化妆品中二苯酮-5检测方案(液相色谱仪)

「应用纪要]WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要] 化妆品中15种防晒剂的快速分离 吴昌威1、张琳2、杨凯琳2、倪凯栋2 1深圳市计量质量检测研究院。?沃特世科技(上海)有限公司 应用优势 流动相体系简单，于液相系统更加友好。 15种防晒剂实现了完全分离，尤其改善了在传统HPLC方法上分离度不够的苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮、对氨基苯甲酸三种防晒剂的分离。 Empower 3色谱管理软件，具有完美的法规依从性，能够快速得到分离度的定量的标准曲线。 沃特世解决方案 Waters ACQUITY UPLCH-Class系统配备PDA检测器 Waters Empower 3色谱管理软件(英文版) 关键词 超高效液相色谱；防晒剂；快速分析；化妆品 实验部分 实验仪器： Waters ACQUITY UPLC H-Class 数据处理软件： Waters Empower 3色谱管理软件(英文版) 实验参数： 液相系统： Waters ACQUITY UPLC H-Class 色谱： ACQUITY UPLC BEHC.. 1.7 pm 2.1x100mm Column 流动相： A： 0.1%磷酸水溶液。 B：甲醇：异丙醇=80：20 柱温： 45℃ 流速： 0.3mL/min 进样体积： 2uL 检测波长： 311nm 流动相梯度： Time (min) Flow (mL/min) %A %B Curve Initial 0.300 95.0 5.0 Initial 2.00 0.300 40.0 60.0 6 4.00 0.300 30.0 70.0 6 8.50 0.300 20.0 80.0 6 9.00 0.300 5.0 95.0 6 9.10 0.300 0.0 100.0 6 16.00 0.300 0.0 100.0 6 结果与讨论 15种防晒剂的分离 本实验采用ACQUITY UPLC H-Class对15种防晒剂进行分离测定，所有化合物均能够得到很好的分离，如下图1所示，各组分的分离度都大于1.5，即使是分离难度较大的苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮、对氨基苯甲酸也实现了完全分离。 0.80 0.700-0.60-0.50-20.400.30-0.20- 0.10 0.00+ Name Retentioi Time(min) AreapV*sec) %Area Height(pV) blank0621 Resolution 1 1.874 389542 2.16 1661854 389542.448 2 3.059 210699 1.17 92752 210699.100 20.95 3 3.327 693866 3.85 331515 693866.457 5.17 4 5.341 986844 5.47 456509 986843.865 36.83 5 7.095 2150779 11.93 755597 2150778.989 26.82 6 7.514 538851 2.99 178265 538851.275 5.46 7 9.179 822888 4.56 236461 822887.911 19.92 8 9.450 1730876 9.60 488086 1730876.001 3.00 s9 9.680 1742482 9.66 426084 1742482.395 2.34 10 9.915 1910554 10.59 520806 1910554.032 2.36 12 10.217 259756 1.44 66270 259755.773 3.36 11 10478 1911897 10.60 808484 1911896.847 3.51 12 10.632 1701545 9.43 829119 1701544.995 2.74 13 12.017 325665 1.81 171557 325665.344 28.69 14 13.275 1018672 5.65 357393 1018672.077 21.61 15 14.354 1639512 9.09 289553 1639511.566 9.371 图1.15种防晒剂分离色谱图。 方法学考察 检出限与定量限 将15种防晒剂混标溶液稀释不同倍数，确定检出限与定量限，见表2。结果表明，本方法的检出限与定量限为原规定的20-100倍，完全符合法规要求。 保留时间 实际 规定 实际 规定 序号 (min) 防晒剂名称 检出限 检出限 定量限 定 定量限 (ng) (ng) (ng) (ng) 1 1.87 苯基苯并咪唑磺酸 0.04 2 0.12 7 2 3.06 二苯酮-4和二苯酮-5 0.13 3 0.80 10 3 3.32 对氨基苯甲酸 0.02 2 0.04 7 4 5.34 二苯酮-3 0.07 3 0.13 10 5 7.09 对甲氧基肉桂酸异戊酯 0.07 3 0.13 10 6 7.51 4-甲基苄亚基樟脑 0.06 2.5 0.24 8 7 9.18 PABA乙基己酯 0.10 3 0.25 10 8 9.45 丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷 0.15 12 0.40 40 9 9.68 奥克利林 0.05 5 0.13 17 10 9.91 甲氧基肉桂酸乙基己酯 0.05 3 0.13 10 11 10.48 水杨酸乙基己酯 0.20 20 0.50 67 12 10.63 胡莫柳酯 0.20 20 0.50 67 13 12.02 乙基己基三嗪酮 0.03 2 0.10 7 14 13.27 亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚 0.07 5 0.20 17 15 14.35 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 0.07 5 0.20 17 表2.15种防晒剂的检出限与定量限。 重现性 将15种防晒剂混标溶液连续进样6针，考察进样的重现性，结果见图2和表3.实验结果显示，绝大多数的峰面积和保留时间的RSD%小于1%，重现性良好。 图2.15种防晒剂重现性结果图。 加标回收率 选用不含15种防晒剂的空白样品作为基质，加入已知浓度的混标溶液，充分混合均匀，超声30min，稀释，过滤，进行加标回收率实验，结果得出绝大多数防晒剂的加标回收率在90%-105%之间。 序号 保留时间 (min) 防晒剂名称 线性方程 r2 RSD% 加标 回收率% 1 1.87 苯基苯并咪唑磺酸 Y=26400X-1220 0.9998 0.32 102.95 2 3.06 二苯酮-4和二苯酮-5 Y=3730X+162 0.9999 0.30 97.42 3 3.31 对氨基苯甲酸 Y=43800X+268 0.9999 0.31 98.76 4 5.34 二苯酮-3 Y=19600X-388 0.9999 0.15 95.73 5 7.08 对甲氧基肉桂酸异戊酯 Y=44900X-1120 0.9999 0.13 95.77 6 7.50 4-甲基苄亚基樟脑 Y=17800X+2.10 0.9999 0.13 95.53 7 9.17 PABAZ基己酯 Y=15600X+419 0.9999 0.17 97.93 8 9.44 丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷 Y=11200X-3300 0.9999 0.12 100.52 9 9.68 奥克利林 Y=32800X+1260 0.9999 0.17 97.75 10 9.90 甲氧基肉桂酸乙基己酯 Y=36000X-868 0.9999 0.15 97.38 11 10.47 水杨酸乙基己酯 Y=7430X +212 0.9999 0.13 94.98 12 10.62 胡莫柳酯 Y=6280X+2150 0.9999 0.15 95.39 13 12.02 乙基己基三嗪酮 Y=12600X-225 0.9999 0.35 90.31 14 13.27 亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚 Y=1.9900X-131 0.9999 0.27 91.99 15 14.38 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪 Y=31400X-3240 0.9999 2.15 80.13 表3.15种防晒剂的线性方程、相关系数、重现性及加标回收率。 实际样品测定 购买市场上常见的12个防晒剂品牌(产地包括日本、韩国、欧洲、中国)，按照15版《化妆品安全技术规范》(2015年版)的要求处理样品。通过ACQUITY UPLC H-Class系统检测含有的防晒剂，检测谱图和结果如下所示。 图3.12种防晒产品色谱图。 Sample 4 0.04 0.47 8.76 6.22 0.15 Sample 5 0.91 7.10 13.62 2.43 Sample 6 1.87 1.76 1.61 0.29 7.91 12.56 0.15 3.33 Sample 7 2.97 7.44 1.64 4.12 0.60 0.15 Sample 8 3.09 7.65 1.67 3.89 0.70 0.14 Sample 9 2.88 7.40 1.62 4.47 0.72 Sample 10 0.01 0.40 0.15 0.65 0.99 Sample 11 2.29 6.24 0.08 0.43 Sample 12 0.87 2.50 0.09 0.14 限度要求 5 10 表4.12种防晒产品中各防晒剂的含量结果。 注：超出法规限度要求的用红色标记。 结论 本方法采用Waters ACQUITY UPLC H-Class系统，建立了《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求的15种防晒剂的分离方法。用到的流动相简单，对系统优化。经过Empower 3软件的计算，6针进样，绝大多数防晒剂的峰面积及保留时间的RSD%小于1%，检出限与定量限均比规范要求提高了20-100倍以上。同时，经过12批实际防晒剂样品的检测结果显示，方法可靠，具有普遍的适用性。 ( 参考文献 ) ( 1.国家食药总局，《化妆品安全技术规范》[Z]，2015. ) ( 2.轻工科技，超高效合相色谱法同时测定化妆品中12种防晒剂研究[J].轻工科技，2017，218。 ) ( 3.李立平，郑卫，姜正德。防晒化妆品中紫外吸收剂的高效液相色谱分析[].北京服装学院学报， 1996，16(2)：29-32。 ) ( 4.来国桥，张建兴，卢良。高效液相色谱法分离测定化妆品中三种紫外吸收剂的含量[].香料香精化妆品，2003，6(3)：22-26。 ) Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)820 2676Www.waters.com 化妆品中防晒剂的快速分离 化妆品中防晒剂的快速分离 背景防晒剂能够防止或减轻由于紫外线辐射而造成的皮肤损害，被广泛用于各类化妆 品中。我国 2015年版《化妆品安全技术规范》规定了防晒化妆品中能够添加的27 项准用防晒剂。有机防晒剂的防晒能力大多强于无机防晒剂，但是对皮肤有刺激 作用、导致皮肤过敏等。《化妆品安全技术规范》(2015年版)中明确规定了各类有 机防晒剂的使用限值。国家食药总局发布的《化妆品安全技术规范》(2015年版)1 中提供了同时检测苯基苯并咪唑磺酸等15 种防晒剂的方法。但由于原方法中存在 部分化合物分离度差等问题，如方法一中苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮、对氨基苯 甲酸的分离不好；方法二需要分组，检测效率较低。因此，为了改善这些方法中的 不足，我们做了本方案的方法开发。本方案在Waters ACQUITY UPLC H-Class系统上，开发了 2015版《化妆品安全 技术规范》中对应的 15种防晒剂的分离度方案，15种防晒剂及标品中含有的同分 异构体实现了完全分离，尤其是显著改善了苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮、对氨基 苯甲酸的分离。同时方法不再需要 THF作为流动相，对液相系统更加友好，更加 环保。重现性结果、加标回收率考察显示，绝大部分都在90 -100%。结论本方法采用Waters ACQUITY UPLC H-Class系统，建立了《化妆品安全技术规范》(2015年版)要求的15种防 晒剂的分离方法。用到的流动相简单，对系统优化。经过 Empower 3软件的计算，6针进样，绝大多数防晒剂 的峰面积及保留时间的RSD%小于1%，检出限与定量限均比规范要求提高了20 - 100倍以上。同时 ，经过12批 实际防晒剂样品的检测结果显示，方法可靠，具有普遍的适用性。