炔诺酮药片中USP 分析检测方案(液相色谱仪)

使用 Agilent Poroshell 120 EC-CN 和EC-C8色谱柱对炔诺酮和美雌醇药片进行USP分析 应用简报 制药业 作者 摘要 Anne Mack安捷伦科技有限公司 根据美国药典(USP)中炔诺酮和美雌醇药片的分析方法对炔诺酮、美雌醇和黄体酮进行分析。与 USP 建议的 5 pm色谱柱相比，表面多孔 Agilent Poroshell 120 色谱柱能够改善溶出度分析。根据 USP 第621章的指导原则对每种方法进行调整，使得 Poroshell 120色谱柱能够达到节省时间和溶剂的目的。改进后所采用的表面多孔色谱柱符合所有的色谱系统要求。 前言 在LC方法中，将较大的5 um 全多孔颗粒转换为表面多孔的颗粒有着重要的意义。表面多孔颗粒具有与亚 2 pm 全多孔颗粒相似的高柱效。这主要是因为其传质距离较短并且粒径分布较窄。此外，较大的粒径可产生较低背压，从而使这类色谱柱能够应用于任何在LC 系统中运行的方法。将较大颗粒色谱柱转换为表面多孔颗粒色谱柱的优势在于可以显著节省时间和成本，因为后者在较高流速下的运行效果最佳，并且通过更短的色谱柱长度即可获得相似的分辨率[1，2]。 本应用简报介绍了来自 USP 的两种方法，用于分析炔诺酮和美雌醇药片，并将这些方法从建议的 5 pm 色谱柱转移到较短的2.7 pm 表面多孔 Agilent Poroshell 120色谱柱上进行。每种分析方法均与 USP 色谱系统的要求进行了比较，以确保色谱柱适用于该分析。对方法作出的所有修改均在USP 第621章的许可范围内。 材料与方法 使用安捷伦超低扩散套装(部件号5067-5189)中的0.075mm内径短毛细管，以及安捷伦液相色谱系统支架(部件部5001-3726)，对仪器安装进行优化，以获得尽可能低的柱外体积[3]。炔诺酮、美雌醇和黄体酮均购自西格玛奥德里奇公司。乙腈购自霍尼韦尔国际公司。采用的水为18 Mohm.cm Milli-Q 超纯水。 结果与讨论 炔诺酮和美雌醇药片的 USP 溶出度分析 图1显示了炔诺酮和美雌醇药片的 USP 溶出度分析，其中使用黄体酮作为内标。上方色谱图显示了按照 USP的规定使用4.6×250 mm、5 pm 色谱柱以及 L10填料执行的分析，在本示例中使用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-CN 色谱柱。这三种化合物在大约18 min 左右可轻松完成分离。 mAU Agilent ZORBAX Eclipse XDB-CN 200 洗脱顺序 100 1. 炔诺酮(0.5 mg/mL) 0 2. 黄体酮(0.5mg/mL) 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min mAU 3. 美雌醇(0.05 mg/mL) Agilent Poroshell 120 EC-CN .0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min mAU Agilent Poroshell 120 EC-CN 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 EC-CN， 3.0×100 mm， 2.7 pm (部件号695975-305) Agilent ZORBAX Eclipse XDB-CN， 4.6×250mm， 5 pm (部件号 990967-905)样品： 炔诺酮、美雌醇、黄体酮洗脱液： A=水B=乙腈进样量： 5 pL (4.6×250 mm 色谱木))，1pL (3.0×100 mm 色谱柱)流速： 1 mL/min (4.6×250 mm 色谱柱)，0.43 mL/min 或 0.85 mL/min (3.0×100 mm 色谱柱)等梯度： 40%B温度： 25°C检测器： 205 nm 仪器： Agilent 1290 Infinity LC 图 1.使用 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-CN 和 Agilent Poroshell 120 EC-CN色谱柱进行炔诺酮和美雌醇药片的 USP 溶出度分析。下方的色谱图显示了在最佳流速下使用Poroshell 120 EC-CN 色谱柱的分析结果。 根据 USP 第621章的指导原则，可将4.6×250 mm、5pm色谱柱进行的分析转移到3.0×100mm、2.7 pm 的 Poroshell 120EC-CN色谱柱上，如图1中间的色谱图所示。最下面的色谱图显示了使用同一根 Poroshell 120 EC-CN 色谱柱，在其最佳流速下，2.5 min 内便可实现期望的分离效果。 表1列出了 USP 色谱系统要求，以及图1所示三个色谱图各自的测定值。由此可见，5 pm 色谱柱和2.7 um Poroshell 120 色谱柱均适用于该分析。此外，与初始分析相比，在最佳流速下使用Poroshell 120 色谱柱时，不仅可以节省大量的时间和溶剂，还能提高效率并大幅降低成本。 表1.炔诺酮和美雌醇药片溶出度分析的USP 色谱系统要求和测定值(N、P、M分别表示炔诺酮、黄体酮和美雌醇的测定值) USP 色谱系统要求 5 pm (2mL/min) 2.7 pm (0.43 mL/min) 2.7 pm (0.85 mL/min) 重复进样的相对标准偏差不超过 3.0% N： 0.26% N： 0.92% N： 0.51% P：0.24% P：0.56% P： 0.56% M： 0.23% M： 0.39% M： 0.39% 美雌醇的最小理论塔板数为4000 M： 20304 M： 14790 M： 16297 炔诺酮和美雌醇色谱峰的拖尾因子不超过1.5 N： 1.01 N： 0.87 N： 0.92 M： 1.00 M： 0.83 M： 0.86 炔诺酮和美雌醇的相对保留时间分别约为0.4和1.0 N： 0.43 N： 0.48 N： 0.48 M： 1.0 M： 1.0 M：1.0 炔诺酮和美雌醇药片的USP 检测分析 图2显示了了诺酮和美雌醇药片的 USP 检测分析， 其中黄体酮作为内标(洗脱顺序同上)。上方色谱图使用 USP 指定的4.6×150mm、5um L7 (ZORBAX Eclipse XDB-C8)色谱柱得出。中间的色谱图则直接转移到了4.6×50 mm、2.7 um Poroshell 120EC-C8色谱柱上。下方的色谱图显示了在最佳流速下使用Poroshell 120 色谱柱的分析结果。使用 Poroshell 120 色谱柱时，这三种化合物的分析时间从16 min 缩减到2.5 min 以内。 条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 EC-C8， 4.6×50 mm， 2.7pm (部件号699975-906) Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8， 4.6×150 mm， 5um (部件号993967-906) 样品： 炔诺酮、美雌醇、黄体酮 洗脱液： A=水 B=乙腈 进样量： 3 pL (4.6×150 mm 色谱柱) ， 1 pL (4.6×50 mm色谱柱) 流速： 1 mL/min (4.6×150 mm 色谱柱)， 1 mL/min 或 2 mL/min (4.6 × 50 mm 色谱柱) 等梯度： 50%B 温度： 25°C 检测器： 200 nm 仪器： Agilent 1290 Infinity LC 图2.使用 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C8 和 Agilent Poroshell 120 EC-C8色谱柱进行炔诺酮和美雌醇药片 USP 的检测分析。下方的色谱图显示了在最佳流速下使用 AgilentPoroshell 120 EC-CN 色谱柱的分析结果。 由表2可见，所有色谱图均符合 USP 色谱系统要求。表面多孔的 Poroshell 120 色谱柱可轻松替代传统的5 pm 色谱柱，以节省成 本并提高效率。 表2.炔诺酮和美雌醇药片检测分析的 USP 色谱系统要求和测定值(N、P、M分别表示炔诺酮、黄体酮和美雌醇的测定值) USP 色谱系统要求 5 pm (1 mL/min) 2.7 pm (1 mL/min) 美雌醇色谱峰测定的柱效理论塔板数不低于6000 M： 13571 M： 10718 M： 10480 黄体酮和美雌醇之间的分离度不低于5.0 Rs (P，M)：11.1 Rs (P，M)： 10.9 Rs (P，M)： 10.8 重复进样的相对标准偏差不超过2.0% N：0.26% N：0.91% N： 1.4% P：0.29% P： 0.78% P：0.95% M： 0.28% M：0.59% M： 0.71% 美雌醇和炔诺酮的相对保留时间分别约为2.5和1.0 M： 3.6 M：3.3 M： 3.4 N： 1.0 N：1.0 N： 1.0 结论 在炔诺酮和美雌醇药片的 USP溶出度分析中，表面多孔的Agilent Poroshell 120色谱柱成功替代了传统的 5 pm 色谱柱。与较大的5 pm 色谱柱相比，尺寸更小的 Poroshell 120 色谱柱可以提高效率并节省时间和成本，同时满足所有的 USP 色谱系统要求。 ( 参考文献 ) 1. A. Gratzfeld-Husgen， E.Naegele。"Maximizing efficiencyusing Agilent Poroshell 120 columns".”(使用 AgilentPoroshell 120 色谱柱实现效率最大化)。应用简报，安捷伦科技有限公司。出版号5990-5602EN(2010年)。 ( 2. V .R. Meyer. Practical High Performance LiquidChromatography， Fourth Ed.， p. 34. Wiley (2004). ) 3. A. Mack。 “通过改善安捷伦1290 Infinity 液相色谱系统的超低扩散性能，实现安捷伦 ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18色普柱性能的最大化”。应用简报，安捷伦科技有限公司。出版号5990-9502CHCN (2011年)。 更多信息 这些数据仅代表典型结果。有关我们的产品和服务的详细信息，请访问我们的网站： www.agilent.com/chem。 www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对本资料中可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2013 中国印制 2013年1月7日 5991-1688CHCN Agilent Technologies 根据美国药典(USP) 中炔诺酮和美雌醇药片的分析方法对炔诺酮、美雌醇和黄体酮进行分析。与USP 建议的5 μm 色谱柱相比，表面多孔Agilent Poroshell 120 色谱柱能够改善溶出度分析。根据USP 第621 章的指导原则对每种方法进行调整，使得Poroshell 120 色谱柱能够达到节省时间和溶剂的目的。改进后所采用的表面多孔色谱柱符合所有的色谱系统要求。