猪活体样品、内脏样品、排泄物中猪瘟病毒检测方案(研磨机)

组织研磨仪在猪瘟病毒实时荧光RT-PCR 检测样品方法中的应用 猪瘟检测，主要监测手段是实时荧光定量 PCR 仪，大致流程步骤为：样品研磨(制备样品)----磁珠提取(提取 DNA，RNA)----结合专用试剂盒上实时荧光定量 PCR 检检测。而在样品研磨过程中采用新锐精仪组织研磨仪 GD200、GD300、GD16都可以很好运用到这一环节中来， 下面以GD16为例： 1器材和设备 1.1组织研磨仪 GD16 1.2离心管 1.3高速台式冷冻离心机：最大离心力12000g以上 1.4冰箱 1.5荧光PCR检测仪 1.6微量移液器和吸头 2样品的采集 2.1采样注意事项 采样及样品前处理过程中应戴一次性手套，样本不得交叉污染。 2.2采样工具 扁桃体采样器：鼻捻子、开口器和采样抢。使用前均应用3%氢氧化钠溶液浸泡5Min~10Min， 经清水冲洗。 灭菌牙签和 0.5ml 或 1.5ml离心管经(121±2)℃，高压灭菌15Min；剪、镊经160℃干烤2h。 2.3采样方法 2.3.1活体样品 固定活猪的上唇，用开口器打开口腔，用采样抢采取扁桃体样品，用灭菌牙签牙至0.5ml或1.5ml离心管并作标记，编号送实验室。取待检样品，按1：5倍体积加入 DEPC 水，于研钵或组织匀浆器中充分研磨， 3000g离心15min，取上清液转入离心管中编号备用。 2.3.2内脏样品 采取病死猪各种脏器(淋巴结、胰脏、脾脏、回肠、肝脏和肾脏)装入一次性塑料袋或其他灭菌容器，编号，送实验室。取 50mg~100mg待检样品，按1：5倍体积加入 DEPC 水，于研钵或组织匀浆器中充分研磨，3000g 离心15min， 取上清液转入离心管中编号备用。 2.3.3 4%EDTA抗凝血 用无菌注射器直接全血，注入含 1/10 4%EDTA 溶液的无菌容器中，充分混匀后编号备用。 2.3.4排泄物 挑取少许粪便样本于离心管中，加入适量生理盐水，振荡混匀，室温 3000g，离心管 15min，取上清液转入离心管中编号备用。其余液体排泄物直接转入离心心编号备用。 2.3.5细胞培养物 细胞培养物冻融3次，转入离心管中编号备用。 2.3.6存放与运送 采集或处理的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过 24h；若需长期保存，应放置-70℃冰箱，但应避免反复冻融(冻融不超过3次)。采集的样品密封后，采用保温壶或保温桶加冰密封，在6h~8h 之内运送到实验室。按照《兽医实室室生物安全技术管理规范》进行样品 的生物安全标识。 3.实时荧光 RT-PCR检测 猪瘟检测,主要监测手段是实时荧光定量PCR仪,大致流程步骤为:样品研磨(制备样品)----磁珠提取(提取DNA,RNA)----结合专用试剂盒上实时荧光定量PCR仪检测。而在样品研磨过程中采用新锐精仪组织研磨仪GD200、GD300、GD16都可以很好运用到这一环节中来，下面以GD16为例：取50mg~100mg待检样品，按1:5倍体积加入DEPC水，于研钵或组织匀浆器中充分研磨，3000g离心15min，取上清液转入离心管中编号备用。