饮料中葡萄糖状态的糖含量检测方案(紫外分光光度)

2 使用LAMBDA阵列紫外可见分光光度计检测饮料中葡萄糖状态的糖含量 介绍这篇应用文章主要介绍用比色法测定饮料中糖类或者碳水化合物的含量。PDA (二极管阵列)紫外可见分光光度计可以快速采集随时间变化的反应的精确数据。UV Lab软件的定量模式可以自动生成校正曲线。 原理 该方法是依据糖和3，5二硝基水杨酸 (DNSA)反应逐渐减少生成3-氨基5-硝基水杨酸过程中颜色的形成，如图1所示。 蔗糖不和DNSA反应，因此蔗糖先分解成单糖，例如在盐酸环境下蔗糖与样品一起煮沸。另外，饮料中的糖含量太高不能直接用该方法需要稀释后才能用。在580nm处检测棕红色的产物。 图1.3，5二硝基水杨酸和蔗糖 试剂和仪器 1、蔗糖储备液(1000mg/dL) 2、饮料(未食用过，非深色) 3、6M HCI溶液 4、2.5M NaOH溶液 5、0.05M 3，5二硝基水杨酸溶液 6、超纯水 7、LAMBDATM465紫外可见分光光度计 8、UVLab软件 9、比色皿(10mm光程) 步骤 1、准备5分稀释的蔗糖储备液作为标准。 2、准备稀释的饮料作为样品。 3、吸取2mL蔗糖标准溶液和样品加入试管中，再加入2mL超纯水于另外一根试管中作为空白溶液。 4、加入2mL 6M HCI溶液。 5、置于沸水中10min。 6、加入8mL 2.5M NaOH溶液。 7、加入0.05M DNSA溶液，然后用封口膜盖上试管，摇匀。 8、置于沸水中5min， 在置于冰水中10min(所有样品从添加DNSA到检测的时间需要一致)。 9、运用定量标准模式在580nm处测定5个标准溶液和参比的吸光度。 10、运用定量样品模式检测样品并计算出浓度。 仪器参数 LAMBDA 465的参数如下，图2为实验的参数设置实验设置数据类型： 吸光度采样： 单池模式： 谱图数量：1，扫描次数：30，积分数：1实验方法 使用波长：580nm 图2.实验方法 结果 1.校正曲线 图3为蔗糖标准的标准曲线，表1为校正数据。图4为5个标准点的校正曲线。相关系数R²是0.99962。 图3蔗糖标准溶液的谱图 表1蔗糖标准溶液的校正数据 R²=0.99962 曲线：Y=0.0002X+-0.0365 名称 浓度(mg/dL) AU(580nm) 标准1 20 0.0034 标准2 40 0.0474 标准3 60 0.086 标准4 80 0.1264 标准5 100 0.1687 图4.蔗糖标准的校正曲线 2.饮料中糖的浓度 未知样品中饮料糖的浓度可以通过校正曲线获得如图4.饮料中糖的原始浓度可以通过以下公式计算： 原始浓度=稀释样品的浓度*稀释因子 浓度 稀释 AU名称(mg/dL) 因子 (580nm) 原始浓度 (mg/dL) 饮料1 59.911 200 0.0862 11982.2 饮料2 70.36 200 0.1076 14072 饮料3 71.239 200 0.1094 14247.8 结论 图3为蔗糖标准的标准曲线，表1为校正数据。图4为5个标使用LAMBDA 465紫外可见分光光度计和UV Lab软件测定了饮料中糖含量。使用该方法颜色随时间变化，而且LAMBDA 465的快速的数据采集能力和高的灵敏度保证了高线性度的的校准曲线R²=0.99962。 UV Lab软件的定量模式可以使操作者有效方便的采集标准曲线的娄据去做未知样品的定量分析。 这篇应用文章主要介绍用比色法测定饮料中糖类或者碳水化合物的含量。PDA（二极管阵列）紫外可见分光光度计可以快速采集随时间变化的反应的精确数据。UV Lab软件的定量模式可以自动生成校正曲线。