鱼肉中喹乙醇检测方案(快速溶剂萃取)

第31卷第2期2012年2月分析试验室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol.31.No.22012-2 第31卷第2期2012年2月Vol.31.No.22012-2分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory 快速溶剂萃取-超高效液相色谱法分析鱼肉中喹乙醇 赵 粼*，阙 斐，刘绿叶 (1.浙江经贸职业技术学院应用工程系，杭州310028；2.戴安中国有限公司上海实验室，上海200210) 摘 要：以甲醇为溶剂，采用 ASE 快速、高压萃取鱼肉中喹乙醇，并实施了自动在线净化过滤，色谱分析采用了乙醇(色谱级)为流动相，超快速液相色谱法进行分析。喹乙醇的标准工作溶液的线性回归方程为y=0.0358x+0.0019，相关系数r=0.9999，线性范围为0.1~2.0pg/mL，方法检出限(以信噪比(S/N=3)计算)为5.0pg/kg，样品加标回收率平均值(n=3)为88%，同时对6个平行样进行精密度试验，保留时间与峰面积的 RSD 值分别为0.21%和2.0%，重现性较好。方法可以用来快速分析鱼肉等样品中的喹乙醇。 关键词：快速溶剂萃取；超高效液相色谱；喹乙醇；鱼肉 中图分类号：0657.7 文献标识码：A 文章编号：1000-0720(2012)02-010-03 喹乙醇(Olaquindox)又名喹酰胺醇，属喹恶啉1，4-二氧化物类药物，是一种畜禽及水产动物促生长的药物添加剂，具有抗菌和促生长作用，常被用来添加在饲料中，用于促进禽畜类的生长。但过量使用或不正当使用，会导致喹乙醇在肉制品中残留，在被人食用后，会对人体产生影响，毒理实验研究表明，喹乙醇具光敏毒性、致畸性和致癌性。目前，常用的分析检测方法是采用超声或振荡提取后净化、过柱2]，利用反相液相色谱法分析。前处理提取溶剂通常为乙乙，提取后，用正己烷去除油脂，然后，旋蒸、离心、过滤，定容，待上液相色谱仪进行分离、定量。色谱分析条件常采用甲醇或乙腈作为流动相，C18分离柱，7-8 min 分析完毕3。 本文前处理采用了快速溶剂(ASE)进行加温、加压萃取，大大缩短了提取时间，提高了提取效率，并增加了自动在线净化、过滤等步骤，缩减了提取时间和溶剂消耗，减少了超声提取后后期带来的繁琐手工操作。同时，上机分析采用乙醇为流动相超高效液相色谱法进行分析，目标化合物在1.5 min出峰，3 min 内分析完毕，一方面大大节省了整个 分析时间，另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量4]。 1实验部分1试剂与材料 甲醇、乙醇、正乙烷(色谱纯)；硅藻土(Dionex公司)：将硅藻土(75~150p.m)放入马福炉，于550℃灼烧3 h，移至干燥器中冷却，装人密封容器保存。中性氧化铝：将中性氧化铝(75~150 pm)放人马福炉，于550℃灼烧3h。移至干燥器中冷却，装人密封容器保存。喹乙醇标准储备液。其他所用试剂未特别注明均为分析纯。实验用水均为超纯水。 1.2 仪器与设备 ASE350 快速溶剂萃取仪(Dionex公司)：萃取净化条件见表1。 超高效液相色谱仪(Dionex UPLC Ultimate3000)，液相色谱条件：色谱柱：Acclaim PA2(C18，2.2um， 2.1×50mm)；流动相：乙醇/10 mmoL 乙酸铵(10/90)，0.4 mL/min，等度；色谱柱温度：60℃；检波长：380nm；进样量：1pL。 ( 收稿日期：2011-06-13；修订日期：2011-07-20 ) ( 基金项目：2011浙江省教育厅科研项目(Y201119659)资助 ) ( 作者简介：赵 粼(1980-)，女，讲师；E-mial： bol u ob@ sina. com ) 表1 ASE 萃取净化条件 Tab. 1 The extraction and cleaning conditions of ASE 条件 第一步脱脂 第二步萃取 溶剂 正已烷 甲醇或乙醇 温度/℃ 压玉/MPa 静态萃取时间/min 冲洗体积/% 100 吹扫时间/s 静态循环次数 1 萃取池体积/mL 22 1.3 实验方法 标准储备液配制：准确称取适量的喹乙醇标准品，用5%甲醇溶液配成浓度约1 mg/mL的标准储备液。如喹乙醇不溶，可超声使其溶解。喹乙醇标准工作液：将储备液用5%甲醇溶液稀释为含喹乙醇0.1~2.0 pg/mL的标准工作液，放放在冰箱中，避光保存。 样品前处理：将鱼去除鱼鳞和骨头，取出鱼肉用匀浆机打碎，取5.0g左右，加人助滤剂5.0g，混和后，再加入5.0g中性氧化铝，放入到快速溶剂萃取仪22mL 萃取池中，萃取池底部加人一片纤维素滤膜。按“1.2”中萃取条件经自动萃取净化后，将萃取液旋转至近干，用流动相定容，过0.22 um针孔滤膜待上机使用。 2 结果与讨论 2.1 ASE 萃取净化条件选择 肉制品或饲料中喹乙醇的提取，通常采用乙腈超声或振荡提取，提取后，一般采采 HLB固相萃取小柱净化喹乙醇试样提取液5，或采用自制的填充的中性氧化铝小柱，过柱净化61。前者使用 HLB SPE 小柱，分致分析成本大大增加，且增加了分析时间；后者，由于采用自制填充的小柱等过柱装置，重现性与回收率不能得到很好的保证，且给实验室环境带来一定的污染。因此本文采用了 ASE 密闭加温加压提取7.8]，为了避免大量使用乙腈，本文采用了乙醇与甲醇进行替代试验，进行了尝试性分析。按照“1.2”方法对样品进行了提取与在线净化，整个时间缩短至15min，提取用试剂(乙醇或甲醇)减少至55mL，净化用正已烷减少至25 mL。通过提取后回收率比较发现，使用甲醇提取效率要高于乙醇，达到88%。 2.2 色谱条件选择 参照国标及相关文献方法3]，本文采用了乙醇和水为流动相(“，采用 UHPLC 与亚微米粒径细径柱进行了分析，柱温选择了60℃。选用乙醇代替甲醇或乙腈作为流动相，为了达到绿色色谱的概念，减少有毒试剂的使用。但乙醇的粘度较大，为了降低柱压，及达到快速分离的效果，最后把柱温增加到了60℃，从分离效果来看，与甲醇类似，但峰宽相对变宽。另外，由于该方法有机相比例为10%，因此，为了保护色谱柱，选用了更亲水的C18柱-PA2柱，相对普通 C18柱，PA2柱上喹乙醇出峰时间更快，峰形更对称。 2.3 标准溶液分析 按照“1.2”提取方法与“1.3”分析条牛，标准溶液色谱图见图1。对标准工作溶液进行线性回归分析，以峰面积y对浓度x(ug/mL)进行回归计算，得到线性回归方程为y=0.0358x+0.0019，相关系数r=0.9999，线性范围为0.1~2.0pg/mL。以信噪比(S/N=3)计算方法检出限为5.0pg/kg。 图1 标准工作溶液色谱图 Fig.1 The LC chromatogram of Olaquindox instandard solution 2.4 精密度考察 将空白样品添加喹乙醇至最终浓度为0.5pg/mL，个6个平行样，进行变异性统计分析，结果表明：喹乙醇保留时间的变异系数为0.21%，峰面积的变异系数为2.0%，重现性较好。 2.5 样品测定及加标回收实验 按照“1.3”节实验方法，对样品进行前处理并 分析测定，采用峰面积外标法定量。同时，为检验方法的准确性，作了3个加标回收试验。结果表明：样品中未检出目标化合物喹乙醇，通过3个加标回收试验，平均回收率为87.9%，加标回收谱图见图2，分析结果见表2。 图2 样品加标回收测定谱图 Fig. 2 The LC chromatogram of thespiked sample 表2样品分析结果 Tab. 2 The analysis results of sample 保留时间 分析物 样品含量 加标浓度 加标回 t/min p/(pg/mL) p/(pg/mL) 收率/% 1.50 喹乙醇 未检出 1.0 87.9 ( 参考文献 ) ( [1] 吴玉杰，陈冬梅，陶燕飞.分析科学学报，2009， 25(4)：427 ) ( [2] 张小军，郑 斌，陈雪昌，等.食 品 食学，2010， 31(24)：289 ) ( 金晓峰.饲料工业，2009，30(23)：41 ) ( 付春梅，李章万，刘三康， 等. 色 谱，1999， 17(5)：466 ) ( 罗 杨，张剑勇.中国饲料，2006，(12)：35 林 ) ( 黎，谢丽琪，欧阳姗.分析试验室，2010， 29(2)：38 ) ( [7] 喻凌寒，宋之光，陈江韩.分 析 试验室，2006， 25(8)：68 ) ( [8] 李波平，林勤保，宋欢.应用化学，2008， 25(1)：63 ) ( [9] 杨文文.中 国 饲料，2006，(20)：33 ) Determination of olaquindox in fish by ASE-UHPLC ZHAO Lin*'， QUE Fei and LIU Lu-ye’(1. The Department of Applied Engineering， ZheJiang Economic andTrade Polytechnic， Hangzhou 310028； 2. Dionex (Shanghai) Instrument Ltd.， Shanghai 201210)， FenxiShiyanshi，2012，31(2)：10~12 Abstract： An analytical method for the determination of olaquindox in fish samples by ASE and UHPLC wasdeveloped. The results showed that the linear regression equation was y=0.0358x +0.0019， the correlationcoefficient was above 0.9999， and the calibration curve was linear in the range of 0. 10~2.0pg/mL， and thedetection limit of the method (calculated with S/N=3) was 5. 0pg/mg. Then a sample was analyzed with thismethod， and the content was undetected. The average recovery (n=3) of the spiked sample was 88%， and therelative standard deviations of retention time and peak area of six samples were 0.21% and 2.0%， respectively. Keywords： Olaquindox； ASE； UHPLC； Fish 快速溶剂萃取-超高效液相色谱法分析鱼肉中喹乙醇 作者：赵粼， 阙斐，刘绿叶，， ZHAO Lin，QUE Fei，LIU Lu-ye作者单位：赵粼，阙斐， ZHAO Lin，QUE Fei(浙江经贸职业技术学院应用工程系，杭州，310028)，刘绿叶，LIU Lu-ye(戴安中国有限公司上海实验室，上海，200210)刊名：分析试验室室 ISTICPFKU英文刊名：Chinese Journal of Analysis Laboratory年，卷(期)：2012，31(2) ( 参考文献(9条】 ) ( 1 .吴玉 杰 ； 陈 冬梅； 陶 燕飞 查 看 详 情 2 0 0 9(04) ) ( 2. 张 小 军 ； 郑斌； 陈雪昌查 看 详情 2 01 0(24) ) ( 3. 金晓 峰 查 看详情 200 9(23) ) ( 4. 付 春 梅 ；李 章 万 ；刘三 康 查 看 详 情 19 9 9(05) ) ( 5. 罗杨；张剑 勇 查 看 详 情20 0 6(12) ) ( 6 .林 黎 ； 谢 丽 琪 ； 欧阳 姗 查 看 详 情 201 0(02) ) ( 7. 喻凌寒 ； 宋之光； 陈 江 韩 查 看详情 20 0 6(08) ) ( 8. 李波平；林勤 保； 宋欢 查 看 详 情 2 00 8(01) ) ( 9. 杨 文 军 查 看详情 20 0 6(20) ) ( 本文 链 接： htt p ：//d . w a n fa n g d a ta. c o m .c n / Pe r i o d i c al f x s ys20 12 0 2 0 03. a sp x ) 数据 本文前处理采用了快速溶剂(ASE)进行加温、加压萃取，大大缩短了提取时间，提高了提取效率，并增加了自动在线净化、过滤等步骤，缩减了提取时间和溶剂消耗，减少了超声提取后后期带来的繁琐手工操作。同时，上机分析采用乙醇为流动相超高效液相色谱法进行分析，目标化合物在1．5 min出峰，3 min内分析完毕，一方面大大节省了整个分析时间，另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量分析时间，另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量。