新药研发中人血清蛋白与干扰素α-2b融合蛋白检测方案(毛细管电泳仪)

仪器实验报告Report of instrument experiment 日期 Date： 20181026 N lIn/Out Descriptions #1693 chemical mobilizer (350 mM acetic acid] 张超 37 类型 应用和实验 实验地点 北京实验室 38 urea solution CIEF 方法测定人血清蛋白与干扰素α-2b融合蛋白的等电点及普通电泳进行蛋白的分离和定性定量。 39 Outlet anolyte (200 mM phosphoric acid]sample+mastermix 40 Outlet 41 Outlet 42 Outlet Outlet Program. C：\Program Files (x86)\Lumex\Elforun205\cIEF\capillary conditioning_morning rinse.prg -旭 Operation Parameters Cycle Inlet UutletTTimeFPressure Voltage Wave length Temp. Status -Operations- Temperature 国 Rinse 36 5 2000 0 Rinse 2 36 2 2000 0 Wave length Rinse 3 36 5 2000 0 Rinse Autosampler 2 37 Rinse with SP Injection Sweeping AnalysisStage Autosampler Cycle end Pause Delete Clear Save Load Show all Close all To end Close Operation Parameters Status Run Close 分析条件 3. 实验结果及分析 按照上述分析条件进行分析，在分析完成后会得到两张谱图，一张为聚焦的谱图，一张为分析的谱 图，分析和定量主要是通过分析谱图。在本次实验中主要采用了三种 pI marker 5.5，9.5和10进行添加 作为标准，对于第一批次的样品 rIFN a -2b-HAS 20161101，分析图谱如下所示： 图中 35 min左右的峰为 pI为 9.5的 marker 的峰，51 min 左右的峰为 pI 为7.0的 marker 的峰，61min 左右的峰为 5.5的 marker 的峰。三个 marker 出峰都比较明显，其中的第三个峰为样品的峰，迁移时间约为56 min 左右。 pI t 12. 9.5 33.4 7 49.4 5.5 58.6 LQ h... pI 9.5 34.4 7 51.2 5.5 60.6 EO 另外为了确认是否在5.5与4.1之间是否有其他的蛋白，将5种标记物都配制走样，图谱如下： 寸 tQ0) 10 原液稀释4倍图谱(945 mg/L) 工 Method 0 200 400 600Area Time Height Area Concentration Dev..% File 11 8.868 0.308 61.04 451.2 10.6 C：A...1101_1237_5.mdf c.1 M 2 8.887 0.158 33.82 225.6 0.9 C：\...1101_1209_3.mdf M 3 8.862 0.593 127.5 902.5 6.6 C：\...1101_1334_3.mdf 4 8.985 1.086 260.1 1805 4.7 C：\...1101_1401_5.mdf Dev.% File 5 9.143 2.007 555.0 3610 1.6 C：\...1101_1428_7.mdf 1.6 C：\...1017_1400_1.mdf 2 7.468 0.428 58.06 472.5 4.4 C：\...1017_1504_3.mdf 队3 7.583 0.752 115.5 945.0 4.8 C：\...1017_1527_5.mdf 4 7.787 1.351 229.0 1890 5.7 C：\...1017_1602_8.mdf 5 8.065 2.485 493.8 3780 1.7 C：\...017_1637_11.mdf Update all calibration EPGs Report Save method as. Close 20161203批次样品 本次实验使用的样品为康宝集团客户提供的三个批次的重组人血清蛋白与干扰素α-2b融合蛋白样品（编号：rIFNα-2b-HAS 20161101、 rIFNα-2b-HAS 20161102、 rIFNα-2b-HAS 20161203），主要进行此蛋白的分离和定性定量实验。1. 实验条件仪器：LUMEX  Capel 205 毛细管电泳仪毛细管条件：长度42 cm，内径 75 um分析波长：280 nm分析电压：15 kV分析温度：20℃进样条件：30 mbar 进样10 秒分析时间：9 min缓冲液：15 mmol 磷酸盐缓冲液2. 实验及结果分析取HAS 20161101批样品，分别通过原液稀释2倍，4倍，8倍，16倍，共5个浓度浓度，浓度分别为236.25、472.5、945、1890和3780 mg/L。按照设置的条件进行分析，每个样品重复进样3次。空白：取水作为空白对照溶液。进样2次。