唾液中毒品检测方案(液质联用仪)

SSL-CA14-661 Excellence in ScienceLCMSMS-334 岛津全球应用技术开发支持中心上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996http：//www.shimadzu.com.cn ATLAS-USIS结合岛津“药物毒物快速筛查方法包”对唾液中毒物进行高自动化快速筛查、定性及定量 LCMSMS-334 摘要：本文结合岛津“药物毒物快速筛查方法包”(Ver.2)，将唾液样品用 ATLAS-USIS 自动前处理装置处理，以岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质普 LCMS-8045联用进行分析，实现了唾液中药物毒物的高自动化前处理和快速筛查、定性及半定量分析的有机结合，样品前处理和分析在30 min 内即可全部完成。9种加标物质阿普唑仑 (Alprazolam)、安非他命 (Amphetamine)、咖啡因 (Caffeine)、氯丙嗪 (Chlorpromazine)、氯氮平 (Clozapine)、艾司唑仑(Estazolam)、氯胺酮(Ketamine)、利多卡因 (Lidocaine)、3，4-亚甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)均被筛查出；依据MRM同时触发产物离子扫描结果进行二级质谱库搜索，同时依据方法包内置的标准曲线得到了检出物的半定量分析结果。 关键词： ATLAS-USIS 药物毒物快速筛查方法包超高效液相色谱仪三重四极杆质谱唾液 近些年来，毒品泛滥日益成为受关注的社会问题，由涉毒活动带来的各种违法犯罪活动使得公安系统对于贩毒吸毒的打击越发严格。其中，尿液、汗液、唾液及毛发等生物样品中的毒物药物检测是确认是否涉毒等案件的重要依据。由于这类样品的基质均比较复杂，因此在分析前通常需要对样品进行前处理。常见的前处理方法有固相萃取、固相微萃取、液-液萃取等，这些方法通常较为繁琐，耗时耗力。 岛津公司ATLAS-USIS 自动前处理装置可以对唾液、尿液、血液等样品中的违禁药物自动进行液-液萃取，复溶后可进行液质联用分析或气质联用分析，自动 实验部分 化程度高，大量节省时间，提高效率。 另外，岛津公司开发的“药物毒物快速筛查”方法包，以 Diazepam-d5(正离子模式检测)和 Phenobarbital-d5(负离子模式检测)作为内标，无需准备标准样品，即可进行161种药物、毒物的同时筛查、定性和半定量分析。 本文利用岛津 ATLAS-USIS 自动前处理装置，结合岛津“药物毒物快速筛查方法包”(Ver.2)，使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱 LCMS-8045联用，实现了尿样中9种毒物的高自动化前处理、快速筛查、定性及半定量分析。 1.1仪器 本实验使用岛津 ATLAS-USIS 自动前处理装置及超高效液相色谱仪 LC-30A与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045联用系统。具体配置为 LC-30ADx2输液泵， DGU-20A， 在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器， CTO-30AC 柱温箱，CBM-20A 系统控制器， LCMS-8045 三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.86 色谱工作站。 图1ATLAS-USIS系统(左)和LCMS-8045(右) 柱温：40℃ 进样量：10uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见表1。 流速：0.3mL/min 表1：梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 7.50 Pumps Pump B Conc. 95 10.00 Pumps Pump B Conc. 95 10.01 Pumps Pump B Conc. 5 15.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式： ESI 接口温度：300℃ 加热气：空气10.0L/min雾化气：氮气3.0 L/min ＤL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 干燥气：氮气10.0L/min 扫描模式：多反应监测(MRM) 碰撞气：氩气 MRM参数：见方法包 1.3样品前处理方法 (1)ATLUS-USIS 自动前处理装置原理简介：该装置针对唾液、尿液、血液等样品中的毒物等自动进行液-液萃取制备样品。其原理如图1所示：向唾液中加入乙酸乙酯，待检物被萃取。经离心、乳化检测后取出上清液可进行GC/GC-MS分析；清清液进一步用盐酸处理，蒸发烘干、复溶后可进行 LC-MS分析。 图1ATLUS-USIS自动前处理装置原理示意图 (2)样品处理：取准确体积的Alprazolam、Amphetamine、Caffeine、Chlorpromazine、Clozapine、Estazolam、Ketamine、Lidocaine、MDMA 及内标 Diazepam-d5标样储备液(0.1 mg/mL)，加到空白唾液中，配制得到浓度为200ng/mL 的基质加标溶液，用 ATLAS-USIS 自动前处理装置的 MainSeq 2 程序进行前处理，将前处理得到的样品用1.5mL 甲醇溶解， 0.22 um 滤膜过滤后上机分析(注： ATLAS-USIS 的 MainSeq 2 程序处理样品时，取3mL唾液，用4mL乙酸乙酯萃取，然后取2 mL 上清液进行烘干处理，最后手动用移液枪取1.5 mL 甲醇将烘干剩余物溶解)。 结果与讨论 2.1样品筛查结果 参照“药物毒物快速筛查方法包”中的方法 SSS_RapidTox Screening_Ver2.lcm 对样品按照上述1.3的前处理方法处理后进样分析，9种加标物质Alprazolam、Amphetamine、Caffeine、Chlorpromazine、Clozapine、Estazolam、Ketamine、Lidocaine、MDMA 均被筛查出。MRM 色谱图如图2所示。 图2检出化合物MRM色谱图 2.2谱库搜索结果 “SSS_RapidTox Screening Ver2.lcm”方法中包含触发产物离子扫描功能：当超过设定的筛查扫描阈值时，同步筛查扫描功能启动，可自动对检出化合物进行产物离子扫描，得到检出物的二级质谱并进行谱库搜索，得到匹配度，根据匹配度可对检出物进行进一步定性。本次分析得到的匹配度结果和搜库结果分别如表2和图3~10(图中上部为目标化合物二级质谱，下部为谱库中相应化合物的标准二级质谱)所示。 表2谱库搜索匹配度结果表 编号 化合物 匹配度% 1 Alprazolam 91 2 Amphetamine 96 3 Caffeine 71 4 Chlorpromazine 92 5 Clozapine 98 6 Estazolam 94 7 Ketamine 94 8 Lidocaine 99 9 MDMA 97 图33Alprazolam二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 LCMSMS-334 图4 Amphetamine二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 图5Caffeine二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 图6 Chlorpromazine二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 图7 Clozapine二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情兄 LCMSMS-334 图8. BEstazolam二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 库搜搜结果 一 口 图9 Ketamine二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 LCMSMS-334 图10 Lidocaine二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 图11MMDMA二级质谱图(上)与库中二级质谱图(下)匹配情况 2.4利用内标物半定量分析结果 方法包中方法储存了用于检测正离子的 Diazepam-d5 及用于检测负离子的 Phenobarbital-d5 作为内标的每一化合物的校准曲线，因此无需准备标准品即可进行半定量分析。通过该方法获得的半定量结果可供实验人员参考，如果需要获取精确的定量结果，则需要根据每个真正标准品进行的定量操作。在分析的同时如果选择报告输出功能，并加载方法包中附带的报告模板，则分析完成后可直接生成带定量结果的报告。 表3各个化合物半定量分析结果表 编号 化合物 半定量结果 (ng/mL) 1 Alprazolam 168 2 Amphetamine 261 3 Caffeine 181 4 Chlorpromazine 107 5 Clozapine 170 6 Estazolam 136 7 Ketamine 264 8 Lidocaine 206 9 MDMA 287 结论 本文结合岛津“药物毒物快速筛查方法包”(Ver.2)， 将唾液样品用 ATLAS-USIS 自动前处理装置处理后，以岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱 LCMS-8045 联用进行分析，实现了唾液中药物毒物的高自动化前处理和快速筛查、定性及半定量分析的有机结合，样品前处理和分析在30 min 内即可全部完成。9种加标物质Alprazolam、Amphetamine、Caffeine、Chlorpromazine、Clozapine、Estazolam、Ketamine、Lidocaine、MDMA均被筛查出；依据 MRM 同时触发产物离子扫描结果进行二级质谱库搜索，同时依据方法包内置的标准曲线得到检出物的半定量分析结果。 附录：方法包中包含化合物清单 40 Clomipramine 94 MDMA 148 Thiamylal (neg) 41 Clonazepam 95 Medazepam 149 Timiperone 42 Clotiazepam 96 Mefenamic acid 150 Tofisopam 43 Cloxazolam 97 Memantine 151 Topiramate 44 Clozapine 98 Mepivacaine 152 Trazodone 45 Cocaine 99 Mequitazine 153 Triazolam 46 Codeine 100 Metformin 154 Trihexyphenidyl 47 Colchicine 101 Methamphetamine 155 Vardenafil 48 Desipramine 102 Methomyl 156 Valproic Acid(neg) 49 Desmethylclotiazepam 103 Methylephedrine 157 Warfarin 50 Desmethyldiazepam 104 Methylphenidate 158 Zolpidem 51 Dextromethorphan 105 Mexazolam 159 Zopiclone 52 Diazepam 106 Mexiletine 160 Zopiclone-N-oxide 53 Diclofenac 107 Mianserin 161 Zotepine 54 Dihydrocodeine 108 Midazolam 注：负离子模式在括号中进行了标注(neg)，其余采用正离子模式 本文结合岛津“药物毒物快速筛查方法包”（Ver. 2），将唾液样品用ATLAS-USIS自动前处理装置处理，以岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱LCMS-8045联用进行分析，实现了唾液中药物毒物的高自动化前处理和快速筛查、定性及半定量分析的有机结合，样品前处理和分析在30 min内即可全部完成。9种加标物质阿普唑仑(Alprazolam)、安非他命(Amphetamine)、咖啡因(Caffeine)、氯丙嗪(Chlorpromazine)、氯氮平(Clozapine)、艾司唑仑(Estazolam)、氯胺酮(Ketamine)、利多卡因(Lidocaine)、3,4－亚甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)均被筛查出；依据MRM同时触发产物离子扫描结果进行二级质谱库搜索，同时依据方法包内置的标准曲线得到了检出物的半定量分析结果。