牛奶中氟甲喹检测方案(液相色谱仪)

使用高效液相色谱法测定牛奶中喹诺酮类药物 应用简讯 食品检测与农业 作者 前言 ( 孙锦兰 ) 安捷伦科技(中国)有限公司 喹诺酮类药物(4-Quinolones)，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，这类药物抗菌谱广、抗菌力强，主要作用于动物敏感菌所致的呼吸道、消化道和尿道感染，同时可促进动物日增重和提高饲料转化率。本方法参照食品安全国家标准GB 29692-2013，建立了牛奶中喹诺酮类药物多残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。该方法适用于牛奶中恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星、沙拉沙星、二氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、氟甲喹和噁喹酸单个或多个药物残留的检测。 喹诺酮类药物的分析 对试料进行样品前处理。称取试料1±0.02g， 于15mL具塞离心管中，加乙腈-10%三氯乙酸溶液(取乙腈10mL，用10%三氯乙酸水溶液溶解并稀释至100mL)5mL， 漩涡混合2 min， 超声 5 min， 于4℃ 下5000 rpm 离心10 min， 取又清液备用。所得样品提取液经 Agilent Bond Elut Plexa 固相萃取柱净化(操作流程见图1)，复溶后涡旋混匀，于4℃下12000 rpm 离心6 min， 取上清液供高效液相色谱测定(液相色谱分析条件见表1)。 活化 分别用甲醇 3mL 和水3mL过柱 上样 取样本提取液过柱，控制流速至1mL/min 淋洗 用10%甲醇水溶液3mL林洗 洗脱用甲醇3mL洗脱， 收集洗脱液 将洗脱液在40℃下用氮气吹干，用起始流动相0.5mL复溶 图1.固相萃取操作流程图 表1.液相色谱条件 色谱柱1 Poroshell120 EC-C18， 4.6×100 mm， 2.7 pm 色谱柱2 Poroshell 120 EC-C18， 4.6×100 mm， 4 pm 流速 2 mL/min 柱温 50°C 进样体积 10 pL 荧光检测器 时间 (min) 激发波长(nm) 发射波长(nm) 检测波长 0 278 465 9.5 312 366 15 278 366 流动相 A)柠檬酸/乙酸铵缓冲液* B)乙腈 梯度洗脱 时间(min) B% 0 8 7 12 9 13 15 35 15.1 90 20 90 20.1 8 *柠檬酸/乙酸铵缓冲液：取柠檬酸10.56 g、乙酸铵7.87 g， 用水溶解并稀释至1000 mL， 用三乙胺调 pH至4.0，过滤膜 0 B 0 4 6 8 10 12 14 min 图2.分别采用色谱柱1、2分析喹诺酮类药物混合标准溶液(A)、牛奶空白试样(B)、牛奶空白添加喹诺酮类药物混合标准品试样(C)所得色谱图：图谱中 a、b、c、d、e、g、h、i、j分别代表了诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸，其浓度均为 0.2 ug/mL；f代表达氟沙星，浓度为0.06 pg/mL； k代表氟甲喹，浓度为 0.1 pg/mL ( 如图2所示，本方法比较了 4 um 和2.7 um 薄壳型填料色谱 柱的分析结果： ) ·4 um 色谱柱半峰宽比2.7 um 色谱柱增加了近30%，灵敏度有所下降 ·4 pm 色谱柱的压力较 2.7 um色谱柱低45%，更适合在400 bar 仪器上使用，2.7 pm 色谱柱主合在 600 bar 仪器上使用，可根据不同的仪器配置选择不同色谱柱 ·低柱压和大颗粒填料更耐“脏”样品 本文所采用的薄壳型填料色谱柱相比于传统5um 的全多孔性填料色谱柱，柱效更高，分析速度更快，在多组分复杂分析中体现出明显的优势。根据实验结果得到，在喹诺酮类药物分析中4 pm 的薄壳型色谱柱相比于2.7 pm 的薄壳型色谱柱，在满足分离要求的前提下，具有压力更低、更加耐用的优势，因此本文选用4 pm薄壳型色谱柱进行后续实验。 通过计算得到，本方法诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、噁喹酸的定量限为 50 pg/kg， 达氟沙星的定量限为15 pg/kg，氟甲喹的定量限为 25 ug/kg。 实验在 100-1600 ug/L 浓度范围内测试了各种喹诺类类药物的线性，所得结果表明所有化合物在此浓度范围内具有良好的线性相关性，相关系数R²均大于0.999，如表2所示。 表2.各喹诺酮类药物的回归方程及相关系数 喹诺酮类药物(4-Quinolones) 回归方程 相关系数R 诺氟沙星 (Norfloxacin) Y=270.9X+0.192 0.999 氧氟沙星 (Ofloxacin) Y=100.6X-0.078 0.999 环丙沙星 (Ciprofloxacin) Y=161.2X-0.015 0.999 培氟沙星 (Pefloxacin) Y=267.8X+0.075 0.999 洛美沙星 (Lomefloxacin) Y=107.9X-0.214 0.999 达氟沙星 (Danofloxain) Y=527.1X+0.404 0.999 恩诺沙星 (Bnrofloxacin) Y=358.7X+0.337 0.999 沙拉沙星 (Sarafloxacin) Y=118.3X-0.114 0.999 二氟沙星 (Difloxacin) Y=275.1X+0.028 0.999 噁喹酸 (Oxilinic acid) Y=51.40X+0.004 0.999 氟甲喹 (Flumequine) Y=89.58X-1.778 0.999 如表3所示，诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二二氟沙星、噁喹酸在 50-200 pg/kg， 达氟沙星在15-60 pg/kg， 氟甲喹在25-100 pg/kg 的添加浓度水平下，牛奶基质中各药物的空白样品加标回收率均为79.28%-99.14%， RSD (%) ≤7.42(n=6)， 表明该方法的准确度和精密度完全能满足喹诺酮类药物多残留分析的要求。 表3.牛奶基质中各喹诺酮类药物的空白样品加标回收率和 RSD 值(n=6) 消耗品订购信息 ( Agilent Bond Elut Plexa 固相萃取小柱： 60mg， 3mL， 部件号12109603 ) ( Agilent Porosh e ll 120 EC-C18色谱柱：4.6mmx10 0 mm， 2.7 pm， 部件号695975-902 ) 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 安捷伦科技(中国)有限公司，2016 2016年10月2日，中国印刷 5991-7522CHCN Agilent Technologies 喹诺酮类药物 (4-Quinolones)，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，这类药物抗菌谱广、抗菌力强，主要作用于动物敏感菌所致的呼吸道、消化道和尿道感染，同时可促进动物日增重和提高饲料转化率。本方法参照食品安全国家标准 GB 29692-2013，建立了牛奶中喹诺酮类药物多残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。该方法适用于牛奶中恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星、沙拉沙星、二氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、氟甲喹和噁喹酸单个或多个药物残留的检测。