水中6种雌激素和酚类环境激素检测方案(固相萃取仪)

自动化样品前处理解决方案-RK-2019-W007 水中的6种雌激素和酚类环境激素的测定解决方案 1.介绍 环境激素Environmental Endocrine是指外因性干扰生物体内分泌的化学物质，这些物质可模拟体内的天然荷尔蒙，与荷尔蒙的受体结合，影响本来身体内荷尔蒙的量，以及使身体产生对体内荷尔蒙的过度作用；或直接刺激，或抑制内分泌系统，使内分泌系统失调，进而阻碍生殖、发育等机能，甚至有引发恶性肿瘤与生物绝种的危害。 图1.Estradiol (CAS No. 50-28-2) 图2. Estriol (CAS No. 50-27-1) 图3. Ethynyl estradiol (CAS No.57-63-6) HO OH 图4. estrone (CAS No. 53-16-7) 图5. Octylphenol (CAS No. 27193-28-8) 图6. Nonylphenol (CAS No. 25154-52-3) 环境激素对人体的危害主要表现在以下几点：一是由于食物、饮水中大量存在环境激素物质，正在造成男人的精子减少，雄性退化，乃至男性不育症的高发。二是导致怀孕胎儿的致畸。经科学家研究发现，育龄妇女长期受环境激素的污染，会使受孕胎儿畸形的可能性大大增加，使胎儿的五官、肢体或性器官的局部畸形。三是干扰和降低人体免疫机能。导致神经系统功能障碍、智力低下，严重的还会引发某些癌症。 睿科建立了针对水中6种雌激素与酚类环境激素的固相萃取方法，使用HPLC/MS/MS进行检测，6种目标物标准曲线R大于0.995，检出限为0.52-0.85 ng/L， 测定下限为2.08-3.41 ng/L， 精密度测试相对标准偏差范围为2.4-9.6%，准确度测试相对误差范围为1.6-17.7%，地表水样品加标回收率范围为84.0-113.6%，废水样品加标回收率范围为86.5-118.4%，能够满足水中雌激素的检测下限以及质量控制的要求。 关键字： HPLC/MS/MS；雌激素；酚类环境激素； Fotector Plus； ASPE Ultra 06； AutoEVA-60 2.仪器和耗材 甲醇，乙腈，乙酸乙酯(TEDIA 色谱纯)；氨水，甲酸，硫代硫酸钠(分析纯) Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 6种雌激素与酚类环境激素混合标准品内标双双 A-D16、内标壬基酚-D8 Raykol ASPE Ultra 06全自动固相萃取仪Raykol AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪 3.样品前处理 高效液相色谱 (HPLC) Agilent 1260质普检测器(MS) Agilent 6410 HLB 固相萃取柱 (Waters，60 mg/3 mL) 样品采集前需添加硫代硫酸钠(80mg/L)以去除水中余氯的影响。添加甲酸，调节最终pH为2-3，在加入适量的内标物，使得最终富集浓缩液中内标 物的浓度(按100%回收率计算)与标准系列中添加的内标物浓度一致。 首先分别用洗脱溶液、甲醇和超纯水活化固相萃取小柱，再将经前处理后的水样，通过富集柱。样品富集完毕后用氮气将富集柱吹干后，用10%甲醇水进行淋洗，然后用 5.0 mL乙酸乙酯：甲醇=9：1洗脱。用氮吹仪将其吹至近干，用1+1甲醇水(体积比，含10%氨水)定容至1.00 mL， 供液相色谱-串联质谱分析使用。 图7.Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪 3.1 固相萃取富集条件 全自动固相萃取仪 Fotector Plus高通量全自动固 相萃取仪/ASPE Ultra 06全自 动固相萃取仪 固相萃取柱 HLB (UCT， 60 mg/3mL) 活化 10%甲醇/乙酸乙酯，甲醇，水 淋洗 10%甲醇/水 洗脱 10%甲醇/乙酸乙酯 No Step Source Output Flowrate(mL/min) Volume(mL)Time(min) 1 Condition 10%meth-Et... Waste2 3 5 2.1 2 Condition CH30H Waste2 2 5 2.9 3 Condition H20 Wastel 3 5 2.1 4 Load Large-Volume Sample SAM13-18 Wastel 8 1100 174.5 5 Rinse H20 Wastel 10 10 1.6 6 Air Push Wastel 60 20 1.6 7 Dry 5 8 Rinse Syringe CH30H 30 2 0.4 9 Rinse Syringe 10%meth-Et.. 30 3 0.5 10 Elute 10%meth-Et. Collect 1 7 7.5 11 Air Push Waste2 10 5 1.1 12 End 13 图8.Fotector Plus运行程序 3.2液质检测条件 柱子 Waters XBridge BEH HILIC 1.7um×21×50mm 流速 0.200 mL/min 流动相 A： WaterB： acetonitrile 柱温 40°C 进样体积 10uL 检测器 Agilent 6410 离子模式 ESI- 吹扫气 11 L/min 氮气温度 300°C 离子源温度 300℃ 簇电压 4000 雾化压力 35psi Time(min) %A %B 0.00 95 5 1.00 95 5 6.00 10 90 11.00 10 90 11.01 95 5 16.00 95 5 表1.洗脱梯度 3.3 MRM参数 母离子 子离子 保留时间 碎裂 电压 (v) 碰撞能量 相关系数 线性范 化合物 回归方程 围 ug/L (m/z) (m/z) (min)) (ev) (R) 炔雌醇 295.2 159.0 7.647 170 40 Y=0.2837078*x-1.832454E-004 R=0.9976 2~50 295.2* 145.1* 170 44 雌酮 269.2 159.2 6.643 170 32 Y=2.366781*x+0.041850 R=0.9996 2~50 269.2* 145.1* 170 42 雌二醇 271.2 182.9 7.920 180 40 Y=0.433003*x+0.0019996 R=0.9966 2~50 271.2* 145.0* 180 40 雌三醇 287.2 171.0 9.729 180 40 Y=0.465063*x-0.001618 R=0.9977 2~50 287.2* 145.0* 180 48 辛基酚 205.1 119.0 10.112 140 32 Y=1.841091*x-0.033162 R=0.9989 2~50 205.1* 105.9* 140 18 壬基酚 219.0 119.0 7.835 140 34 Y=1.338263*x-0.023662 R=0.9962 2~50 219.0* 105.9* 140 20 双酚 241.2* 223.3* 10.183 130 18 A-D16 241.2 142.1 130 26 227.2* 112.0* 132 21 NP D8 7.572 *代表定量离子 图9.各组分MRM-1雌二醇；2雌酮；3炔雌醇；4雌三醇5；辛基酚；6壬基酚 4.结果与讨论 向水中加入适量标准使用液，使用 FotectorPlus 高通量全自动固相萃取仪进行固相萃取，浓缩液转溶后使用 LC-MS/MS 检测，内标法定量， 5 ng/L加标经过内标法定量后，检出含量在4.425.63 ng/L 之间， RSD 在5.3~9.6之间，20 ng/L 加标经过内标法定量后，检出含量在18.6~22.5 ng/L 之间， RSD 在3.2~9.8之间， 40 ng/L 加标经过内标法定量后，检出含量在37.6~43.2 ng/L 之间， RSD在2.4~7.5之间，七个平行样加标回收率、RSD 如表 2所示 项目 5ng/L加标 20ng/L 加标 40ng/L 加标 Avg. RSD Avg. RSD Avg. RSD 炔雌醇 4.54 9.1 19.7 8.1 38.3 7.2 雌酮 4.75 6.9 21.0 9.6 41.1 2.4 雌二醇 4.42 9.6 22.0 3.2 37.6 4.6 雌三醇 5.63 8.5 19.2 9.8 37.6 7.5 辛基酚 4.69 5.4 22.5 9.2 43.2 7.2 壬基酚 5.36 5.3 18.6 2.7 38.1 7.5 表.26种环境激素加标回收率以及平行性(n=7) Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪能同步进行6个样品处理，自动连续处理60个样品，从活化、上样、淋洗到洗脱等多种基础命令全部实现自动化，大大提高了仪器精度和可靠性，保证了 ASPE Ultra 06 全自动固相萃取仪集活化，富集，洗脱，浓缩一步到位，方便省事。AutoEVA-60 全自动平行浓缩仪可自动完成对样品的快速，平行浓缩。 全自动固相萃取仪净化 全自动固相萃取仪 净化 全自动平行浓缩仪浓缩 热线：箱： info@raykol.com网址：www.raykol.com 邮箱： info@raykol.com热线：址：：www.raykol.com 睿科建立了针对水中6种雌激素与酚类环境激素的固相萃取方法，使用HPLC/MS/MS进行检测，6种目标物标准曲线R大于0.995，检出限为0.52-0.85 ng/L，测定下限为2.08-3.41 ng/L，精密度测试相对标准偏差范围为2.4-9.6%，准确度测试相对误差范围为1.6-17.7%，地表水样品加标回收率范围为84.0-113.6%,废水样品加标回收率范围为86.5-118.4%，能够满足水中雌激素的检测下限以及质量控制的要求。