动物性食品中磺胺类药物多残留的测定检测方案(固相萃取仪)

动物性食品中磺胺类药物多残留的测定GB 29694-2013 适用范围 适用于动物性食品中磺胺类药物的测定（该实验选用基质为猪肉） 参考标准：《GB 29694-2013 食品安全国家标准 动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法》 溶液的配置 标准储备液：分别称取 1mg磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺二甲氧哒嗪，用甲醇溶解并稀释至10mL，溶度为0.1mg/mL 磺胺氯哒嗪标准储备液：取 1mL0.1mg/mL标准品，用甲醇溶解并稀释至10mL，溶度为0.01mg/mL，作为磺胺氯哒嗪的储备液。 磺胺类药物混合标准工作液：取0.1mL磺胺甲基嘧啶标准储备液、磺胺二甲基嘧啶标准储备液、磺胺甲氧哒嗪标准储备液、磺胺间甲氧嘧啶标准储备液、磺胺异恶唑标准储备液、磺胺二甲氧哒嗪标准储备液和1mL磺胺氯哒嗪标准储备液，用甲醇定容至10mL，即0.001mg/mL磺胺类药物混合标准工作液。 0.1mol/L盐酸溶液：0.182mL盐酸用水溶解并稀释至50mL。 0.1%甲酸水：取1mL甲酸，用水溶解并稀释至1000mL。 0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。 洗脱液5%氨水甲醇：5mL氨水，用甲醇溶解并稀释至100mL。 提取步骤 猪肉（搅碎） 5g（精确至0.05g）样置于50mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯， 涡旋混匀1min，超声10min，4000r离心5min，移取上清液，再次加入20mL乙酸乙酯，涡旋混匀1min，超声10min，4000r离心5min，合并上清液至50mL旋转蒸发瓶中，加入4mL的0.1mol/L盐酸溶液，混匀，40°旋蒸至3mL。 移取上清液至15mL离心管中，再用1mL0.1mol/L盐酸溶液润洗旋转蒸发瓶，转入15mL离心管，再用3mL正己烷润洗旋转蒸发瓶后转入同一15mL离心管，振荡混匀，3000r离心5min，弃去上层正己烷，再用3mL正己烷润洗旋转蒸发瓶后转入同一15mL离心管，振荡混匀，3000r离心5min，弃去上层正己烷，水相待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom®P-SCX，规格：60mg/3mL 活化：2mL甲醇，2mL0.1mol/L盐酸溶液，弃去 上样：待净化液全部上样，弃去 淋洗：1mL0.1mol/L盐酸溶液，2mL甲醇，弃去 洗脱：5mL5%氨水甲醇，压干收集。 复溶：40℃氮吹至近干，加0.1%甲酸乙腈溶液定容至1mL，过0.22μm有机滤头，上机检测。 注意事项 加标水平：在5g样中精确加入0.2mL的0.001mg/mL磺胺类药物混合标准工作液，加标水平为0.04mg/kg，机读数为0.2mg/L。 色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate®ODS-3 4.6*250mm，5μm 流动相：A-乙腈，B-0.1%甲酸水（梯度） 流速：1.000mL/min 柱温：30℃ 进样量：20μL 检测波长：270nm 时间 %A %B 0.000 17.0 83.0 5.000 17.0 83.0 10.000 20.0 80.0 22.300 40.0 60.0 22.400 90.0 10.0 30.000 90.0 10.0 31.000 17.0 83.0 48.000 17.0 83.0 7、色谱图或者加标回收率结果 图1、磺胺类药物混合0.2μg/mL图谱 峰名称 保留时间 峰面积 峰高 相对峰面积 拖尾因子 分离度 塔板数 min mAU*min mAU % (EP) (EP) 磺胺甲基嘧啶 9.442 0.273 1.715 13.20 1.14 8.89 22413 磺胺二甲基嘧啶 11.762 0.264 1.539 12.76 1.13 3.81 30104 磺胺甲氧哒嗪 12.798 0.300 1.737 14.49 1.07 13.63 34726 磺胺间甲氧嘧啶 16.245 0.426 2.890 20.60 1.04 6.34 78107 磺胺氯哒嗪 17.715 0.236 1.607 11.42 1.10 14.95 93097 磺胺异恶唑 20.972 0.270 2.090 13.03 1.09 13.63 168166 磺胺二甲氧哒嗪 23.655 0.300 2.552 14.50 0.98 n.a. 247276 图2、 猪肉空白过柱图谱 图3、猪肉样加标0.04mg/kg图谱 表1.加标回收率表 名称 加标水平mg/kg 平均回收率% RSD%（n=2） 磺胺甲基嘧啶 0.4 91 3.68 磺胺二甲基嘧啶 94 2.45 磺胺甲氧哒嗪 88 0.92 磺胺间甲氧嘧啶 92 3.45 磺胺氯哒嗪 82 3.47 磺胺异恶唑 73 4.18 磺胺二甲氧哒嗪 89 2.04 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00523-20016 Welchrom SPE柱 Welchrom® P-SCX,60mg/3mL,50pk 00837-05002 15mL螺口尖底离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，15mL，50/包 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00275-31043 液相色谱柱 Ultimate®ODS-3,4.6×250mm,5μm 00802-02201 针头式过滤器 进口NY,13mm*0.22μm,100pk 00826-S028P250 磺胺甲基嘧啶标准品 CAS No.:127-79-7,250mg 00826-S020P250 磺胺二甲嘧啶标准品 CAS No.:57-68-1,250mg 00826-S129P250 磺胺甲氧哒嗪标准品 CAS No.:80-35-3,250mg 00826-S115P050 磺胺间甲氧嘧啶标准品 CAS No.:1220-83-3,50mg 00826-S029P050 磺胺氯哒嗪标准品 CAS No.:80-32-0,50mg 00826-S085P100 磺胺二甲异恶唑/磺胺异恶唑标准品 CAS No.:127-69-5,100mg 00826-S059P250 磺胺间二甲氧嘧啶/磺胺地索辛/磺胺二甲氧哒标准品 CAS No.:122-11-2,250mg 声明:除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号TeL:400-810-6969 邮编：321000 E-maiL:Lingyuyu@weLchmat.com No.1 适用范围适用于动物性食品中磺胺类药物的测定（该实验选用基质为猪肉）。参考标准：《GB 29694-2013 食品安全国家标准 动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法》。 No.2 SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom®P-SCX，规格：60mg/3mL；活化：2mL甲醇，2mL0.1mol/L盐酸溶液，弃去；上样：待净化液全部上样，弃去；淋洗：1mL0.1mol/L盐酸溶液，2mL甲醇，弃去洗脱：5mL5%氨水甲醇，压干收集；复溶：40℃氮吹至近干，加0.1%甲酸乙腈溶液定容至1mL，过0.22μm有机滤头，上机检测。 No.3 色谱条件色谱柱：月旭Ultimate®ODS-3 4.6*250mm，5μm；流动相：A-乙腈，B-0.1%甲酸水（梯度）；流速：1.000mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL；检测波长：270nm。No.4 色谱图或加标回收率结果No.5 相关产品信息