奶粉中DHA、EPA、AA等不饱和脂肪酸检测方案(气相色谱仪)

SSL-CA14-799Excellence in Science Excellence in ScienceGC-135 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区区宜路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai Nexis GC-2030 测定婴儿奶粉中DHA、EPA 和 AA含量 GC-135 摘要：本文使用 Nexis GC-2030 气相色谱仪建立了测定婴儿奶粉中二十二碳六烯酸(DHA)、、二二十碳五烯酸 (EPA)和花生四烯酸 (AA) 营养元素的方法。参考 GB 5413.27-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》中的前处理方法，采用乙酰氯-甲醇法对奶粉进行了甲酯化处理，在 Nexis GC-2030仪器上检测，采用外标法定量，脂肪酸甲酯化标样在0.01-1.6 mg/mL 的浓度范围内标准曲线线性关系良好(回归系数不低于0.999)，奶粉样品加标回收率范围在73.3%~106.7%，最低浓度点连续六针重现性良好 (RSD<3%)。实际分析了三种奶粉样品，三种营养元素均被检测出。 关键词：气相色谱仪婴儿奶粉脂肪酸 不饱和脂肪酸又称维他命F，是人体重要的必须的脂肪酸，二十二碳六烯酸 (DHA)、二十碳五烯酸(EPA)和花生四烯酸 (AA)是几种最常见的多不饱和脂肪酸，它们是大脑和脑神经的重要营养成分，能提升婴儿智力，发育指数、提升视力敏锐度。有些不饱和脂肪酸是人体不能合成的，必须通过食物添加。奶粉是婴幼儿摄取营养成分(如 DHA， EP， AA)的重要途径，奶粉中各种营养 实验部分 1.1仪器 岛津气相色谱仪 Nexis GC-2030 1.2分析条件 色谱柱： Stabil-Wax， 30 m×0.25mm×0.25 um 进样口温度：240℃ 进样方式：分流 分流比：30：1 进样量： 1uL 物质的含量成为人们选择奶粉的重要指标，因此测定婴幼儿奶粉中多不饱和脂肪酸的含量显得尤为重要。 本文参考 GB 5413.27-2010《食品安全国家标准--婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定》，采用乙酰氯-甲醇甲酯化前处理方法，使用岛津气相色谱仪 Nexis GC-2030 建立了检测婴儿奶粉中DHA，EPA和 AA 含量的分析方法。 载气：氮气 载气控制方式：恒线速度(28.9 cm/s) 检测器： FID 检测器温度：260℃ 空气流量：200 mL/min 氢气流量：32mL/min 1.3样品制备 婴儿奶粉样品处理过程如下图1所示： 图1婴儿奶粉样品处理流程图 结果与讨论 2.1标准品谱图 脂肪酸甲酯化标准品色谱图如下图2所示： 4.0￥680.000 图2不饱和脂肪酸甲酯化标准品谱图(1.6mg/mL) 从左至右依次为花生四烯酸甲酯(AA-M)，二十碳五烯酸甲酯(EPA-M)和二十二碳六烯酸甲酯(DHA-M) 2.2标准曲线 使用正己烷分别配制浓度为0.01、0.04、0.1、0.4、0.8和1.6 mg/mL的花生四烯酸甲酯(AA-M)、二十碳五烯酸甲酯(EPA-M) 和二十二碳六烯酸甲酯(DHA-M)3种脂肪酸甲酯化标准溶液，供 GC-FID 分析。以浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，绘制外标法标准曲线并按3倍信噪比计算最低检测限(LOD)。标准曲线如图3所示，各甲酯化物质的标准曲线回归系数、最低检出限见表1. 图3 AA-M(左)， EPA-M(中)， DHA-M(右)标准曲线 表1 AA-M，EPA-M，DHA--M标准曲线回归系数和检测限(ug/mL) 组份 回归系数 检测限 AA-M 0.9999 0.32 EPA-M 0.9998 0.47 DHA-M 0.9999 0.75 2.3重复性 取标线中最低浓度点(0.01mg/mL)的标样，连续进样6次，进样量1uL，以峰面积RSD考察重复性，结果如表2，各组分连续6针峰面积RSD 在3%以下。 表2标样重复性结果 (RSD%，n=6) 组份 面积1 面积2 面积3 面积4 面积5 面积6 平均面积 RSD(%) AA-M 6302 6295 6236 6186 5972 6291 6214 2.04 EPA-M 5285 5185 5229 5249 5040 5340 5221 1.71 DHA-M 5547 5496 5398 5525 5159 5434 5426 2.63 2.4样品测试结果 取三种婴儿奶粉，做两份平行样，按照实验前处理方法进行处理后，进气相色谱仪分析，结果如下表3所示： 表3样品测试结果(mg/100g) 组份 奶粉1(n=2) 奶粉2(n=2) 奶粉3(n=2) 平均值 平均值 平均值 AA-M 77.8 84.4 83.2 EPA-M 84.4 68.0 80.5 DHA-M 83.2 62.3 74.0 2.5 基质加标回收率 取其中一种奶粉0.5g， 加入3种脂肪酸混标(0.1 mg/mL) 100 uL， 按照样品前处理方法平行处理3份(进样小瓶最终体积1mL)，另取空白做对照，计算回收率如表4所示： 表4奶粉中脂肪酸回收率分析结果 样品1 样品2 样品3 平均回收率 回收率(%) 回收率(%) 回收率(%) (%) AA 73.3 73.3 83.3 76.7 EPA 106.7 106.7 106.7 106.7 DHA 70.0 70.0 80.0 73.3 结论 本文使用 Nexis GC-2030气相色谱仪建立了测定婴儿奶粉中二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸 (EPA)和花生四烯酸 (AA) 营养元素的方法。采用乙酰氯-甲醇法对奶粉进行了甲酯化处理，采用外标法定量，脂肪酸甲酯化标样在 0.01-1.6 mg/mL 的浓度范围内标准曲线线性关系良好(回归系数不低于0.999)，奶粉样品加标回收率范围在73.3%~106.7%，最低浓度点连续六针重现性良好(RSD<3%)。样品中三种营养元素均被检测出。该方法可有效测定奶粉中 AA， EPA和 DHA的含量。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 快速、准确、稳定；本文使用Nexis GC-2030气相色谱仪建立了测定婴儿奶粉中二十二碳六烯酸 (DHA)、二十碳五烯酸 (EPA)和花生四烯酸 (AA) 营养元素的方法。采用乙酰氯-甲醇法对奶粉进行了甲酯化处理，采用外标法定量，脂肪酸甲酯化标样在0.01-1.6 mg/mL的浓度范围内标准曲线线性关系良好 (回归系数不低于0.999)，奶粉样品加标回收率范围在73.3%~106.7%，最低浓度点连续六针重现性良好 (RSD < 3%)。样品中三种营养元素均被检测出。该方法可有效测定奶粉中AA，EPA和DHA的含量。