婴幼儿食品和乳品中尿嘧啶核苷酸检测方案

解决方案 GROUP GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定 摘要 核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相 C18 色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。食品中核苷酸的检测，推荐使用色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ， CAPCELL PAK ADME。 CAPCELL PAKC18 AQ 色谱柱可在100%水相下稳定使用，适用于极性较大物质的高水相条件下的分析； CAPCELL PAK ADME键合了笼状金刚烷基团，兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。 前言 核苷酸是--类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同，分别有胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)及次黄嘌呤核苷酸(IMP)等。由于核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相 C18 色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。 食品中核苷酸的检测，推荐使用色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ ， CAPCELL PAK ADME。 CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱可耐受纯水条件，因此也非常适合《GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果。 CAPCELL PAK ADME键合金刚烷基，兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用 CAPCELL PAK ADME 得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。 实验方法 第一部分 CAPCELL PAK C18 AQ 检测方法 《GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5； 4.6 mm i.d.×250mm 流动相：磷酸盐缓冲液*/甲醇=960/40(国标原条件为磷酸盐缓冲液/甲醇=1000/40) 速： 1.0mL/min 度：25℃ 流温检检测： PDA254 nm进讲样量： 10pL 浓度：见表1 *磷酸盐缓冲液：(1.40mmol/L 四丁基硫酸氢铵， 0.01 mol/L磷酸二氢钾)称取1.360g磷酸二氢钾，加0.4753g四丁基硫酸氢铵， 加900 mL水溶解， 磷酸调pH至3.2，用水定容到1000mL。 一、、核苷酸标准曲线的制作 配制系列标准工作液进行标准曲线的制作，各核苷酸的具体浓度如表1所示。 解决方案 胞嘧啶核苷酸(CMP)在 2.859 g/mL-45.746 Hg/mL浓度范围内线性良好，相关系数R~2=1.00；腺嘌呤核苷酸(AMP)在1.108 Hg/mL-17.735 Hg/mL 浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999；尿嘧啶核苷酸(UMP)在1.109Hg/mL-17.738Hg/mL 浓度范围内线性良好，相关系数R~2=0.9999；鸟嘌呤核苷酸(GMP)在1.160Hg/mL-18.567 Hg/mL 浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999；次黄嘌呤核苷酸(IMP)在1.075 Hg/mL-17.201 Hg/mL 浓度范围内线性良好，相关系数R^2=0.9999。 表1标准溶液中各核苷酸的浓度 序号 CMP(pg/mL) AMP(ug/mL) UMP(pg/mL) GMP(pg/mL) IMP(pg/mL) 1 2.859 1.108 1.109 1.160 1.075 2 5.718 2.217 2.217 2.321 2.150 3 11.436 4.434 4.435 4.642 4.300 4 22.873 8.867 8.869 9.283 8.600 5 45.746 17.735 17.738 18.567 17.201 图1胞嘧啶核苷酸(CMP)标准曲线图 图2腺嘌呤核苷酸(AMP)标准曲线图 GMP 图3尿嘧啶核苷酸(UMP)标准曲线图 图4鸟嘌呤核苷酸(GMP)标准曲线图 图5次黄嘌呤核苷酸(IMP)标准曲线图 图6核苷酸标准品色谱图 二、实际样品分析 按照国标方法，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果；对30个样品进行前处理后进行分析，样品中各核苷酸与其前后杂质分离良好，且不同样品之间各核苷酸的保留时间相一致。 表2样品定量浓度结果 样品号 CMP(ug/mL) AMP(pg/mL) UMP(pg/mL) GMP(pg/mL) IMP(pg/mL) 11 10.161 7.312 9.800 2.930 3.584 1104P 10.331 7.299 9.775 3.077 3.624 12 9.686 6.906 9.253 2.957 4.563 1204P 9.760 6.578 9.244 3.174 4.675 解决方案 GROUP 图7核苷酸样品分析结果 图86针样品分析叠加色谱图 基于个别样品分析时遇到的 CMP 与其前杂质未得到良好分离的情况，通过对洗脱条件进行调整，可实现CMP 与其前杂之间的良好分离。 化学成就健康而富足的生活。 解决方案 HPLC Conditions 色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5； 4.6 mm i.d. ×250 mm流动相：A：磷酸盐缓冲液* B：甲醇B(%)：0%(0min)-0%(5 min)-4%(7 min) →4%(25 min) →0%(25.1 min) →0%(30 min) (国标原条件为磷酸盐缓冲液/甲醇=1000/40) 流速：1.0 mL / min温检 度： 25℃ 测： PDA254nm 进样量： 10pL *磷酸盐缓冲液：(1.40mmol/L四丁基硫酸氢铵， 0.01 mol/L 磷酸二氢钾)称取1.360g磷酸二氢钾，加0.4753 g四丁基硫酸氢铵，加900mL水溶解，磷酸调 pH至3.2，用水定容到1000 mL。 第二部分 ADME 色谱柱的分析 CAPCELL IPAKAADME 键合金刚烷基，表面极性很高；在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME 得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。 值得注意的是， ADME 色谱柱的溶出顺序与常规反相 C18色谱柱不尽相同，再次印证了其独特的保留分离模式。对于不局限于 C18 色谱柱的老师来说，具有独特溶出模式的 CAPCELL PAK ADME 色谱柱是分析强极性化合物的不二之选。 mAU 图10 ADME对5种核苷酸标准品的分析结果 解决方案 GROUP 图11 ADME对5种核苷酸实际样品的分析结果 联系电话：精细化工品销售(北京)有限公司 核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物。根据碱基的不同，分别有胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌呤核苷酸（AMP）、尿嘧啶核苷酸（UMP）、鸟嘌呤核苷酸（GMP）及次黄嘌呤核苷酸（IMP）等。由于核苷酸类化合物的极性较强，在常规反相C18色谱柱上难以保留，通常通过添加离子对试剂等方式增强保留。食品中核苷酸的检测，推荐使用色谱柱 CAPCELL PAK C18 AQ , CAPCELL PAK ADME。CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱可耐受纯水条件，因此也非常适合《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》，对核苷酸标准品以及样品进行分析，可得到良好线性以及定量分析结果。CAPCELL PAK ADME键合金刚烷基, 兼具高极性和疏水性特点，对高极性化合物有出色的保持和分离效果。在国标原条件下，不论是标准品还是样品均可使用CAPCELL PAK ADME得到5种核苷酸的良好保留与分离结果。《GB 5413.40-2016 婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定》方法微调