容器 放大倍数： 2x，4x， 10x， 20x， 40x 物镜： 4x，10x 相差成像：高亮度红色LED照明，自动相差环调整荧光成像： LED 438 nm， 472 nm， 白光照明(多达5种荧光滤光块可选) 通过Z轴扫描自动确定焦面 细胞成像设备BioStudio-T 紧凑型活细胞成像显微镜，，专为细胞生产设施而设计。 适用于大多数培养箱内，并与各种灭菌 方法兼容，包括蒸汽H，O，(过氧化氢)。 兼容各种灭菌技术 BioStudio-T具有极佳的防水和耐化学腐蚀设计。 可以使用过氧化氢气体和/或UV灭菌方法对这种易于清洁的显微镜进行灭菌。 在大图像采集中具有无与伦比的灵活性 兼容各种多孔板和其他培养皿。 适用活细胞 在图像采集期间，显微镜载物台完全静止，消除了对样品的不必要的机械干扰。内部光学器件移动以获取不同XY和Z位置的图像。适用于活细胞的红色LED用于样品照明，仅在图像采集期间打开。 快速扫描和拼大图 在几分钟内扫描整个培养板、盘或瓶中的全部细胞生长区域。自动拼合高对比度相差图像以生成用于无标记分析的高分辨率数据。 细胞成像设备BioStudio-T 适用于多种灭菌手段包括汽化双氧水高度灵活的拼大图成像适用活细胞●操作界面友好 观察模式：相差成像照明：红色LED 放大倍数： 1.6x， 4x， 8x 可置于培养箱中 适用多种培养皿，板，瓶等 示例：相差图像 >成像设备： BioStudio-T >放大倍数：4x >培养盘类型：6孔板 细胞： MSC (UE7T-13) 图像分析软件：CL-Quant 可自动识别细胞、进行机器学习的图像分析软件-：—CL-Quant 可对相差图像或荧光图像进行细胞自动识别 可定制专门的分析模块，并根据实际成像和分析需求进行优化. 适用于对活细胞成像的无损成像及图像分析，适用于 BioStation CT 及BioStudio-T. 附加模块：简单易用 基础软件 附加模块 细胞类型 附加模板选项 图像类型 1 通用 CellConfluencv 相差 2 iPS/ES细胞 hPSC Colony Count 相差 3 hPSC Colony Coverage Ratio 相差 4 hPSC Colony Area Package 相差 5 神经细胞 Neurite Length 相差 6 Neurite Length 荧光 7 NeuronalCell/ClusterCount 相差 8 NeuronalCell/ClusterCount 荧光 NIKON CORPORATIONConfidential Confidential 细胞治疗是指将正常或生物工程改造过的人体细胞移植或输入患者体内，新输入的细胞可以替代受损细胞、或者具有更强的免疫杀伤功能，从而达到治疗疾病的目的。目前的细胞治疗方式主要是免疫细胞治疗和干细胞治疗两种。免疫细胞治疗，是指在体外对某些类型的免疫细胞（T细胞、NK细胞、B细胞、DC细胞等）进行针对性的处理后再输注回人体内，使其表现出肿瘤细胞杀伤，病毒清除等功能。经过一段时间的发展，其中CAR-T（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法）细胞疗法已成为免疫细胞治疗中的热点。干细胞治疗：干细胞是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的多能细胞，被称为“万用细胞”。成年人体内数百种不同的细胞类型是从几个相同的干细胞开始形成的。在此不断分化的过程中，细胞的分化潜力逐渐受到限制，从而导致其形态和功能发生变化。按照分化潜能，干细胞可分为三大类：全能干细胞、多能干细胞、单能干细胞。干细胞疗法就是把健康的干细胞移植到人体内，从而修复病变细胞或再建正常的细胞或组织。现在有关干细胞治疗的研究已经成为基础科学中最为引人关注的领域，干细胞技术及开发近年来一直受到国际资本市场的热捧。分析人士认为，“细胞治疗”将代替“手术及药物治疗”，细胞治疗时代即将到来。而且其市场预期的增长也是潜力巨大。但是对于细胞治疗这个新领域来说，机遇与挑战并存，目前生产流程很难有统一标准，如何评价细胞状态，类型，分化潜力等等以及质控等方面都面临巨大挑战。现在尼康公司提供的细胞品质评价系统（QEP: quality evaluation package），就是针对细胞治疗过程中对细胞状态进行评估的一个完整的服务项目。QEP提供从硬件（长时程非入侵细胞成像）到软件（细胞状态的自动化评估）以及开放式的定制化咨询及服务。那么现在一点点从细节上介绍QEP。首先是硬件方面包括两套产品。全自动的高通量细胞成像系统Biostation CT，兼容大部分实验室常用的培养器皿（包括各型号多孔板，培养皿及培养瓶等等）。通过仪器内部的高灵敏机械手臂，Biostation CT实现高通量的样本操作。以35mm培养皿为例，CT内部有30个培养仓，每个培养仓可以容纳5个35mm培养皿，机械手臂根据实验设定在培养仓和显微镜区域之间传送样本进行高通量成像。CT内部就是科研级培养箱控制环境，可精密维持细胞的生长环境（温度，湿度，CO2浓度）。其提供5通道荧光成像及相差成像（非入侵成像）。另外一套产品为Biostudio T，相对于Biostation CT来说，这是一款更小巧的仪器，其可以长期置于培养箱内部工作，通过外接电脑进行控制的全自动仪器，提供非入侵的相差成像模式。仪器防水防化学侵袭，可以使用过氧化氢汽化进行彻底的消毒。图像数据处理方面由尼康的软件CL-Quant来完成。此软件是功能强大的非入侵图像处理软件，可进行定制化分析编程。其应用领域涉及细胞品质评价（cell quality evaluation）,药物研发支持（drug discovery support）和细胞分选平台（cell sortingplatform）三大类。可做单细胞追踪、集落追踪（colony）、细胞分化过程、细胞类型判定、细胞融合度、细胞密度分析、存活测定细胞计算、神经细胞计数、神经细胞突触长度等等。当然，对于图像数据的分析及处理，不同的实验室会有不同的要求，所以尼康的QEP产品提供开放的定制化软件分析服务，以满足图像数据的分析需要。例如，对于iPS细胞集落进行比较，我们可以通过其致密度入手进行分析，从而对细胞集落进行分类比较及筛选。也可以对iPS细胞集落的形态进行比较（图7，iPS ch），由此来判断哪些是iPS细胞哪些是非iPS细胞。这些分析是尼康和实验室科研人员之间的沟通合作得到的成果。由科研人员提出专业的要求，尼康提供专业的图像分析处理服务，再由科研人员进行专业验证并使用别的实验数据进行对比，最终我们得到了定制化软件的成功应用。谢谢阅读，更多更详细的QEP模块介绍及解释会不断推出。