饲料中维生素A检测方案(液相色谱仪)

三SDPTOP SDPTOPRSD 0.242% 0.534% 0.733% 饲料中维生素A的测定 1实验部分 1.1仪器与试剂 LC1620A 高效液相色谱仪(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)； FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)； 甲醇(色谱纯，美国 Tedia)， 维生素A标准品(纯度>95%，阿拉丁试剂)。 1.2标准溶液的配制 参考 GB/T 17817-2010饲料中维生素A的测定高效液相色谱法，配制浓度为3.44ug/ml 的标准工作液。 1.3色谱条件 色谱柱： Shodex C18-100-4D(4.6x150mm) 流动相：甲醇：水(95：：5) 流速：11.0ml/min 柱温：：室温 进样量：20pl 检测波长：326nm 2实验结果 2.1精密度 将1.2中所配制的 3.44ug/ml标准溶液，在1.3描述的高效液相色谱条件下进样，重复进样五次，结果如表1所示RSD 均在1.0%以内。 表1精密度实验结果 No 保留时间 峰高 峰面积 1 5.493 66.302 725.623 2 5.468 66.832 712.594 3 5.463 66.948 713.915 4 5.472 66.631 714.214 5 5.489 66.102 716.800 平均值 5.477 66.563 716.629 图1标准品谱图 2.2标准曲线 将1.2中所配制的标准待测溶液逐级稀释为1.29ug/ml、0.86ug/ml、0.43ug/ml、0.07ug/ml不同浓度，在1.3描述的高效液相色谱条件下由低浓度开始进样，所得标准曲线结果如下： 2.3实际样品测定 参考 GB/T 17817-2010第一法皂化提取法对饲料样品进行处理，具体步骤如下： 1、皂化：称取试样5g，置于250ml圆底烧瓶中，加入50ml的L-抗坏血酸乙醇溶液(5g/L)，使试样完全分散、浸湿，加10ml氢氧化钾溶液(500g/L)，摇匀。置于沸水浴中回流30min， 不时振荡。皂化结束后，分别用5ml无水乙醇、5ml水自 冷凝管顶端冲洗，取出烧瓶冷却至40℃； 2、提取：定量转移全部皂化液于盛有100ml二氯甲烷的500ml分液漏斗中，用50ml水分3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气、随后混合，激烈振荡2min，静置、分层。同样操作三次，合并二氯甲烷相。用水100mL 洗涤二氯甲烷提取液至中性。后用无水硫酸钠脱水，转移至250ml棕色容量瓶中，加100mgBHT 溶解，用二氯甲烷定容至刻度。 3、浓缩：1：从二氯甲烷提取液中分取10ml，氮吹浓缩至近干。残残以甲醇溶解，定容至1ml。用甲醇稀释100倍，经0.45um滤膜过滤，作为待测样品溶液。 待测溶液在1.3描述的高效液相色谱条件下进样，所得结果如下： 峰面积 浓度 (ug/ml) 标准品 739.327 3.44 样品 893.989 4.16 按称量样品量及稀释倍数计算得实际样品含量为2.08*103mg/kg。 图2实际样品谱图 3结论 采用 LC1620A 高效液相色谱仪，参考 GB/T 17817-2010 的方法对维生素A进行分析，分析精密度与线性关系结果良好，并对实际样品进行分析，分离检出良好，符合国家标准的分析需要。 上海舜宇恒平科学仪器有限公司SHANGHAI SUNNY HENGPING SCIENTIFIC INSTRUMENT CO.，LTD. 饲料中维生素A的测定实验部分仪器与试剂LC1620A高效液相色谱仪（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；甲醇(色谱纯，美国Tedia)，维生素A标准品（纯度＞95%，阿拉丁试剂）。