细胞中抗原特异Ｔ细胞检测方案(流式细胞仪)

emiltenyibiotec.com/mq16 MAcS Miltenyi Biotec MACSQuant@116流式细胞分析仪 在自动化流式细胞仪中探索更多色彩应用 更多颜色更多应用 MACSQuant@16流式细胞分析仪旨在扩展MACSQuant系列流式细胞分析仪的自动化性能，便于24管或96孔板的全自动化数据采集。仪器设计紧凑，适合基础研究和高级免疫监测应用。MACSQuant 16流式细胞分析仪为用户提供了灵活性和定制功能，可满足现代实验室越来越高的需求。 自动化 上样，导入实验设置，然后由MACSQuant 16流式细胞分析仪完成染色、数据采集和分析。 扩展的荧光通道 14个荧光通道可选，获得更详实的数据，所需的平均样本体积减少40%。 灵活性 只需按一下按钮，即可立即在试管和反应板之间轻松切换。 简单 简单直接的实验设置和操作，最大程度地缩短了学习时间。 多仪器间校准 利用我们的Smart Gain软件技术，用户可在不同实验室同类机器上进行数据协调，确保可重复性。 TO 4ou To. 0734774 QA4 91 LMX 8244 简单 自动化 更多颜色 MACS1 Quant 扩展的荧光性能，享有盛誉的仪器 随着研究问题变得越来越深入， MACSQuant@ 16流式细胞分析仪可以帮助您轻松完成数据采集。利用扩展的荧光性能，您可以最大限度地增加每个样本可检测的参数数量。荧光通道可提供405、488和640 nm激发激光，覆盖各种染料和 荧光蛋白，使您可以获得更多颜色的结果。采用MACSQuant 16，您可以扩展免疫表型应用，覆盖各种细胞类型，包括T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞及组织特异性神经细胞和干细胞群。这些新的可能性对您的研究而言意味着什么? SSC 405/10nm V1 450/50 nm VioBlue° V2 525/50 nm VioGreen V3 579/34 nm BV 570 V4 615/20 nm BV 605 V5 667/30nm BV 650 FSC 488/10nm B1 525/50nm FITC，GFP B2 579/34 nm PE B3 615/20 nm PE-Vio°615 B4 667/30nm PerCP B5 725/40nm PerCP-Vio 700 关键特性 三 大屏显示器：15.6"显示器，简单的触摸屏操作 机械臂式进样针： 用于样本混匀、处理和自动标记 集成式MACS@磁性细胞富集功能： 重点关注目的细胞，使您的数据更加详实 通用试剂架： 灵活的玻璃瓶或塑料管自动标记选项 微型取样器： 从单个试管、多个试管到96孔板实现无缝取样 全自动流式细胞分析，无需手动标记 MACSQuant@16流式细胞分析仪通过整合 MACS@MiniSampler Plus， 能够利用自动化移液臂实现样本的自动标记。全新设计的通用试剂架使您可以将试剂从5 mL玻璃瓶或 1mL塑料管中移取至试管或反应板中。 实现应用自动化，无需再担心差异利用可靠的机械臂，减少移液错误。您唯一要做的就是在适用的情况下，设置试剂的滴度、孵育时间和样本稀释度!仪器可以自动标记并制备您的样本。 重点关注您的目的细胞 采用集成式 MACS@磁性富集柱，您可以富集靶细胞群，对稀有细胞亚群进行更深入的分析。在进行流式细胞分析前去除不相关细胞群，进一步提高分析的稳定性。 利用MACSQuant 16流式细胞分析仪，获得更多信息更多通道、更多数据、更多亚群 利用FlowlogicTM 软件对PBMC亚群进行 多参数分析获得更详实的数据变得极其简单。例如，我划设计了12色检测设门策略，用于分析外周血单核细胞(PBMC) 样本中的T细胞、B细胞、NK细胞、树突状细胞和髓细胞亚群。利用FlowlogicM 分析软件，还提供自动设门、图像和报告生成等特性，并生成可立即使用的高质量数据。 更 深 FSC U人 ' 了 FSC 解 您 的 co 二细 工c 胞 10 s 群 10 利用紫色侧向散射进行纳米颗粒分析 使用 MACSQuant16 流式细胞分析仪的紫色侧向散射光学元件进行小颗粒分析 900 nm 500 nm 300 nm 240 nm 200 nm 160 nm 100 nm Noise 统一的仪器设置，一致的结果 MACSQuantifyTM 软件的Smart Gain技术获得稳定且可重复的结果，不因日期、仪器和操作人员而改变。利用MACSQuantify软件的Smart Gain技术，您可以将数据从一台仪器转移至另一台仪器上，同时传递所有必需的信息，以确保设置相同。这样，MACSQuant@操作系统可以随时随地生成相当标准化的结果。 遵循21 CFR Part 11的要求通过可选的21 CFR Part 11配置，您可以确保数据符合监管机构的提交标准，其中包括： 细胞治疗领域的可靠搭档 minbe 要实现最大的实验可重复性不仅仅取决于流式细胞仪本身。为获得稳定的结果，美天旎提供了包括专门的试剂在内的全套流式细胞术解决方案。我们可帮助您确认实验差异是由样本而非不可靠的抗体或仪器造成的。 REAfinityTM 重组基因工程改造抗体-专为流式细胞术而生 美天旎已推出了 REAfinityTM 系列产品——重组基因工程改造抗体，相比小鼠或大鼠单克隆和多克隆抗体，可提供出众的批次间稳定性和纯度。我们的重组技术无需进行FcR阻断，只需一种同型对照即可分析，并生成无更多背景信号的高质量数据，节省用于实验设置的时间。了解更多信息，请登录：www.miltenyibiotec.com/reafinity Vio@染料-一—更明亮的流式细胞染料结合使用我们专利的 Vio和VioBrightM染料，您可以获得出众的平均荧光强度和高染色指数。它们是市场上亮度最高的染料，为多色流式实验提供更多选择。更多信息，请登录：www.miltenyibiotec.com/vio 即用型试剂盒 使用美天旎预先滴定的即用型试剂盒，节省宝贵的实验设置时间和分析成本。我们的试剂盒已经过验证，结合MACSQuant16自动化标记性能和MACSQuant Express mode——真正实现全自动化分析。您唯一要做的就是做好实验设置，即可获得经过全面分析的数据。 定制方案 美天旎的定制抗体设计服务使研究人员可以从个性化的流式细胞分析方案中获益。该服务包括纯化功能级抗体、单色和多色标记抗体以及多种抗体配色方案。更多信息，请登录： www.miltenyibiotec.com/customab MACSQuant在线支持 ·通过 MACSQuant Support端口提供在线支持 ·由我们的专家实时为您解答 随时随地提供支持 应用和仪器支持 11 ·技术和现场应用支持，进行分析设计并给出产品建议 ·定制自动化和 express mode 开发 仪器培训 ·在各地区的美天旎 MACSAcademy 进行培训 ·现场培训和分析开发 ·在线应用资源 服务 ·全方位服务方案 ·遍布全球的现场服务团队 德国美天旎生物技术有限公司 上海办事处 Tel：(021)6235 1005 北京办事处 广州办事处上海浦东新区张衡路1077号 北京市东城区朝阳门内大街南竹杆 中国广州市越秀区环市东路371-375号4楼 胡同2号银河SOHO D座50723室 广州世界贸易中心大厦南塔2414室Tel：(010)6410 7101 Tel：(020)2237 8592免费电话：800 820 2606 免费电话：800 820 2606 免费电话：800 820 2606 E-mail：macs@miltenyibiotec.com.cn E-mail：macs@miltenyibiotec.com.cn E - mail：macs@miltenyibiotec.com.cn Miltenyi_MACS ( M iltenyi Biotec provides products and services worldwide. Visit www.miltenyibiotec.com/local to find your nearest M iltenyi Biotec contact. ) ( U nless otherwise specifically indicated， Miltenyi Biotec products and services are for research use only and not for therapeutic or diagnostic use.autoMACS，gentleMACS， M ACS， MACSQuant， and Viscover are either registered trademarks or trademarks of Miltenyi Biotec GmbH. Copyright 2015 Miltenyi Biotec GmbH. All righ t s reserved. ) 抗原特异性T细胞(Antigen-specific T cells)是研究免疫系统的独特工具。一但经外来病原体或肿瘤侵入活化免疫系统，抗原特异性T细胞通过自身T细胞受体 (T cell receptor, TCR)识别肿瘤抗原，具有选择性识别肿瘤抗原、分裂增殖和持续提供长期免疫保护的能力，在治疗病毒感染疾病和恶性肿瘤方面具有许多潜在的益处；因此在肿瘤免疫治疗与疫苗开发上为一重要的细胞研究方向。  抗原特异性T细胞活化过程。T细胞经由细胞受体 (TCR) 识别多肽抗原后活化特定细胞表面标记物 (CD25, CD137, CD69 or CD154), 释放细胞因子与克隆扩增成为抗原特异性T细胞。T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白一样，是由多个基因片段的基因重组产生的。这种重组产生了大量的T细胞，每一个都针对一种独特的多肽抗原 (peptide antigen)。T细胞对病毒、细菌、肿瘤细胞以及来自正常组织的多肽（在自身免疫性疾病中）有反应。每个多肽的特异性只在循环T细胞的一小部分中被发现，这使得抗原特异性反应的研究变得困难。如何检测抗原特异性T细胞？1细胞稀有性分析抗原特异性T细胞最困难的挑战来自于细胞的稀有性，这是因为细胞来源自不同的个体捐赠者以及多样的特异性抗原所活化后的T细胞，抗原特异性T细胞仅占所有T细胞群体里0.1 – 0.001%，属于稀有细胞群 (低频细胞)。在实验研究初期，也会因为起始材料来自不同组织来源(如肾或外周血)增加分离细胞的困难度。2不同T细胞类型，检测方法不同 CD4+T细胞识别MHC II主要组织相容性复合体，CD8+T细胞则识别MHC I主要组织相容性复合体。如前所述，因不同的MHC在选择检测方法上也有所限制。3检测细胞表面标记物与细胞因子的选择策略细胞表面标记物表现量因抗原递呈活化T细胞时间会有不同。CD69属早期活化的标记物(3-15小时)，但不仅表现在活化后的T细胞，也可在其它细胞上发现。CD137属早期活化的调节性T细胞(Treg)标记物 (4-6小时)，但可作为CD8+conventional T cell (Tcon)标记物 (16-24小时)。CD154则可作为CD4+Tcon细胞标记物(4-12小时)。同样地，细胞因子的释放也会随细胞种类不同而有不同图谱。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集抗原特异性CD4+T细胞深入分析埃博拉病毒疫苗诱导的循环滤泡T辅助细胞滤泡辅助T细胞(Follicular T helper cells, Tfh)为一T细胞亚群，它们被认为是B细胞最主要的辅助细胞，是淋巴组织中重要的效应T细胞亚群之一。Tfh主要的识别标记物CXCR5，是淋巴细胞进入淋巴组织B细胞室所必需的一种趋化因子受体，而其他标记如CXCR3和CCR6则被用来鉴定Tfh亚群。外周血PBMC经由埃博拉病毒片段(ZEBOV-GP)诱发APC并活化滤泡辅助T细胞(Tfh)。利用MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集抗原特异性CD4+T细胞，再针对抗原特异性T细胞表面标记物(CD154, CXCR3, CXCR5)进行分析。滤泡辅助T细胞经埃博拉病毒片段刺激后，经预富集功能，CD4+T细胞可由2.57%提升至51.12%，增加低频细胞可分析数量，提高实验数据可信度。最终分析获得抗原特异性CXCR5+細胞亚族群 (cTfh1)细胞、CCR6 (cTfh17)与cTfh2细胞表现量。滤泡辅助T细胞经埃博拉病毒片段刺激后，经预富集功能，CD4+T细胞可由2.57%提升至51.12%，增加低频细胞可分析数量，提高实验数据可信度。滤泡辅助T细胞 流式细胞分析的圈门策略美天旎MACSQuant® 流式细胞分析仪使用预富集功能提高稀有细胞检测灵敏度MACSQuant® 流式细胞分析仪内建MACS磁力柱装置与预富集模块功能，可对低频细胞在分析前进行预富集，高灵敏度地检测稀有细胞，极大的提高了流式分析稀有细胞的能力。MACSQuant® 流式细胞分析仪预富集后分析流程将目的稀有细胞以抗体磁珠标记，再对其他分析标记物进行不同多色荧光标记(Sample treatment)，直接上样流式细胞仪(Load sample)。先使用预富集模块功能，在内建的磁力柱上富集目的稀有细胞 (MACS enrichment)，随后进行细胞分析(Flow analysis)，不因过多操作流程而损失细胞，同时获得更多分析数据。