牛奶中阿维菌素检测方案(固相萃取仪)

SINEO新仪SPE-008-201711 海能仪器：全自动机械臂固相萃取仪-高效液相色谱法检测牛奶中阿维菌素残留量 1前言 目前，阿维菌素作为牛常用的抗寄生虫药物，容易造成牛组织中药物残留超标，且会污染牛奶。因此，监控该类有无在畜禽类可食性组织及产品中的残留显得非常重要。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测牛奶中阿维菌素农药残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能精准的控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。 2仪器与试剂 2.1仪器 SPE400 全自动机械臂固相萃取仪； HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪(配荧光检测器)；分析天平；高速分散均质机；涡动混合仪；离心机；其他常规玻璃仪器；滤滤(有机相，0.45um)。 SPE400 全自动机械臂固相萃取仪 2.2试剂及耗材 实验用水应符合 GB/T6682中一级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。 乙腈(色谱纯)；甲醇(色谱纯)；)；三氟乙酸酐；三乙胺；异辛烷；N-甲基咪唑；阿维菌素标准品：含量≥98%。 固相萃取柱： C18， 500mg/6ml。 衍生化试剂A液：取N-甲基咪唑1mL、乙腈1mL，混匀，现配现用。 衍生化试剂B液：取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL，混匀，现配现用。 洗涤液：取乙腈30mL、水70mL 和三乙胺 20uL，混匀。 3实验方法 3.1取样 取适量新鲜的牛奶，用高速分散均质机将样品混合均匀。 3.2提取 称取样品 5g于50mL离心管中，加乙腈8mL， 涡动 1min ， 4500r/min 离心 10min，取上清液。残渣中加乙腈8mL，重复提取一次，合并两次上清液，加水20mL、三乙胺 50pL， 混匀，备用。 3.3固相萃取柱净化(C18柱) 过程 溶剂 试剂用量(mL) 添加次数 试剂流速(mL/min) 空气助推(mL) 推柱速度(mL/min) 活化 乙腈 5 1 2 5 洗涤液 5 1 单管上样 样品 >36 5 5 5 淋洗 异辛烷 3 1 5 5 洗脱 乙腈 5 1 3 5 表1固相净化条件 3.4浓缩及衍生化 用氮吹仪吹至近干，备用。于备用管中依次加入衍生化试剂A液100uL、衍生试剂 B液150pL，密闭， 涡动10s， 依次加冰醋酸 50uL 和三乙胺各 50pL，涡动10s，于室温密闭反应30min，加甲醇650uL 混匀。过滤，供高效液相色谱法测定。 3.5色谱测定条件 色谱柱：C18，粒径5um， 柱长250mm， 内径4.6mm； 流速：1.0mL/min ； 激发波长：365nm； 发射波长：475nm； 柱温：30℃； 进样体积：20uL。 流动相：乙腈：水=(90+10，V/V)， 3.6标准曲线的制备 精密量取 10pg/mL 阿维菌素类药物混合标准贮备液适量，用乙腈稀释，配制成浓度为2、5、10、50、1000ng/mL的系列标准溶液，各取1.0mL于5mL试管中，于60℃水浴氮气吹干，依次加入衍生化试剂A液100pL、衍生试剂B液150pL，密闭 ，涡动 10s ，依次加冰醋酸 50pL和三乙胺各 50uL， 涡动10s，于室温密闭反应 30min ， 加甲醇 650pL混匀，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求出回归方程和相关系数。 3.7测定 取试样及不添加样品的空白溶液，按外标法，以峰面积计算，根据回归方程，得出试样中阿维菌素含量。 4实验结果 4.1结果 牛奶样品中阿维菌素的残留量(ug/kg)：：2x_cxL 11 X——样品中阿维菌素残留量 ， ug/kg； c试样中阿维菌素浓度，单位ug/mL； V—-样夜总体积，单位 mL； m——试样质量，单位为g。 4.2结论 采用 SPE400 全自动机械臂固相萃取仪可以快速对样品提取液进行净化和富集，可做到无人看守、批量处理，省去实验员繁琐的加液取液等人工操作，方便快捷。采用 SPE400 全 自动机械臂固相萃取仪对样品提取液可以精准的控制进样、加液等流速，有利于固相小柱进行萃取分离，从而实现较好的样品检测重复性。 ( 参考文献 ) ( [1] GB 29696-2013食品安全国家标准牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定[S]. ) -- -- 1 1 前言目前，阿维菌素作为牛常用的抗寄生虫药物，容易造成牛组织中药物残留超标，且会污染牛奶。因此，监控该类有无在畜禽类可食性组织及产品中的残留显得非常重要。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测牛奶中阿维菌素农药残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。2 仪器与试剂2.1仪器SPE400全自动机械臂固相萃取仪；HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪（配荧光检测器）；分析天平；高速分散均质机；涡动混合仪；离心机；其他常规玻璃仪器；滤膜（有机相，0.45μm）。2.2试剂及耗材实验用水应符合GB/T6682中一级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；三氟乙酸酐；三乙胺；异辛烷；N-甲基咪唑；阿维菌素标准品：含量≥98%。固相萃取柱：C18，500mg/6ml。衍生化试剂A液：取N-甲基咪唑1mL、乙腈1mL，混匀，现配现用。衍生化试剂B液：取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL，混匀，现配现用。洗涤液：取乙腈30mL、水70mL和三乙胺20μL，混匀。